男性不育症精子异常的原因及其与相关病原体的关系

一、男性不育症精子异常的原因及与有关病原体关系的探讨（论文文献综述）

梁景辉^[1]（2021）在《桂药生精胶囊对不育症大鼠睾丸组织Bcl-2/Bax、Caspase-9/3表达的影响》文中研究说明目的:观察桂药生精胶囊对环磷酰胺（Cyclophosphamide,CTX）诱导的不育症（Male Infertility,MI）大鼠睾丸组织Bcl-2、Bax、Caspase-9和Caspase-3表达的影响。方法:采用SPF级雄性SD大鼠50只,随机抽取10只为空白组、40只为模型组,空白组予腹腔注射生理盐水,模型组予腹腔注射CTX（40mg/kg）,连续5天以建立MI大鼠模型。造模结束后随机抽取空白组大鼠3只、模型组大鼠5只进行模型验证,确定造模成功后将模型组大鼠均分为模型组、阳性对照组、桂药低剂量组、桂药中剂量组、桂药高剂量组,并开始进行干预。空白组与模型组给予生理盐水（1m L/d）灌胃,阳性对照组给予缬沙坦胶囊（1.44mg/m L/d）灌胃,桂药组给予桂药生精胶囊低、中、高剂量（28.5mg/ml/d、57mg/ml/d、114mg/ml/d）灌胃,连续4周。干预结束后测量大鼠体质量,在无菌条件下摘取大鼠睾丸、附睾称重,采用扩散法检测大鼠附睾精子参数、HE染色法观察大鼠睾丸组织结构的变化、IHC染色法检测各组大鼠睾丸组织Bcl-2、Bax、Caspase-9和Caspase-3的表达水平。结果:1.模型验证:模型组大鼠体质量、睾丸及附睾质量、精子密度、运动精子百分率、前向运动精子百分率均较空白组显着降低,模型组大鼠睾丸组织结构形态可见明显病理改变,此次大鼠模型制备符合MI模型标准。2.大鼠睾丸病理学观察:桂药低、中、高剂量组睾丸组织结构较模型组与阳性对照组有明显改善,生精小管形态趋向规则,基底膜增厚,纤维肌细胞与支持细胞数量分布均匀,精原细胞与精母细胞排列趋于整齐、层数增多,细胞外膜破损可见修复,精子细胞与精子数量增多,微血管供血改善,炎性细胞浸润减少。其中桂药高剂量组睾丸组织形态结构未见明显病理改变,改善最为明显,与空白组比较无明显差异。3.大鼠体质量:干预后桂药组、阳性对照组体质量与模型组比较显着增高（P<0.01）,且桂药中、高剂量组优于阳性对照组（P<0.05）,桂药高剂量组体质量与空白组比较无明显差异（P>0.05）。4.大鼠睾丸及附睾质量:（1）睾丸质量:桂药组、阳性对照组睾丸质量与模型组比较显着增高（P<0.01）,且桂药高剂量组优于阳性对照组（P<0.05）,桂药高剂量组睾丸质量与空白组比较无明显差异（P>0.05）。（2）附睾质量:桂药组、阳性对照组附睾质量与模型组比较上升（P<0.05）,且桂药高剂量组优于阳性对照组（P<0.05）,桂药高剂量组附睾质量与空白组比较无明显差异（P>0.05）。5.大鼠精子参数:（1）精子密度:桂药组、阳性对照组精子密度与模型组比较显着增高（P<0.01）,且桂药组优于阳性对照组（P<0.01）,桂药高剂量组精子密度与空白组比较无明显差异（P>0.05）。（2）运动精子百分率:桂药组、阳性对照组运动精子百分率与模型组比较显着增高（P<0.01）,且桂药中、高剂量组优于阳性对照组（P<0.01）,桂药高剂量组运动精子百分率与空白组比较无明显差异（P>0.05）。（3）前向运动精子百分率:桂药组、阳性对照组前向运动精子百分率与模型组比较显着增高（P<0.01）,且桂药中、高剂量组优于阳性对照组（P<0.01）,桂药中、高剂量组前向运动精子百分率与空白组比较无明显差异（P>0.05）。6.大鼠睾丸组织Bcl-2的表达情况:桂药组、阳性对照组Bcl-2阳性表达率与模型组比较显着增高（P<0.01）,且桂药组优于阳性对照组（P<0.05）,桂药高剂量组Bcl-2阳性表达率与空白组比较无明显差异（P>0.05）。7.大鼠睾丸组织Bax的表达情况:桂药组、阳性对照组Bax阳性表达率与模型组比较显着降低（P<0.01）,且桂药中、高剂量组优于阳性对照组（P<0.01）。8.大鼠睾丸组织Caspase-9的表达情况:桂药组、阳性对照组Caspase-9阳性表达率与模型组比较显着降低（P<0.01）,且桂药中、高剂量组优于阳性对照组（P<0.01）。9.大鼠睾丸组织Caspase-3的表达情况:桂药组、阳性对照组Caspase-3阳性表达率与模型组比较显着降低（P<0.01）,且桂药高剂量组优于阳性对照组（P<0.05）。结论:桂药生精胶囊能改善MI大鼠睾丸病理损伤,提高MI大鼠体质量、睾丸及附睾质量、精子总数及活动力,并能上调睾丸组织Bcl-2的表达,下调Bax、Caspase-9、Caspase-3的表达,且呈明显的量效关系,这可能是桂药生精胶囊治疗MI的作用机理之一。

袁晟^[2]（2021）在《针挑治疗肾虚血瘀型男性不育畸形精子症的机制研究》文中研究指明目的:当今男性不育症影响着世界上超过两千万例患者,已经成为影响男性生殖健康的主要问题之一。畸形精子症常常是男性不育症的一种主要症状,该种疾病的发病机制仍没有被证实,目前临床治疗主要方式是通过药物进行,受到多种因素的共同影响,因此,治疗效果并不显着,可通过辅助生殖技术来进行治疗,最终实现生育。世界上约有8%-12%的夫妇患有不孕不育症,而在这些夫妇当中,其中又有40%-50%是由“男性因素”造成的,并且精液异常是最为普遍的,异常精子至少占1/3左右。精子和卵子能否进行正常的判别主要取决于精子的形态,当精子形态正常时,两者才能够进行正常的相互作用;此外,精子是否能够受精成功也取决于其是否具备正常的形态。精子异常的发病机制十分复杂,影响因素众多,包括以下内容:染色体出现异常、基因发生突变以及缺失、机体的激素失调、免疫功能缺陷、炎症感染等,甚至周围环境也严重影响精子的发育,如在有辐射、有毒的情况下,精索发生了静脉曲张也会影响精子。研究表明,机体内部的氧化应激和精子DNA损伤主要和精子活力有关。相关的研究认为,诸多有害的因素导致精子表面蛋白受体受到了抑制,不能正常接收信号,信号通路的传导受到了阻碍,导致精子的结构出现了异常变化,使精子无法进行正常的运动。其中,如今的研究热门课题大多集中在活性氧过剩、氧化应激和精子DNA损伤等方面。然而,对于流程信息传输的信号路径还没有统一的认识。作为经典的核转录信号转导通路,JAK/STAT信号转导通路能够对细胞的正常生长进行调整,目前,国内外有许多研究表明,JAK2/STAT3信号通路可以基于线粒体介导的氧化损伤活动,以此实现调节细胞凋亡的生命活动;同时,通过激活以及控制JAK2/STAT3信号通路可以调整损伤反应以及细胞凋亡的整个过程。此外,体外实验表明,实验中如果加入了STAT3抑制剂,观察发现精子的活力降低,最终会影响精子的受精过程,使其受精能力降低。但该种信号通路现阶段和精子的形态与对应的功能,以及JAK2/STAT3信号通路的改变是否会造成精子的形态以及功能发生改变,现在还是一个未知数。因此,对于JAK2/STAT3信号通路同精子形态和功能联系的深入研究,极大程度上来说促进了研究精子出现病理改变过程中的发病机制,能够更好的应用在临床上治疗男性不育。中医治疗不育症在中国已有2000多年的悠久历史,从古时候开始就有男性患有不育或精子出现异常,这种患者被称为“无子”,该种疾病的发病机制较复杂,在一定程度上与肾虚和血瘀有紧密的联系。各种因素会导致肾阳不足、下焦虚寒,缺乏温煦,精子出现损伤病变;或肾阴虚,阴虚火旺,煎灼精液,精子灼伤或精气不足,不能促进血液循环,阳虚血管呈现寒凝且血流速度缓慢,甚至出现淤堵现象都会导致出现病态变化。精子不能生存在适宜的环境中,产生畸形精子的可能性增大,精子功能异常,引起不育。对于临床治疗方面来说,针挑疗法可以改善精子存活的微环境,同时能够增加血流量,抵抗缺血、缺氧和氧化应激,从而保护精子免受损伤,治疗异常精子不育。本文采用针挑疗法治疗肾虚血瘀型男性不育症,主要使用精液分析（CASA）的方法,辅助用电脑进行分析,将精子进行染色,并运用流式细胞术（FCM）来检测精子的常规参数、形态以及精子的DNA是否缺失,还要对患者配偶进行跟踪。目的就是探讨针挑治疗对不育症患者的精液参数3、精子形态、精子DFI及妊娠效果等诸多方面治疗效果的分析。除此之外,该研究也使用了蛋白质印迹技术（WB）,通过观察、比较正常与畸形精子的JAK2和STAT3蛋白的表达,从而探究这两种蛋白和精子形态的关联。为了解针挑治疗对精液参数、精子形态及JAK2/STAT3蛋白表达水平的影响,选取CASA、精子形态染色及WB检测治疗前后的精液参数、精子形态及JAK2、STAT3蛋白表达水平的变化。将不同浓度的这两种蛋白的抑制剂（AG490）加入到正常的精子中,此外,分别基于精子形态染色、流式细胞术检测精子的形态和其DFI状况,探究在精子形态改变过程中,JAK2/STAT3信号通路的作用机制,发掘这两种信号通路对精子DFI的作用,有助于研究精子出现畸形的病理机制,并为临床治疗男性不育症提供理论依据。方法:本研究包括临床研究和实验研究两方面:一、临床研究方法:选择2017年3月30日～2018年9月30日在暨南大学附属第一医院（广州华侨医院）新医针挑科因西医维生素E抗氧化等治疗完成后的病患总计80例,但这些病患的临床治疗效果都欠佳,他们的年龄范围都在23～45岁,同时他们都被诊断为男性不育症和精子异常,除此之外要求中医辨证证型为“肾虚血瘀证”的患者。配偶均正常,可受孕。按照随机抽样的原则,受试者分为针挑组（A组）和抗氧化治疗组（B组）。A组（共计40例）:接受针挑治疗（使用国家专利挑针ZL98243187.2,这项专利是由暨南大学第一附属医院的陈栋教授所发明）,治疗的全过程共计12周;B组（共计40例）:每日给患者提供天然维生素E,口服,剂量为100mg,一日2次,治疗的全过程为12周。治疗前及治疗后12周分析比较两组的精液情况,通过对精子的数量、浓度、总活力以及相关参数等方面进行分析。基于Diff-Quik法进行检测精子的形态。同时要计算出正常精子百分占比、异常精子的百分率、异常精子指数（TZI）、精子畸形的指数（SDI）、头缺损率、颈段以及中部的缺损率、尾段的主段缺损率和残余细胞质率;基于密度梯度离心的方法来进行提取精子,以及基于流式细胞仪检测精子形态DFI。经过12周后的全过程的追踪后,及时观察两组患者配偶的妊娠结局,同时观察临床妊娠率、流产率和活产率等方面。二、实验研究方法:（一）使用随机抽样法收集2017年3月30日～2018年9月30日在暨南大学附属第一医院（广州华侨医院）新医针挑科因西医维生素E抗氧化等治疗完成后的病患总计40例,但这些病患的临床治疗效果都欠佳,他们的年龄范围都在23～45岁,同时他们都被诊断为男性不育症和精子异常,除此之外要求中医辨证证型为“肾虚血瘀证”的患者。研究对象为男性不育和精子畸形患者（精子异常组）,同时选择40例健康男性和正常精液作为对照组（正常精子组）,这些健康男性都是同期同年龄范围在暨南大学附属第一医院男性专科诊断为健康的男性。用CASA来对这两组患者的精液情况进行分析,主要比较精子的总数、浓度、活力以及运动有关参数;对精子的形态展开检测,并通过计算得到正常精子和异常精子分别所占的比例,此外,并计算出异常精子指数（TZI）以及精子畸形的指数（SDI）、头缺损率、颈段以及中部的缺损率、尾段的主段缺损率和残余细胞质过剩率;基于密度梯度离心的方法来进行提取精子,同时采用WB法检测JAK2和STAT3的蛋白表达水平。（二）方法:将40例精子异常患者随机分为A组和B组。A组（20例）采用针挑（使用国家专利挑针ZL98243187.2,这项专利是由暨南大学第一附属医院的陈栋教授所发明）,治疗的全过程为12周;B组（20例）为空白组,未进行任何药物治疗;治疗前后12周内,基于CASA分析两组患者的精液常规参数,得出总精子数和精子活力浓度,测定精子总活力和精子运动等诸多参数;基于Diff-Quik法进行检测精子的形态。同时要计算出正常精子百分占比、异常精子的百分率、异常精子指数（TZI）、精子畸形的指数（SDI）、头缺损率、颈段以及中部的缺损率、尾段的主段缺损率和残余细胞质过剩率;基于密度梯度离心的方法来进行提取精子,同时采用WB法检测JAK2和STAT3的蛋白表达水平。（三）使用随机抽样法收集2017年3月30日～2018年9月30日在暨南大学附属第一医院（广州华侨医院）男性专科就诊的健康体检男性40例,正常男性的精子年龄为23-45岁范围,当为诊断为健康后选为研究目标;密度梯度离心后,把不同浓度（0、25、50、100μmol/L）的JAK2/STAT3抑制剂AG490和精子放到体外,然后孵育3小时,再基于Diff-Quik法来进行检测精子的形态,并计算正常精子的百分比。同时,采用流式细胞术来测得精子的DFI。结果:一、临床研究结果:针挑组患者使用针挑进行治疗后,结果发现正常精子的数量、活动率以及向前运动情况（PR）都比治疗前高,精子的DFI、头端缺陷率、尾段缺陷率和残余细胞质过剩率低于治疗前,差异具有统计学意义（P<0.05）;针挑组治疗后精子畸形指数（TZI）、精子异常指数（SDI）、颈段及中部的缺失率均低于治疗前,而且其精液量、浓度、精子总数也明显高于治疗前的表现,但比较差异无统计学意义（P>0.05）。维生素E组精子形态正常率高于治疗前,尾部缺损率较治疗前低,差异均有统计学意义（P<0.05）。此外,结果发现在治疗后,精子的畸形指数TZI、异常指数SDI均降低,头端和缺陷率、残余细胞质超额速率也分别有所降低;与治疗前相比,精液的总量、精子的总数、精子活力和精子前向运动（PR）显着的增加,两组比较差异无统计学意义（P>0.05）;正常形态精子的比例,精子数量、精子的运动性,头端缺陷率和颈段及中部的缺陷率增加,但对比治疗前后,发现精子的畸形指数（TZI）和异常指数（SDI）、精子浓度、精子总数无统计学差异（P>0.05）。二、实验研究结果:（一）对于正常精子组和异常精子症组来说,JAK2和STAT3蛋白在正常组中的表达水平更高,且发现这两种蛋白在异常精子症组的表达水平明显的下降,异常精子组JAK2、STAT3蛋白表达水平明显低于正常精子组,表明正常精子组和异常精子症组的差异具有统计学意义（P<0.05）。正常精子组和异常精子组中正常精子百分比与JAK2、STAT3蛋白表达呈正相关,差异均表现为统计学意义（P<0.05）;异常精子百分比、TZI、SDI均与这两种蛋白表达呈负相关关系,且差异有统计学意义（P<0.05）;头、颈、中段缺损率与JAK2蛋白、STAT3蛋白表达呈非线性关系;残余细胞质过剩率同STAT3、JAK2蛋白表达不呈相关,表明差异不具有统计学意义（P>0.05）。（二）比较针挑组和非治疗组中JAK2蛋白和STAT3蛋白的表达情况,发现这两种蛋白在针挑组中的表达高于非针挑组,两组比较差异具有统计学意义（P<0.05）。经过对二者的对比发现,针挑组治疗后,正常精子形态百分比、精子活力、PR、以及两种蛋白的水平均明显增高,与治疗前相比,具有统计学差异（P<0.05）。此外,结果发现精液体积、以及精子浓度较治疗前高,TZI、SDI均低于治疗前,差异表现为无统计学意义（P>0.05）;正常精子形态的比例、精液量、精子浓度、精子的快速前向运动性、精子的慢速前向运动性、精子的运动性、精子活力明显高于治疗前,TZI和JAK2蛋白质在非治疗组高于治疗前,SDI和STAT3高于治疗前,同时蛋白质表达低于治疗前,表现的差异具有明显的统计学意义（P<0.05）。（三）对比使用AG490孵育和未使用AG490孵育的正常形态精子百分比和精子DFI结果显示,正常形态精子百分比随AG490浓度的增加而降低,精子DFI随AG490浓度的增加而增加,表现的差异具有明显的统计学意义（P<0.05）,但是两者之间不存在相关性（r=0.24,P=0.14）。结论:1.针挑治疗可以提高精子形态正常率,降低精子DFI,降低精子头尾缺损率,提高配偶妊娠率。2.对于正常精子组和异常精子症组来说,正常精子组JAK2和STAT3蛋白表达高于异常精子组,同时JAK2和STAT3蛋白在异常精子症组的表达水平明显的下降,异常精子组JAK2、STAT3蛋白表达水平明显低于正常精子组。针挑可提高精子形态正常率,可能与JAK2、STAT3蛋白表达增加及JAK2/STAT3信号通路激活有关。3.AG490是一种JAK2/STAT3抑制剂,可降低正常精子形态百分比,增加精子DFI。正常精子百分比的下降和精子DFI的增加可能与JAK2/STAT3信号转导通路的抑制有关。

盛文^[3]（2021）在《基于Bcl-2/Bax通路及线粒体功能探讨龟甲胶治疗肾阴亏虚型少弱精子症的作用机制》文中研究说明目的:据流行病学调查显示,男性少弱精子症的发病率日益增高,但该病的治疗手段仍十分有限,治疗效果却不尽如意,而辅助生殖技术花费巨大,药物治疗缺乏特异性的药物。中药龟甲胶（TESTUDINIS CARAPACIS ET LASTRI COLLA,TCLC）性味咸、甘,凉。归肝、肾、心经,为中药龟甲经水煮、浓缩制成的固体胶,具有滋阴补肾、养血止血的作用,主要治疗阴虚潮热,骨蒸盗汗,腰膝酸软,血虚萎黄,崩漏带下等症。本研究的目的是探讨TCLC对肾阴亏虚型少弱精子症大鼠精子数量、精子活力、血清睾酮水平、线粒体功能、生精细胞凋亡等指标的影响以及相应蛋白的表达的干预情况,旨在为男性少弱精子症不育的药物治疗提供新的治疗方案。方法:1.动物分组:雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠200±20g,10周龄。将大鼠随机分为正常组、模型组、TCLC低剂量组、TCLC中剂量组、TCLC高剂量组、阳性对照组、TCLC+左卡尼汀组7组,每组15只。所有动物程序均经湖南中医药大学动物福利委员会批准。2.动物模型的制备:肾阴亏虚型少弱精子症大鼠模型的制备是使用左旋甲状腺素诱导制成。每日灌胃给与左旋甲状腺素给药剂量为45ug·kg-1·d-1,连续30天,期间观察模型组情况。3.药物干预:模型制备成功后,于动物造模成功后的第1天开始给药,正常组、模型组灌胃给与生理盐水,TCLC低、中、高剂量组分别给与0.5g/kg/d、1g/kg/d、2g/kg/d TCLC,阳性对照组给与8ml/kg/d的左卡尼汀,TCLC+左卡尼汀组给与2g/kg/d TCLC+8ml/kg/d左卡尼汀,为期30天。本次实验过程中,每周对大鼠进行一次称重,根据称重结果调整每只大鼠的给药剂量,药物干预过程结束后,使用戊巴比妥钠处死大鼠。4.检测以下指标:（1）使用液相色谱-质谱联用法测定TCLC氨基酸含量;（2）检测各组大鼠睾丸组织的质量;（3）使用计算机辅助法分析方法（CASA）分析各组大鼠精液质量;（4）使用流式细胞仪检测各组大鼠生精细胞的总凋亡率情况;（5）使用流式细胞仪检测各组大鼠生精细胞线粒体通透性转换孔（m PTP）的功能;（6）使用酶联免疫吸附法（ELISA）检测各组大鼠血清睾酮（T）水平;（7）使用蛋白印迹法（Western Blot）检测各组大鼠生精细胞抗凋亡蛋白（Bcl-2）、促凋亡蛋白（Bax）、（cleaved-caspase3）以及m PTP功能的关键蛋白VDAC和ANT;（8）使用酶联免疫吸附法（ELISA）检测各组大鼠生精细胞线粒体呼吸链复合物（分别为:NADH-Q氧化还原酶（复合物I）、琥珀酸-Q氧化还原酶（复合物II）、UQ-细胞色素C氧化还原酶（复合物III）、细胞色素C氧化酶（复合物IV）、ATP合成酶（复合物V））的活性;（9）使用苏木精——伊红染色法（HE）观察各组大鼠睾丸生精细胞和间质细胞的分布变化。结果:1.TCLC氨基酸含量:检测到中药TCLC中含18中氨基酸,含量差异较大,其中含量超过5%的氨基酸有:丙氨酸（Ala）18.91%、甘氨酸（Gly）12.60%、脯氨酸（Pro）6.83%、谷氨酰胺（Glu）6.52%、羟脯氨酸（Hyp）5.49%、精氨酸（Arg）5.02%;2.大鼠睾丸组织的质量:与正常组相比,模型组单侧睾丸质量明显降低（p<0.01）;TCLC低剂量组、TCLC中剂量组、TCLC高剂量组、阳性对照组、TCLC+左卡尼汀组单侧睾丸质量明显高于模型组（p<0.01）;TCLC高剂量组单侧睾丸质量明显高于阳性对照组（p<0.05）;TCLC高剂量组与TCLC+左卡尼汀组单侧睾丸质量无明显差异（p>0.05）;3.大鼠精液质量:大鼠精液参数主要包括精子曲线速度（VCL）（μm/s）、精子活力（%）和精子浓度（x106）。与模型组相比,TCLC中剂量组、TCLC高剂量组曲线速度（μm/s）、精子活力（%）和精子浓度（x106）均有明显改善（p<0.05）;与阳性对照组相比,TCLC+左卡尼汀组精子浓度有明显改善（p<0.05）;4.大鼠生精细胞的的总凋亡率:与正常相比,模型组生精细胞总凋亡率明显增高（p<0.01）,TCLC中剂量组、TCLC高剂量组、阳性对照组、TCLC+左卡尼汀组生精细胞总凋亡率较模型组有明显降低（p<0.05）;5.大鼠生精细胞m PTP:与模型组相比,TCLC中剂量组、TCLC高剂量组、阳性对照组、TCLC+左卡尼汀组生精细胞m PTP开放情况有明显好转（p<0.05）;6.大鼠血清T水平:与模型组相比,TCLC中剂量组、TCLC高剂量组、阳性对照组、TCLC+左卡尼汀组大鼠血清T水平有明显增高（p<0.05）;与阳性对照组相比,TCLC+左卡尼汀组大鼠血清T水平有明显增高（p<0.05）;7.大鼠生精细胞Bcl-2、Bax、cleaved-caspase3以及m PTP关键蛋白VDAC和ANT:与正常组相比,模型组大鼠生精细胞Bcl-2明显降低（p<0.05）;TCLC中剂量组、TCLC高剂量组、阳性对照组、TCLC+左卡尼汀组大鼠生精细胞Bcl-2明显高于模型组（p<0.05）;与正常组相比,模型组大鼠生精细胞Bax、cleaved-caspase3明显升高（p<0.05）;TCLC中剂量组、TCLC高剂量组、阳性对照组、TCLC+左卡尼汀组大鼠生精细胞Bcl-2明显低于于模型组（p<0.05）;与正常组相比,模型组大鼠生精细胞VDAC和ANT明显降低（p<0.05）;TCLC中剂量组、TCLC高剂量组、阳性对照组、TCLC+左卡尼汀组大鼠生精细胞VDAC和ANT明显高于模型组（p<0.05）;8.大鼠生精细胞线粒体呼吸链复合物Ⅰ-Ⅴ:与正常组相比,模型组大鼠生精细胞线粒体呼吸链复合物Ⅰ-Ⅴ活性明显降低（p<0.05）;TCLC中剂量组、TCLC高剂量组、阳性对照组、TCLC+左卡尼汀组大鼠生精细胞线粒体呼吸链复合物Ⅰ-Ⅴ的活性明显高于模型组（p<0.05）;9.大鼠睾丸生精细胞和间质细胞的分布变化;与正常组相比,模型组大鼠睾丸组织有明显的损伤,包括生精细胞萎缩和破坏,层数明显减少,管腔中精子数量明显减少,间质明显退化水肿疏松;与模型组相比,TCLC高剂量组、阳性对照组、TCLC+左卡尼汀组上述变化有明显改善。结论:1.肾阴亏虚型少弱精子症的发生机制与Bcl-2、Bax、cleaved-caspase3的表达异常以及能量代谢失常密切相关;2.中药TCLC能明显改善肾阴亏虚型少弱精子症大鼠精液质量,其主要的作用机制为:（1）降低大鼠生精细胞的凋亡率,有助于精子数量明显增高;（2）改善大鼠生精细胞m PTP的功能,有助于改善精子活力;（3）提高大鼠血清T水平促进精子的发生;（4）调控Bcl-2、Bax、cleaved-caspase3的表达,有效抑制生精细胞的凋亡,促进生精细胞的增值,增加精子数量;（5）改善生精细胞线粒体呼吸链复合物I-V的活性,有助于改善精子呼吸作用,提高精子活力（6）降低睾丸组织的病理损伤,改善精子的发生环境。

赵琦^[4]（2021）在《李曰庆教授治疗肾虚型少弱精子症组方分析及网络药理学研究》文中指出目的:现如今,男性少弱精子症已经成为男性生育能力下降甚至不育的重要病因,现代研究对男性少弱精子症的病因及致病因素仍不明确,临床治疗仍以经验性用药为主。中医药治疗男性少弱精子症的疗效已逐渐获得男科学界认可,李曰庆教授在治疗本病上有独到临床经验,因此本研究将采用“中医传承辅助平台（V2.5）”软件,分析李曰庆教授治疗本病用药规律和学术思想,并通过网络药理学方法,全面分析教授治疗本病核心处方的作用靶点、分子机制,为后续开展进一步实验研究提供前期依据。方法:系统整理李曰庆教授于2019年1月1日至2019年12月31日东直门医院男科诊治的肾虚型少弱精子症临床病例,由两人背对背输入数据,建立数据库,并将数据准确录入软件中,对教授用药处方药物的运用频次、四气五味、归经等进行初步统计分析;同时利用软件关联规则分析、无监督熵层次聚类方法等对药物之间关联规则、处方分析、新方分析进行提取,得到教授治疗男性少弱精子症的核心处方,并从中分析得到教授临证经验。借助中药系统药理学分析平台（TCMSP）和中药分子机制的生物信息学分析工具（BATMAN）平台,得到中和益肾种子汤中中药的活性成分和潜在靶点,通过在线人类孟德尔遗传数据库和GeneCards数据库获得男性少弱精子症靶点,构建韦恩图得到药物成分靶点-男性少弱精子症共同靶点。利用Cytoscape3.6.1软件建立“复方-活性成分-作用靶点网络”,通过STRING数据库对共同靶点进行蛋白质互作分析,运用Cytoscape 3.6.1建立蛋白互作网络图。最后,借助DAVID数据库对共同靶点进行GO和KEGG功能富集分析。结果:（1）本次研究共纳入中医处方711首,包含159味中药,药物出现的频数总计14463次,平均每张处方用药约20味。中药性味以温性药物最多,平性和凉性药物次之;药味以甘味药物最多,苦味,酸味次之,咸味、涩味最少。药物归经主要归肾、肝经,肺、脾、心经次之。药物频数统计得到李曰庆教授治疗男性少弱精子症常用药物,包括生地黄、熟地黄、枸杞子、菟丝子、覆盆子、五味子、山茱萸、牛膝、黄芪、茯苓、杜仲、鹿角胶、车前子、巴戟天、丹参、蒲公英、黄精、淫羊藿、红景天、肉苁蓉等。根据关联规则算法,并和教授反复确定后,得到李曰庆教授治疗男性少弱精子症基础方“中和益肾种子汤”的组成:生地黄15g,熟地黄15g,山茱萸12g,菟丝子15g,枸杞子15g,车前子12g,覆盆子15g,五味子10g,生黄芪30g,鹿角胶10g,丹参15g,蒲公英12g。运用无监督熵层次聚类算法,得到新处方4首,核心聚类方药组合4组,创新临床用药模式,可根据临床进行进一步优化应用。（2）在TCMSP和BATMAN中检索中和益肾种子汤的化合物成分,最终得到199种潜在核心化合物,预测出化合物对应靶点377个。在OMIM、GeneCards数据库检索男性少弱精子症相关靶点,其中得到少精子症蛋白靶点528个,弱精子靶点163个,将两个数据集合并去除重复后得到男性少弱精子症相关靶点共651个。运用Cytoscape构建中和益肾种子汤潜在靶点和男性少弱精子症靶标数据集韦恩图,从中即可获得中和益肾种子汤和疾病共同靶点61个。构建中和益肾种子汤成分-靶点网络图,对构建的网络进行拓扑结构分析,得到槲皮素、木犀草素、山萘酚、刺芒柄花素、异鼠李素可被认为是中和益肾种子汤发挥药理活性重要化合物。PPI网络分析可得到中和益肾种子汤治疗男性少弱精子症前十位潜在核心靶点,包括TP53、AKT1、SIRT1、ESR1、PTGS2、MAPK1、EGFR、TNF、CASP3、IL6。GO分析结果提示中和益肾种子汤治疗男性少弱精子症基因生物过程（BP）显着富集在对有机环状化合物的反应、对含氧化合物的反应、对药物的反应、细胞对化学刺激的反应、对有机物质的反应等过程;细胞组分（CC）主要富集膜筏、膜微区、膜区、内膜系统、细胞质部分等部位;在分子功能（MF）主要富集在相同的蛋白质结合、酶结合、双链DNA结合、肿瘤坏死因子受体超家族结合、信号受体结合。KEGG富集分析得到中和益肾种子汤治疗少弱精子症相关的重要的信号通路包括:HIF-1信号通路、TNF信号通路、细胞凋亡通路、p53信号通路、NOD样受体信号通路、NF-κB信号通路、Toll样受体信号通路。结论:1.李曰庆教授治疗男性少弱精子症学术经验:（1）少弱精子症的病机核心为阴阳失衡,病理改变以肾虚为主,并兼有血瘀和湿热;（2）李曰庆教授在本病的治疗上用药多喜平和之辈,同时注重清补结合,攻补同用,达到阴平阳秘的状态。2.中和益肾种子汤治疗男社交媒体信息感知对乡村旅游目的地形象及旅游行为的影响调査性少弱精子症主要发挥“多成分-多靶点”的特点,起到抗氧化、抗炎、促进增殖与凋亡等作用机制。

王继升^[5]（2021）在《补肾生精法治疗少弱精子症的数据挖掘及其调控生精细胞的机制研究》文中认为少弱精子症已成为男科疾病研究热点。西医治疗存在一定的局限性,临床治疗无特效药物推荐,多以经验性治疗为主;补肾生精法作为治疗少弱精子症的常用中医治法,具有独特的疗效优势,能有效地弥补西医治疗少弱精子症的不足。广嗣育麟汤作为东直门医院男科治疗少弱精子症协定处方,取得了良好的临床疗效,本方以菟丝子-枸杞子为君药,是补肾生精法的临床经验方。目的1探讨补肾生精法源流及发展脉络2挖掘李海松教授及国家专利数据库中其他中医学者治疗少弱精子症用药经验及治法治则3探索广嗣育麟汤治疗少弱精子症的临床疗效4探讨菟丝子-枸杞子治疗少弱精子症的实验机制方法文献研究:基于中医文献及数据库,整理历代着作中关于补肾生精法及肾藏精理论在男性不育症治疗的文献,梳理补肾生精法的发展脉络及源流。数据挖掘:基于中医传承辅助平台,分别以李海松教授治疗少弱精子症438首处方以及国家专利库中74首治疗少弱精子症中医处方为挖掘对象,探索李海松教授及其他中医学者用药规律及治法治则。临床研究:基于数据挖掘结果中李海松教授治疗少弱精子症的处方——“广嗣育麟汤”,对其进行临床疗效评价,采用病例自身前后对照研究方法,纳入120例少弱精子症患者治疗12周,评价指标为精液质量及中医证候评分。实验研究:基于数据挖掘结果中补肾生精法代表药对——菟丝子、枸杞子（SC-FL）,进行实验机制验证,通过细胞实验和动物实验相结合,探索补肾生精代表药对的具体机制。细胞实验以精原细胞（GC-1spg）为研究对象,分为4组,正常组（NC组）、模型组（GTW组）、左卡尼汀治疗组（GTW+LEV组）、菟丝子-枸杞子治疗组（GTW+SC-FL组）。运用雷公藤多苷含药血清体外干预制备生精功能障碍细胞模型,治疗组分别以左卡尼汀（LEV）及SC-FL干预治疗;动物实验也同样分为4组,每组6只,运用GTW灌胃4周制备少弱精子症大鼠模型,治疗组分别以LEV和SC-FL灌胃治疗4周。观察各组大鼠的一般状况及血清激素水平;运用流式细胞技术,观察各组GC-1spg的细胞周期、线粒体膜电位、增殖凋亡;运用透射电镜观察GC-1spg细胞及大鼠睾丸组织中细胞器及超微结构;运用免疫荧光染色技术、WB及RT-qPCR技术检测GC-1spg细胞及大鼠睾丸组织中PI3K/AKT通路相关蛋白及mRNA的分布及含量。结果1文献研究:补肾生精法是从中医肾藏精理论发展而来。早在先秦时期的着作中就奠定补肾生精法基础,在魏晋隋时期的文献对补肾生精法有一定的继承与创新,经历了唐宋元时期补肾生精理论趋于完善、系统化,在明清时期的文献古籍记载中补肾生精理论得到了蓬勃发展,并最终形成完备体系流传至今。2通过对导师的处方及经验挖掘发现,导师认为少弱精子症病因常以肾精亏虚为主,涉及肝、肾、脾三脏,治疗以微调阴阳为纲,以补肾生精为目,整体论治。用药出现频率最高的是菟丝子、枸杞子两味药,其次是覆盆子、五味子、熟地黄、黄芪、车前子、牡蛎、当归,上述9味药同山药共同组成“广嗣育麟汤”,菟丝子、枸杞子为广嗣育麟汤君药。通过对国家专利数据库的处方的挖掘结果发现,出现频率最高的同样为菟丝子、枸杞子,说明此药对在临床中确有一定疗效,其机制有待于实验验证。3通过临床研究发现经过广嗣育麟汤治疗后患者的精液浓度及活动率明显升高,中医主要证候和次要证候也有显着改善（P<0.05或P<0.01）,广嗣育麟汤治疗少弱精子症临床有效率为92.7%。试验过程中患者未出现不良反应。4细胞实验研究结果表明,在细胞周期、线粒体膜电位及凋亡方面:与NC组相比,GTW组GC-1spg细胞的G0/G1和G2/M期的百分率显着降低、S期百分率明显升高（P<0.01）。与 GTW 组相比,GTW+LEV 组和 GTW+SC-FL 组 GC-1spg 细胞的 G0/G1 和 G2/M期的生精细胞百分率升高、S期百分率降低（P<0.05,P<0.01）。与GTW+LEV组相比,GTW+SC-FL组GC-1 spg细胞的G0/G1和G2/M期的百分率明显升高、S期百分率降低（P<0.01）。在细胞超微结构方面:与NC组相比,GTW组的GC-1spg细胞膜大面积破裂,细胞器游离,膜周围少量伪足与突起,细胞基质大面积密度减低,空泡变,整体呈崩解状态。细胞核形状变形严重,局部凹陷,多核仁,核膜清晰;线粒体数量丰富,大多重度肿胀变形,嵴断裂、消失,部分严重者,膜崩解、基质消失;粗面内质网明显扩张;自噬溶酶体数量较多,高尔基体肥大,高尔基体池明显扩张;脂滴少量存在。与GTW组相比,GTW+LEV和GTW+SC-FL组GC-1spg各细胞器的超微结构发生明显恢复,各个细胞器形态均有所恢复,但与NC组大鼠相比,其结构尚未完全恢复。在蛋白及mRNA表达方面:与NC组相比,GTW组GC-1spg细胞PI3K、p-AKT、Bcl-2蛋白及mRNA表达显着降低（P<0.01或P<0.05）;与GTW组相比,GTW+LEV组和GTW+SC-FL组GC-1spg细胞PI3K、p-AKT、Bcl-2蛋白及mRNA表达显着上升（P<0.01 或P<0.05）;与 GTW+LEV 组相比,GTW+SC-FL 组 GC-1spg 细胞 PI3K、Bcl-2蛋白及mRNA表达显着上升（P<0.01或P<0.05）,GTW+SC-FL组GC-1 spg细胞p-AKT蛋白及mRNA表达无显着差异（P>0.05）。与NC组相比,GTW组GC-1spg细胞中BAD、BAX蛋白及mRNA表达呈现显着增高的趋势（P<0.01或P＜0.05）;与GTW组相比,GTW+LEV组和GTW+SC-FL组GC-1spg细胞BAD、BAX蛋白及mRNA表达显着下降（P<0.01或P<0.05）;与GTW+LEV组相比,GTW+SC-FL组GC-1spg细胞BAD、BAX蛋白及mRNA表达显着下降（P<0.01或P<0.05）。动物实验研究结果表明,治疗后大鼠一般状况较模型组显着改善。精液常规方面:同NC组比较,GTW组大鼠的精子浓度、PR+NP显着降低（P<0.01）;同GTW组比较,GTW+SC-FL 和 GTW+LEV 组精子浓度、PR+NP 显着增加（P＜0.01）;与 GTW+LEV组比较,GTW+SC-FL组精子浓度显着升高（P<0.01）,GTW+SC-FL组的PR+NP无明显差异（P>0.05）。血清性激素水平方面:与GTW组进行对比发现,GTW+LEV和GTW+SC-FL组血清FSH、LH、T显着升高（P<0.01或P<0.05）;与GTW+LEV组进行对比发现,GTW+SC-FL 组的血清 FSH、LH、T 显着升高（P＜0.01）;在组织结构及超微结构方面:NC组精母细胞形态及结构规则。细胞核（N）丰满且结构形态正常呈圆形,内部含有丰富的常染色质;核仁形态结构明显（NU）;胞浆内内质网（ER）易见,也可见多少不等的溶酶体（AAS）和自噬小体（AP）。GTW组精母细胞形态及结构不规则。细胞膜破损,N结构及形态发生改变呈圆形或椭圆形,常染色质较丰富、少量异染色质凝集;胞浆内ER扩张,也可见多少不等的AAS和AP。经过SC-FL治疗后,被GTW损伤的细胞器有所恢复。在蛋白及mRNA表达方面:与GTW组相比,GTW+LEV组和GTW+SC-FL组PI3K、AKT、Bcl-2蛋白及mRNA表达显着上升（P<0.01或P<0.05）;与GTW+LEV组相比,GTW+SC-FL组PI3K、AKT、Bcl-2蛋白及mRNA表达显着上升（P<0.01或P<0.05）。结论1数据挖掘结果表明,菟丝子、枸杞子为补肾生精法治疗少弱精子症的代表药对;李海松教授治疗少弱精子症以微调阴阳为纲,以补肾生精为目,广嗣育麟汤为李海松教授治疗少弱精子症的经验方。2临床研究结果表明,广嗣育麟汤可以有效改善少弱精子症患者的精液质量,降低肾精亏虚证患者中医症状评分。3实验研究结果表明,SC-FL可以有效改善生精障碍模型大鼠一般状态,提高精液质量,参与下丘脑-垂体-性腺轴性激素的调控,修复GC-1spg和睾丸组织的超微结构;SC-FL可以通过PI3K/AKT信号通路促进生精细胞的增殖和抑制生精细胞的凋亡。综上所述,补肾生精法可以有效治疗肾精亏虚型少弱精子症,其调控PI3K/AKT信号通路蛋白和mRNA是作用机制之一。

谢春雨^[6]（2020）在《男性精子参数异常与龈沟液炎性因子相关性研究》文中研究说明研究目的:牙周病与男性精液参数异常的相关性尚无定论。本研究通过横断面研究比较男性精液参数异常组和正常组的龈沟液、精液环境中重要炎性因子的差异,为探索牙周炎通过龈沟液微环境影响男性精子质量的作用机制提供研究依据。研究方法:募集2018年11月-2019年11月之间就诊于第九人民医院的21至48岁男性共74位,将研究对象根据精液检查结果分为精液参数异常组与精液参数正常组,每组各37人。通过问卷调查收集研究对象的年龄、体重、身高、生活习惯等基本资料;通过口腔检查获得研究对象的牙周指标,包括全口探诊深度、附着丧失与全口探诊出血情况。收集研究者的龈沟液样本与精液样本,并进行酶联免疫吸附实验检测。采用T检验、秩和检验与Spearman相关性分析,比较两组之间龈沟液、精液环境中炎性因子的差异性,并分析龈沟液炎性因子与男性精液参数以及精液环境中炎性因子的相关性。结果:病例组附着丧失（1.30±0.91mm）程度高于对照组（1.12±0.62mm）,但差异无显着性（P=0.336）。病例组龈沟液中的IFN-γ、IL-1β、IL-8、TNF-a、MMP-8、MMP-9和PGE-2水平都高于对照组,且差异具有显着性（P<0.01）;而龈沟液中的IL-6、IL-10水平则小于对照组,且差异具有显着性（P<0.01）。病例组精液中的IFN-γ、IL-1β、IL-8、TNF-a、MMP-8、MMP-9和PGE-2水平都高于对照组,且差异具有显着性（P<0.01）;而精液中的IL-6、IL-10则小于对照组,且差异具有显着性（P<0.01）。龈沟液与精液的炎性介质趋势相同,炎性介质的组间差异在龈沟液中与在精液中具有显着相关性。精液参数（精液密度、精子总数、向前运动和活动率）与龈沟液中的炎性介质具有显着相关性。结论:精液参数异常患者的龈沟液炎性因子水平与正常组有显着差异,且这种差异表现可能早于其临床牙周指标。牙周炎和男性不育症之间存在相关性,且可能通过炎性因子通道产生互相影响。

晏斌^[7]（2020）在《灵归方对奥硝唑诱导的弱精子症模型大鼠附睾功能影响的实验研究》文中进行了进一步梳理背景:2010年世界卫生组织（World Health Organization,WHO）估计全世界大约有4850万对夫妇（8～12%）患有不孕不育,其患病率因国家和地区而异,男性因素所致生育问题的分布在20%～70%之间,精子数量少、形态异常、运动能力差是与男性因素相关的常见原因。随着世界范围内男性不育症的不断增多,它已成为一个越来越引起临床重视的健康问题。目前西医治疗男性不育症主要方式为药物治疗、手术及辅助生殖技术,但是存在疗效不确定、造成侵入性损害、价格高,或伴随不良反应和其他高风险的问题,使得男性不育症患者寻求其他治疗策略。随着中医药研究的发展,中医药成为男性不育症治疗中重要的方法之一,提供了安全、有效的治疗选择。灵归方为中国中医科学院西苑医院男科经验处方,由仙灵脾、当归、熟地黄、山药等13味药组成,具有补肾、活血的功效,前期临床研究发现灵归方有提高弱精子症患者精子活动率的作用,但其具体作用机制不明,故设计本研究以阐明灵归方改善精子活动率的可能机制。实验分为两部分,第一部分为探索使用奥硝唑（Ornidazole,ORN）制备弱精子症动物模型,观察不同剂量（200,400,800 mg/（kg·d））的ORN对于雄性SD大鼠精子浓度、活动率的影响;第二部分为保护性实验,设置对照组、模型组、灵归方组、左卡尼汀组,综合评价灵归方对弱精子症模型大鼠精液质量、附睾左旋肉碱（L-carnitine,LC）含量、附睾肉碱转运蛋白（Carnitine/organiccation transporter2,OCTN2）的蛋白及mRNA表达水平的影响,并检测灵归方干预后大鼠血清性激素水平,附睾SOD、GSH-Px活性以及MDA含量,光学显微镜观察睾丸、附睾组织病理学变化。第一部分:ORN诱导弱精子症模型大鼠的研究目的:观察不同剂量的ORN灌胃对雄性SD大鼠精液质量的影响,以制备弱精子症模型大鼠。方法:将40只雄性SD大鼠进行编号,使用电子秤称重并详细记录。按照随机数字表法将其分为对照组、模型1组、模型2组、模型3组各10只,具体给药方法为:模型 1 组:200mg/（kg·d）ORN;模型 2 组:400mg/（kg·d）ORN;模型 3组:800mg/（kg·d）ORN;对照组:1ml/100g0.5%CMC-Na（由于 ORN 水溶性差,故采用CMC-Na溶解后灌胃）。按照1ml/100g体重进行给药,连续灌胃20天,观察大鼠一般情况变化,在末次给药24小时后用5%水合氯酸溶液（0.7ml/100g）进行腹部注射麻醉,水合氯酸溶液使用剂量为按照0.4ml/100g体质量进行计算,大鼠麻醉后,称体重,取睾丸及附睾分别称重,计算睾丸、附睾脏器系数,并取大鼠左侧附睾尾进行精子浓度和活动率（PR+NP级精子百分率）分析。结果:1.在实验进行过程中,由于灌胃操作导致模型3组1只大鼠死亡。对照组一般状态良好,饮食正常,体毛浓密,且有光泽,大小便正常,活动量大,较活跃,存在笼内打斗现象;与对照组比较,模型1组上述各项征象无显着下降,饮食无明显减少,饮水量相当,体毛正常,光泽度稍差,活动量未见减少,存在笼内打斗现象,精神可;模型2组较对照组上述征象有下降,饮食量减少,体毛较稀疏,体毛光泽度不及模型1组,活动量以及打斗现象无明显减少,精神尚可;模型3组较对照组上述指标有显着下降,饮食量减少,体毛稀疏,体毛光泽度明显降低且不及模型2组,活动量少,打斗现象减少,精神差。2.与对照组比较,模型1组大鼠体重,睾丸、附睾重量,以及睾丸、附睾脏器系数变化差异均无统计学意义（P>0.05）;模型2组体重,睾丸、附睾重量以及睾丸、附睾脏器系数有下降趋势,但无统计学差异（P>0.05）;模型3组体重,睾丸、附睾重量以及睾丸、附睾脏器系数均下降,有统计学差异（P<0.05）。3.与对照组比较,模型1组与模型2组精子浓度改变无统计学差异（P>0.05）,模型3组精子浓度下降（P<0.01）;与对照组比较,模型1组（PR+NP）级精子浓度及精子活动率无统计学改变（P>0.05）,模型2组、模型3组（PR+NP）级精子浓度及精子活动率均下降（P<0.01）。结论:1.200 mg/（kg·d）ORN灌胃20天对于大鼠体重,睾丸、附睾重量及脏器系数,精子浓度、（PR+NP）级精子浓度及活动率均无影响。2.400 mg/（kg·d）ORN灌胃20天,对大鼠精子浓度无影响,但可导致（PR+NP）级精子浓度及精子活动率下降,可用于制备弱精子症模型大鼠。3.800 mg/（kg·d）ORN灌胃20天可导致大鼠精子浓度、（PR+NP）级精子浓度及活动率均明显下降,可用于制备少弱精子症模型大鼠。第二部分:灵归方对ORN诱导的弱精子症模型大鼠附睾功能影响的实验研究实验一:灵归方对ORN诱导的弱精子症模型大鼠附睾LC相关通路的影响目的:观察灵归方对ORN诱导弱精子症模型大鼠精液质量、附睾LC含量,附睾OCTN2蛋白及mRNA表达水平的影响,揭示ORN诱导弱精子症模型大鼠附睾能量代谢障碍以及灵归方改善弱精子症大鼠附睾功能的相关机制。方法:将40只雄性SD大鼠进行编号,使用普通电子秤称重并详细记录。按照随机数字表法将其分为对照组、模型组、左卡尼汀组、灵归方组,每组各10只,具体给药方法为:对照组:1ml/100g 0.5%CMC-Na;模型组:400mg/（kg·d）ORN;左卡尼汀组:LC 100mg/（kg·d）+400mg/（kg·d）ORN;灵归方组:灵归方浓缩液,按 17.5g 生药/kg+400mg/（kg·d）ORN,连续灌胃 20 天,ORN 均为上午 8:00-9:00灌胃,干预药物为下午5:30-6:30灌胃。末次给药24 h后,5%的水合氯醛腹腔麻醉,剪开阴囊,取出实验大鼠右侧附睾,用于进行精子浓度及活动率检测;左侧附睾在（pH 7.2～7.4）0.01mol/LPBS缓冲液配制的4%多聚甲醛固定液中进行固定,用于附睾LC含量、OCTN2蛋白与mRNA表达的检测。其中高效液相色谱法测定附睾中LC含量,免疫印迹法（Western Blotting,WB）检测大鼠附睾OCTN2蛋白表达,逆转录聚合酶链反应（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR）检测大鼠附睾OCTN2 mRNA表达。结果:1.与对照组比较,各组精子浓度改变无统计学差异（P>0.05）;模型组（PR+NP）级精子浓度及精子活动率下降（P<0.05）。与模型组比较,灵归方组与左卡尼汀组（PR+NP）级精子浓度及精子活动率升高,有统计学差异（P<0.05）;灵归方组与左卡尼汀组比较,（PR+NP）级精子浓度及精子活动率差异无统计学意义（P>0.05）。2.与对照组比较,模型组附睾LC含量下降（P<0.05）;与模型组比较,灵归方组与左卡尼汀组附睾LC含量升高（P<0.05）;且左卡尼汀组附睾LC含量高于灵归方组（P<0.05）。3.与对照组比较,模型组OCTN2蛋白表达下降（P<0.05）;与模型组比较,灵归方组、左卡尼汀组OCTN2蛋白表达升高（P<0.05）;灵归方组与左卡尼汀组比较,OCTN2蛋白表达差异无统计学意义（P>0.05）。4.与对照组比较,模型组OCTN2 mRNA表达下调（P<0.05）;与模型组比较,灵归方组、左卡尼汀组OCTN2 mRNA表达上调（P<0.05）;灵归方组与左卡尼汀组比较,OCTN2 mRNA表达差异无统计学意义（P>0.05）。结论:1.400mg/（kg·d）ORN连续灌胃20天可导致大鼠精子活动率下降,可能与抑制附睾OCTN2蛋白及mRNA表达,引起血浆向附睾LC转运减少,导致附睾LC含量下降有关。2.灵归方能够提高ORN诱导弱精子症模型大鼠（PR+NP）级精子浓度及精子活动率,可能与增加大鼠附睾LC含量有关。3.灵归方可以上调ORN所致弱精子症模型大鼠附睾中OCTN2蛋白及mRNA的表达,从而增加LC从血浆向附睾转运。实验二:灵归方对弱精子症模型大鼠血清性激素及附睾氧化应激反应的影响目的:观察灵归方对ORN所致弱精子症模型大鼠血清性激素水平,附睾SOD、GSH-Px、MDA的影响,进一步揭示ORN造成弱精子症模型大鼠的可能机制以及灵归方的保护作用。方法:分组及灌胃方式同实验一。股动脉取血,酶联免疫吸附试验法测定大鼠血清中FSH、LH、T含量,取右侧附睾组织制备成5%的组织匀浆,将匀浆3000rpm离心10min,取上清进行SOD、GSH-Px活性以及MDA含量的检测。左侧睾丸、附睾部分置于4%多聚甲醛固定,随后用于观察睾丸、附睾结构组织病理学变化。结果:1.与对照组比较,各组FSH、LH及T水平改变均无统计学差异（P>0.05）。2.与对照组比较,模型组附睾GSH-Px、SOD活性下降,MDA含量升高（P<0.05）;与模型组比较,左卡尼汀组及灵归方组GSH-Px、SOD活性升高,MDA含量下降,均有统计学差异（P<0.01）;灵归方组与左卡尼汀组相比GSH-Px、SOD活性以及MDA含量比较无统计学差异（P>0.05）。3.在显微镜下可见各组大鼠睾丸中各生精小管结构正常,管腔明显,整齐排列,大量精子及精子细胞充满生精小管管腔,形态正常;各级生精细胞结构完整,层次清晰,各级生精细胞分裂活跃,各细胞形态未见明显异常,各组之间的形态学差异并不明显;各组附睾组织形态学改变并不明显,管腔中可见大量的精子,模型组附睾管腔中可见少量脱落细胞成分。结论:1.400mg/（kg·d）ORN连续灌胃20天对雄性SD大鼠血清性激素水平,睾丸、附睾组织形态并无显着影响,但是会引起附睾GSH-Px、SOD活性下降,MDA含量升高,可能是导致大鼠精子活动率下降的原因之一。2.灵归方可以增加附睾SOD、GSH-Px活性,降低MDA含量,减少ORN所致弱精子症模型大鼠附睾氧化损伤,维持正常的精子成熟环境。

周慧^[8]（2020）在《精子中TDP-43、SPANX蛋白的表达及其与AID任娠结局的相关性研究》文中研究说明当前在世界范围内育龄夫妇中不孕不育夫妇约占15%,其中高达50%是由男方因素引起。男性不育病因复杂,且不育人数呈逐年升高趋势。随着环境质量的下降,生活方式的改变,男性生殖健康问题受到严重影响。其中导致男性不育的主要因素有内分泌疾病、性腺发育异常、遗传学因素、性腺或附属性腺感染、精子DNA异常、不良生活方式如嗜烟、熬夜、酗酒和环境中重金属污染等。但在男性不育患者中约有40%不育患者其病因及发病机制不明。现今临床上诊断男性不育和辅助生殖技术治疗方式的选择仍依赖于精液常规分析,但仅依赖精液常规分析来对男性生育力做出判断及对辅助生殖技术进行指导与预后评估存在一定局限性。因为在临床的诊疗过程中一方面存在许多精液参数正常,却生育困难的男性患者;另一方面一些正常生育男性的精液指标也存在异常的现象。因此,精液常规参数的分析并不能完全作为男性生育力的判断标准。为了弥补精液常规参数在男性不育临床诊断方面的不足,一些学者尝试寻找其他的检测方法来判断男性生育力,例如:精子透明带结合试验、DNA碎片、体外渗透试验、氧化应激试验以及顶体反应试验等。但这些实验室检查作为临床检测并没有取得令人满意的进展。因此需要进一步探究更加准确的指标来指导男性生育力的临床评估和诊疗。近几年来,有关与男性生育力相关蛋白的研究正逐步深入。关于反式激活应答 DNA 结合蛋白（The transactive response DNA-binding protein of 43,TDP-43）和精子X染色体核结合精子蛋白（The sperm protein associated with the nucleus on the X chromosome,SPANX）的研究也越来越受到关注。为了进一步探究临床诊断男性生育力的精准指标,研究男性不育的发病机制,本研究采用Western Blot的方法检测供精志愿者冷冻精液高生育力组和低生育力组精子中的SPANX和TDP-43蛋白的表达,探讨其与男性生育力的关系。同时利用K均值聚类分析的方法统计分析487个AID周期的临床妊娠结局与精子中TDP-43和SPANX蛋白的表达关系,从而为男性生育力的临床评估、诊断和治疗提供新的依据。目的探讨精子TDP-43和SPANX蛋白与男性生育力之间的关系,为男性生育力的研究、评估和男性不育的临床诊断、治疗提供新的靶标。材料与方法1研究对象收集2009年1月1日至2017年12月31日河南省人类精子库中用于AID治疗的高生育力组精液样本30例、低生育力组精液样本21例,分别对其精子中TDP-43和SPANX蛋白进行检测。高生育力组精液样本纳入标准:志愿者的冷冻精液用于临床治疗最多8个AID周期且8个周期以内均使5名妇女受孕;低生育力组精液样本纳入标准:志愿者的冷冻精液用于临床治疗12个AID周期,且均未使1名妇女受孕。精子库中用于AID治疗的所有冷冻精液标本均符合《人类精子库基本标准和技术规范》。收集郑州大学第三附属医院生殖医学中心同期使用上述51例供精者精液标本行AID治疗的487个临床周期的病历资料和受者的年龄、抗苗勒管激素（anti-Mtullerian hormone,AMH）、基础窦卵泡数（Antral follicle count,AFC）、子宫内膜厚度和体重指数（body mass index,BMI）。受者纳入标准:①年龄小于35岁;②子宫内膜厚度≥8mm;③无不良妊娠史;④至少有一侧输卵管通畅。排除标准:①患有子宫内膜疾病,如子宫内膜异位症、子宫内膜息肉等;②多囊卵巢综合征;③盆腔粘连;④内分泌疾病;⑤卵巢疾病;⑥输卵管不通;⑦慢性疾病,如高血压、糖尿病等影响妊娠结局的疾病。2 方法2.1 Western Blot用Western Blot方法分别检测高、低生育力组精子中TDP-43和SPANX蛋白的表达。2.2 K均值聚类分析根据TDP-43和SPANX蛋白在高生育力组和低生育力组精子中的检测结果,运用K均值聚类分析的方法,将51例志愿者分为TDP-43和SPANX蛋白高表达组和低表达组两个组。分别对两组中相应的487个AID临床周期的妊娠结局、受者的基本情况（受者年龄、AMH、AFC、子宫内膜厚度、BMI）和相应的志愿者的精液参数进行相关性分析。3 统计学分析采用SPSS20.0数据进行统计学分析。结果中计量数据以χ±s表示。两组间数据分析采用两独立样本t检验,以α=0.05为检验水准。结 果1 高生育力组和低生育力组精子中TDP-43蛋白的表达情况高生育力组精子中TDP-43蛋白的相对表达量（0.93±0.16）高于低生育力组（0.78±0.14）,有统计学差异（P<0.05）。2 高生育力组和低生育力组精子中SPANX蛋白的表达情况高生育力组精子中SPANX蛋白的相对表达量（0.96±0.17）高于低生育力组（0.80±0.15）,有统计学差异（P<0.05）。3高、低生育力组临床周期数、受孕人数和平均周期妊娠率的情况高、低生育力组的临床周期数分别为235和252,受孕人数分别是150人和0人。高生育力组的平均周期妊娠率63.83%（150/235）高于低生育力组0%。（0/252）,有统计学差异（P<0.05）。4精子中TDP-43蛋白的表达情况与AID临床平均周期妊娠率的相关性分析精子中TDP-43蛋白在高表达组（n=28）的相对表达量（1.05±0.08）高于低表达组（n=23）的相对表达量（0.73±0.10）,有统计学差异（P<0.05）;精子中TDP-43蛋白高表达组临床平均周期妊娠率39.84%（100/251）高于低表达组21.19%（50/236）,有统计学差异（P<0.05）。两组受者女性的年龄、AMH、AFC、子宫内膜厚度、BMI无统计学上差异（P>0.05）。5精子中SPANX蛋白的表达情况与AID临床平均周期妊娠率的相关性分析精子中SPANX蛋白在高表达组（n=31）的相对表达量（1.07±0.11）高于低表达组（n=20）的相对表达量（0.75±0.09）,有统计学差异（P<0.05）;高表达组临床平均周期妊娠率41.82%（115/275）高于低表达组16.51%（35/212）,有统计学差异（P<0.05）。两组受者女性的年龄、AMH、AFC、子宫内膜厚度、BMI无统计学上差异（P>0.05）。结论精子中TDP-43和SPANX蛋白在高生育力组的表达均显着高于低生育力组,且TDP-43和SPANX蛋白高表达组的临床平均周期妊娠率均显着高于低表达组,可推断精液中TDP-43和SPANX蛋白的表达与男性生育力有关。TDP-43和SPANX蛋白有望成为临床评估和诊断男性生育力的潜在标志物。

孙松^[9]（2018）在《左归丸治疗肾阴不足型男性不育少弱精子症的临床和实验研究》文中认为目的:男性不育症的发病率逐年升高,其中以少弱精子症居多。西医治疗本病存在一定的局限性,疗效欠佳,中医药在男性不育的防治方面经验丰富。前期研究发现,左归丸可明显抑制生精细胞凋亡、促进生精细胞增殖。本研究旨在进一步评价左归丸治疗肾阴不足型少弱精子症的临床疗效并深入探讨其抗凋亡、促增殖分化的机制。方法:临床研究:采用无病例对照研究,纳入符合标准的肾阴不足型男性不育少弱精子症患者,记录患者的一般资料、症状、体征、治疗史及合并疾病等情况,进行中医证候评分并记录。44例患者均予以左归丸配方颗粒口服,治疗周期为90天,治疗30天后、治疗60天后以及治疗90天后,分别记录每个患者的中医证候评分,详细记录患者在用药期间的各种不良反应。治疗前及治疗90天后分别检测精子质量（一周内连续检测2次,选择精子总数较多的结果进行记录）。观察左归丸治疗肾阴不足型少弱精子症的临床疗效,以及其对患者精液量、精子浓度、精子总数、前向运动精子百分率、精子总活力的影响和对中医证候总评分、肾阴不足相关症状评分的改善情况。实验研究:1.60只雄性SD大鼠,随机分为空白对照组20只,造模组40只。空白对照组采用去离子水干预4周,造模组采用40mg/（Kg·d）的雷公藤多苷（GTW）干预4周,每组随机抽取4只大鼠进行模型验证。造模成功后空白对照组大鼠中随机选取12只,做为空白对照组,GTW造模组中随机选取24只,按随机数字表法分为GTW模型组和左归丸组,每组12只。空白对照组和GTW模型组采用去离子水灌胃,左归丸组采用6g/（Kg·d）的左归丸进行灌胃干预,干预4周;2.观察左归丸对生精障碍大鼠模型的精子质量、性激素水平、睾丸病理形态学、睾丸组织超微结构的影响;3.采用Western blot以及Real-Time PCR技术,对大鼠睾丸组织进行c-kit、Oct4蛋白及mRNA表达检测。结果:临床研究:经左归丸治疗后,44例患者的精液量与治疗前相比明显增多,有统计学差异（P<0.05）,精子总活动力、前向运动精子百分率、精子浓度、精子总数等指标与治疗前比较均有显着提高（P<0.01）;中医证候总评分、肾阴不足相关症状评分随治疗时间的增加呈下降趋势,治疗前后差异均有统计学意义。临床总有效率高达93.18%。所有患者在研究过程中均未见不良反应。实验研究:1.左归丸组与GTW模型组比较,大鼠一般状态明显好转,睾丸组织脏器系数提高,差异有统计学意义,P<0.05,左归丸组附睾组织脏器系数与GTW模型组比较差异显着,P<0.01;左归丸组精子浓度、总活率、前向运动精子百分率均高于GTW模型组,差异有统计学意义,P<0.01;左归丸组病理组织损伤情况较GTW模型组有所改善,管腔明显扩大,内含精子增多,部分生精管恢复正常。左归丸组睾丸生精上皮超微结构损伤明显恢复,与空白对照组近似,生精细胞形态、结构完整,可见少量变性的细胞器,线粒体增多,可见精子及高尔基体。2.左归丸组FSH、E2、LH含量显着高于GTW模型组,P<0.01,与空白对照组比较无差异,P>0.05;左归丸组PRL水平明显高于其余两组,且均有显着差异,P<0.01。左归丸组T含量较GTW模型组有改善,有统计学差异,P<0.05,但较空白对照组无统计学差异,P>0.05。3.Westernblot检测中,各组大鼠睾丸组织c-kit、Oct4蛋白表达结果相互比较,均未见明显差异（P>0.05）,但均呈左归丸组>空白对照组>GTW模型组的表达强弱趋势。4.Real-TimePCR检测中,左归丸组、GTW模型组与空白对照组相比,c-kitmRNA的表达量均明显降低,P<0.05;左归丸组表达水平明显高于GTW模型组,P<0.01,有统计学意义;GTW模型组Oct4 mRNA的表达明显低于空白对照组,P<0.01;左归丸组与GTW模型组相比,Oct4 mRNA的表达量显着提高（P<0.01）,但与空白对照组表达水平无差异（P>0.05）。结论:1.左归丸能安全有效的提高肾阴不足型不育少精子症患者的精子质量,改善中医证候评分。2.左归丸可显着改善模型大鼠一般状态,显着提高睾丸、附睾脏器系数,提高精子质量,改善性激素水平及睾丸组织结构及超微结构损伤情况。3.左归丸具有抑制生精障碍模型大鼠生精细胞凋亡,并促进其增殖的作用,具体机制可能与通过调控生精细胞上干细胞因子受体c-kit蛋白及mRNA的表达,一定程度上增加Oct4蛋白及mRNA的表达有关。综上所述,左归丸治疗肾阴不足型不育少弱精子症临床疗效确切,其具体作用机制可能是通过调控c-kit、Oct4蛋白及mRNA的表达,从而抑制凋亡,促进增殖。

张淑婷^[10]（2018）在《补肾活血方对男性不育畸形精子症精子JAK2/STAT3信号通路的影响及机制研究》文中进行了进一步梳理目的:世界范围内大约有8%12%的夫妇存在不孕不育的生育问题,其中40%50%是由于“男性因素”导致的男性不育症,精液异常最为常见,畸形精子症至少占1/3,精子的正常形态是决定精子与卵子识别的关键,精子在体内的正常受精过程有赖于正常的精子形态。畸形精子症致病机制复杂,可能与染色体异常、基因突变或缺失,激素失调,免疫异常,感染,环境恶化,接触毒物辐射,精索静脉曲张,过量活性氧（ROS）,氧化应激以及精子DNA损伤等因素有关,大多与精子的活力相结合,认为有害因素使精子表面的信号通路蛋白受体活化,通过信号转导途径改变精子结构,使精子活力和形态出现异常,其中过量ROS、氧化应激和精子DNA损伤是目前研究的热点。但究竟该过程信息通过何种信号通路的传递,目前尚无统一的认识。JAK/STAT信号转导通路是一条经典的核转录信号通路,能调节细胞生长、发育、分化、凋亡等系列生命活动。近年来发现该信号通路中的JAK2/STAT3信号通路还能通过线粒体介导氧化损伤反应,调节细胞凋亡;激活或者抑制JAK2/STAT3信号通路能调节氧化损伤反应和凋亡的过程。体外使用STAT3抑制剂作用于活动的精子,能使精子活力减弱,降低精子的受精能力,但JAK2/STAT3信号通路与精子形态和功能是否相关,改变该信号通路是否影响精子的形态和功能,目前尚不十分清楚。因此研究精子中JAK2/STAT3信号通路与精子形态和功能的关系,将有助于了解精子形态和功能异常的发生机制,有利于指导临床男性不育畸形精子症患者的治疗。我国中医药治疗不孕不育大概有2000多年历史,男性不育畸形精子症属古代“无子”范畴。导师认为该病是一种病理机制复杂的疾病,肾虚和血瘀是其重要的病理基础之一,辨为肾虚血瘀证,各种因素可致肾阳亏虚,下焦虚寒,温煦不足,精失所养或肾阴亏虚,阴虚火旺,煎熬精液,灼伤精子或者气虚无以推动血液运行,阳气亏损,无以温煦血脉,血液流动缓慢而凝滞成瘀,血流不畅易使病理产物堆积损伤精子生存的微环境,导致畸形率增高,影响精子的功能,导致不育。治疗上采用补肾活血法,拟补肾活血方治疗,以期改善精子生存的微环境、增加血液流量,对抗缺血缺氧、氧化应激,达到保护精子免受损伤而治疗畸形精子症不育的目的。本研究将采用补肾活血方治疗肾虚血瘀型男性不育畸形精子症患者,通过计算机辅助精液分析（CASA）、精子形态学染色和流式细胞技术（FCM）检测治疗前后精液常规参数、精子形态和精子DNA的完整性（精子碎片化指数,DFI）的变化,追踪其治疗后配偶的妊娠率,了解补肾活血方治疗对肾虚血瘀型男性不育畸形精子症患者精液常规参数、精子形态和精子DFI以及配偶妊娠结局的影响;采用蛋白质印迹技术（WB）检测正常精子和畸形精子症患者精子JAK2蛋白和STAT3蛋白的表达水平,了解精子形态与JAK2/STAT3蛋白表达水平之间的关系;采用补肾活血方治疗肾虚血瘀型男性不育畸形精子症患者,分别通过CASA、精子形态学染色和WB检测治疗前后精液常规参数、精子形态和精子JAK2蛋白和STAT3蛋白的表达水平的变化,了解补肾活血方治疗对肾虚血瘀型男性不育畸形精子症患者精液常规参数、精子形态和JAK2/STAT3蛋白表达水平的影响;最后使用不同浓度的JAK2/STAT3抑制剂（AG490）作用于正常精子,分别通过精子形态学染色和FCM检测抑制剂干预后精子形态和精子DFI的变化,了解抑制JAK2/STAT3信号通路对精子形态和精子DFI的影响,为探讨男性不育畸形精子症的发病机制和治疗途径提供科学依据。方法:本课题分为临床研究和实验研究两个方面:一、临床研究方法:收集2016年3月30日2017年9月30日在广州中医药大学第一附属医院生殖医学科男性专科就诊的患者共60例,年龄2345岁,诊断为男性不育症和畸形精子症,给予中医辨证为“肾虚血瘀证”者纳入为研究对象。采用随机对照原则,将研究对象分为补肾活血方组（A组）、抗氧化治疗组（B组）和不治疗组（C组）3组。A组（20例）:予以补肾活血方汤剂辩证加减后口服,疗程为12周;B组（20例）:予以每天口服天然维生素E 100mg,每日2次,疗程为12周;C组（20例）:空白组,不予药物治疗。三组研究对象于12周（治疗）前、后采用CASA对患者精液进行精液常规参数分析,获得精子总数、精子浓度、精子总活力以及精子运动参数等;采用Diff-Quik方法检测精子形态,计算形态正常精子百分率、畸形精子百分率、畸形精子指数（TZI）、精子畸形指数（SDI）、头部缺陷百分率、颈部和中段缺陷百分率、尾部主段缺陷百分率以及过量残留胞浆百分率;采用精子密度梯度离心法提取检测精子,通过FCM检测精子DFI。12周后追踪并记录三组研究对象相应的配偶妊娠结局:包括临床妊娠率、流产率以及活胎率等。二、实验研究方法:（一）随机收集2016年3月30日2017年9月30日在广州中医药大学第一附属医院生殖医学科男性专科就诊的患者40例,年龄2345岁,诊断为男性不育症和畸形精子症,给予中医辨证为“肾虚血瘀证”者纳入为研究对象（畸形精子组）;选择同期同年龄段在生殖医学科男性专科就诊的健康体检男性（近3个月内配偶有正常怀孕史）、精液检测正常者20例作对照（正常精子组）。两组研究对象分别采用CASA对患者精液进行精液常规参数分析,获得精子总数、精子浓度、精子总活力以及精子运动参数等;采用Diff-Quik方法检测精子形态,计算形态正常精子百分率、畸形精子百分率、畸形精子指数（TZI）、精子畸形指数（SDI）、头部缺陷百分率、颈部和中段缺陷百分率、尾部主段缺陷百分率以及过量残留胞浆百分率;采用精子密度梯度离心法提取检测精子,提取精子总蛋白,采用WB方法分别检测JAK2蛋白和STAT3蛋白的表达水平。（二）随机将上述畸形精子组患者40例;分为补肾活血方组（A组）和不治疗组（B组）;A组（20例）:予以补肾活血方汤剂辩证加减后口服,疗程为12周;B组（20例）:空白组,不予药物治疗;两组研究对象于12周（治疗）前、后采用CASA对患者精液进行精液常规参数分析,获得精子总数、精子浓度、精子总活力以及精子运动参数等;采用Diff-Quik方法检测精子形态,计算形态正常精子百分率、畸形精子百分率、畸形精子指数（TZI）、精子畸形指数（SDI）、头部缺陷百分率、颈部和中段缺陷百分率、尾部主段缺陷百分率以及过量残留胞浆百分率;采用精子密度梯度离心法提取检测精子,提取精子总蛋白,采用WB方法分别检测JAK2蛋白和STAT3蛋白的表达水平。（三）随机收集2016年3月30日2017年9月30日在广州中医药大学第一附属医院生殖医学科男性专科就诊的健康体检男性（近3个月内配偶有正常怀孕史）8例,年龄2345岁,诊断为正常精子纳入为研究对象;常规收集精子,经密度梯度离心法处理后,将不同浓度（0、25、50、100μmol/L）JAK2/STAT3抑制剂AG490与精子在体外共孵育3小时后,分别采用Diff-Quik方法检测精子形态,计算形态正常精子百分率;通过FCM检测精子DFI。结果:一、临床研究结果:（一）补肾活血方组患者治疗后正常形态精子百分率、精子总活力、精子前向运动（PR）较治疗前升高,精子DFI、头部缺陷百分率、尾部缺陷百分率以及过量残留胞浆百分率较治疗前降低,差异均有统计学意义（P<0.05）;补肾活血方组患者治疗后精子畸形指数（TZI）、畸形精子指数（SDI）、颈部和中段缺陷百分率较治疗前降低,精液量、精子浓度、精子总数较治疗前升高,但差异无统计学意义（P>0.05）;维生素E组患者治疗后正常形态精子百分率较治疗前升高,尾部缺陷百分率较治疗前降低,差异均有统计学意义（P<0.05）;患者治疗后精子畸形指数（TZI）、畸形精子指数（SDI）、精子DFI、精液量、精子总数、头部缺陷百分率、颈部和中段缺陷百分率以及过量残留胞浆百分率较治疗前降低,精子浓度、精子总活力和精子前向运动（PR）均较治疗前升高,差异无统计学意义（P>0.05）;不治疗组患者未经治疗,12周后复查尾部缺陷百分率和过量残留胞浆百分率较12周前降低,差异有统计学意义（P<0.05）,正常形态精子百分率、精液量、精子总活力、头部缺陷百分率以及颈部和中段缺陷百分率升高,精子畸形指数（TZI）和畸形精子指数（SDI）无变化,精子DFI、精子浓度、精子总数和精子前向运动（PR）较治疗前降低,差异均无统计学意义（P>0.05）。（二）补肾活血方组分别与维生素E组和不治疗组相比较,补肾活血方组妊娠率和活胎率高于维生素E组和不治疗组,但差异无统计学意义（p>0.05）。二、实验研究结果:（一）JAK2蛋白和STAT3蛋白在正常精子组和畸形精子症组中均有表达;正常精子组精子JAK2蛋白和STAT3蛋白的表达高于畸形精子症组,JAK2蛋白和STAT3蛋白表达水平在畸精子症组显着减弱,正常精子组和畸形精子症组精子JAK2蛋白和STAT3蛋白的表达水平差异有统计学意义（p<0.05）。正常精子组和畸形精子症组中正常形态精子百分率与精子JAK2蛋白和STAT3蛋白的表达成正相关,差异有统计学意义（p<0.05）;畸形精子百分率、畸形精子指数和精子畸形指数与精子JAK2蛋白和STAT3蛋白的表达成负相关,差异有统计学意义（p<0.05）;头部缺陷百分率、颈部和中段缺陷百分率和尾部主段缺陷率与精子JAK2蛋白和STAT3蛋白的表达相关性不一致;过量残留胞浆百分率与精子JAK2蛋白和STAT3蛋白的表达不相关,差异无统计学意义（p>0.05）。（二）JAK2蛋白和STAT3蛋白在补肾活血方组和不治疗组均有表达;补肾活血方组JAK2蛋白和STAT3蛋白表达高于不治疗组,两组间蛋白表达水平差异统计学意义（P<0.05）。补肾活血方组和不治疗组两组患者采用自身前后对比的方式进行比较,补肾活血方组患者治疗后正常形态精子百分率、精子活力、PR、JAK2蛋白以及STAT3蛋白表达较治疗前升高,差异有统计学意义（P<0.05）;精液量、精子浓度较治疗前升高,TZI,SDI较治疗前降低,差异均无统计学意义（p≥0.05）;不治疗组患者12周后正常形态精子百分率、精液量、精子浓度、精子活力、PR、TZI以及JAK2蛋白表达较治疗前升高,SDI、STAT3蛋白表达较治疗前降低,差异均无统计学意义（p≥0.05）。（三）未使用AG490孵育及使用AG490孵育精子3小时后正常形态精子百分率和精子DFI显示:精子的正常形态百分率随着AG490浓度的升高而降低,精子的DFI随着AG490的升高而升高,差异均有统计学意义（P<0.05）;但正常形态精子和精子DFI两者经均数相关性分析显示没有相关性（R=0.24,P=0.14）。结论:一、补肾活血方能提高男性不育畸形精子症患者精子的正常形态精子百分率,降低精子DFI,降低精子头部缺陷百分率和尾部缺陷百分率,提高其配偶的妊娠率。二、正常精子和畸形精子症患者精子均有JAK2蛋白和STAT3蛋白的表达;正常精子中JAK2/STAT3表达高于畸形精子症患者精子,精子畸形可能与精子JAK2蛋白和STAT3蛋白的表达降低有关。补肾活血方药能提高畸形精子症患者正常形态精子百分率,该过程可能与精子JAK2蛋白和STAT3蛋白的表达增强,JAK2/STAT3信号通路活化有关。三、JAK2/STAT3抑制剂AG490可使体外正常精子的正常形态精子百分率降低,精子DFI升高。正常形态精子百分率降低和精子DFI升高可能与精子JAK2/STAT3信号转导通路系统受抑制有关。

二、男性不育症精子异常的原因及与有关病原体关系的探讨（论文开题报告）

（1）论文研究背景及目的

此处内容要求：

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例：

本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。

（2）本文研究方法

调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。

三、男性不育症精子异常的原因及与有关病原体关系的探讨（论文提纲范文）

（1）桂药生精胶囊对不育症大鼠睾丸组织Bcl-2/Bax、Caspase-9/3表达的影响（论文提纲范文）

（2）针挑治疗肾虚血瘀型男性不育畸形精子症的机制研究（论文提纲范文）

（3）基于Bcl-2/Bax通路及线粒体功能探讨龟甲胶治疗肾阴亏虚型少弱精子症的作用机制（论文提纲范文）

（4）李曰庆教授治疗肾虚型少弱精子症组方分析及网络药理学研究（论文提纲范文）

（5）补肾生精法治疗少弱精子症的数据挖掘及其调控生精细胞的机制研究（论文提纲范文）

（6）男性精子参数异常与龈沟液炎性因子相关性研究（论文提纲范文）

（7）灵归方对奥硝唑诱导的弱精子症模型大鼠附睾功能影响的实验研究（论文提纲范文）

（8）精子中TDP-43、SPANX蛋白的表达及其与AID任娠结局的相关性研究（论文提纲范文）

（9）左归丸治疗肾阴不足型男性不育少弱精子症的临床和实验研究（论文提纲范文）

（10）补肾活血方对男性不育畸形精子症精子JAK2/STAT3信号通路的影响及机制研究（论文提纲范文）

四、男性不育症精子异常的原因及与有关病原体关系的探讨（论文参考文献）

• [1]桂药生精胶囊对不育症大鼠睾丸组织Bcl-2/Bax、Caspase-9/3表达的影响[D]. 梁景辉. 广西中医药大学, 2021(02)
• [2]针挑治疗肾虚血瘀型男性不育畸形精子症的机制研究[D]. 袁晟. 广州中医药大学, 2021
• [3]基于Bcl-2/Bax通路及线粒体功能探讨龟甲胶治疗肾阴亏虚型少弱精子症的作用机制[D]. 盛文. 湖南中医药大学, 2021(02)
• [4]李曰庆教授治疗肾虚型少弱精子症组方分析及网络药理学研究[D]. 赵琦. 北京中医药大学, 2021(08)
• [5]补肾生精法治疗少弱精子症的数据挖掘及其调控生精细胞的机制研究[D]. 王继升. 北京中医药大学, 2021(01)
• [6]男性精子参数异常与龈沟液炎性因子相关性研究[D]. 谢春雨. 上海交通大学, 2020(01)
• [7]灵归方对奥硝唑诱导的弱精子症模型大鼠附睾功能影响的实验研究[D]. 晏斌. 中国中医科学院, 2020(01)
• [8]精子中TDP-43、SPANX蛋白的表达及其与AID任娠结局的相关性研究[D]. 周慧. 郑州大学, 2020(02)
• [9]左归丸治疗肾阴不足型男性不育少弱精子症的临床和实验研究[D]. 孙松. 北京中医药大学, 2018(08)
• [10]补肾活血方对男性不育畸形精子症精子JAK2/STAT3信号通路的影响及机制研究[D]. 张淑婷. 广州中医药大学, 2018(02)

标签：弱精子症论文;  畸形精子论文;  精子活动率论文;  精子形态分析论文;  睾丸萎缩论文;