一、多西紫杉醇体外抑制血管生成的作用（论文文献综述）
李玉洁[1]（2021）在《多西紫杉醇前药/血卟啉共组装纳米粒的构建及其药效学与药动学考察》文中研究指明目的:本课题采用单硫化物修饰的多西紫杉醇（docetaxel,DTX）前药（DSD,实验室前期合成）与血卟啉（hematoporphyrin,HP）物理联合制备共组装纳米粒,并对制剂的制剂学性质、4T1细胞的体外抗肿瘤活性、大鼠体内的药动学特征及4T1细胞接种的Balb/c小鼠体内肿瘤靶向性分布和药效学效果进行研究与评价,为化学疗法和光动力疗法的协同抗肿瘤研究提供新的研究思路。方法:1.多西紫杉醇前药/血卟啉共组装纳米粒的制备与评价采用荧光分析法建立HP的体外分析方法,高效液相色谱法（HPLC）建立DTX和DSD的体外分析方法;采用纳米沉淀法制备多西紫杉醇前药/血卟啉共组装纳米粒（DSD/HP NPs）;采用单因素优化和响应面优化法筛选出较优处方,低速离心法测量纳米粒的包封率（EE）和载药量（DL）;采用透射电镜（TEM）观察纳米粒外观形态;以粒径和PDI为评价指标考察纳米粒在不同介质中的物理稳定性和长期稳定性;采用小杯法考察纳米粒中前药的氧化还原释放行为和HP的释放行为。2.多西紫杉醇前药/血卟啉共组装纳米粒体外抗肿瘤活性研究采用CCK-8法考察不同浓度的DSD/HP NPs在有无近红外光（Ni R）照射对4T1细胞的增值抑制作用;采用2’,7’-二氯二氢荧光素二乙酸酯（DCFH-DA）荧光探针法评价细胞产生活性氧情况;采用Annexin V-FITC/PI双染法及DAPI染色法检测细胞凋亡情况。3.多西紫杉醇前药/血卟啉共组装纳米粒大鼠体内药动学研究采用液相-串联质谱法（LC-MS/MS）建立大鼠血浆中DTX的含量分析方法,考察DTX注射剂（DTX-Inj）、DTX前药纳米粒（DSD NPs）和DSD/HP NPs分别尾静脉注射进入大鼠体内后,大鼠血浆中的DTX含量随时间变化,绘制血药浓度与时间变化曲线并采用非隔室模型计算主要的药动学参数,用于评价药物在大鼠体内的药动学行为。4.多西紫杉醇前药/血卟啉共组装纳米粒小鼠体内组织分布和药效学研究建立4T1细胞接种的Balb/c小鼠模型,通过小动物活体成像试验考察Di R标记的DSD/HP NPs在Balb/c小鼠体内的肿瘤靶向性和组织分布;考察空白对照组:生理盐水（Saline）,药物组:DTX-Inj、HP-Sol+Ni R、DSD NPs、MIX-Sol+Ni R、DSD/HP NPs,DSD/HP NPs-10+Ni R（高剂量组）、DSD/HP NPs-5+Ni R（中剂量组）、DSD/HP NPs-3+Ni R（低剂量组）对Balb/c荷瘤小鼠的体重变化、肿瘤生长变化及H&E组织染色的影响,综合评价DSD/HP NPs的体内抗肿瘤效果。结果:1.多西紫杉醇前药/血卟啉共组装纳米粒的制备与评价建立了HP、DTX和DSD的体外分析方法,采用单因素优化和响应面优化法筛选出较优处方,制备的纳米粒溶液外观呈深紫色,粒径为105.16±1.24 nm,PDI为0.168±0.15,纳米粒中DSD和HP包封率分别为96.27±1.03%和97.70±0.20%,纳米粒呈类球型,外观圆整;纳米粒在不同介质中的具备良好的物理稳定性和长期稳定性;DSD/HP NPs在含有10 mmol/L DTT（H2O2）的30%乙醇的PBS介质中,DTX24 h内的累积释放量分别为69.3%（88.4%）;在p H 7.4的磷酸盐缓冲液（PBS）中,DSD/HP NPs中的HP累积释放量24 h达到85.0%。2.多西紫杉醇前药/血卟啉共组装纳米粒体外抗肿瘤活性研究CCK-8试验结果显示:DTX-Sol、DSD NPs、MIX-Sol、DSD/HP NPs组不加Ni R照射和MIX-Sol+Ni R和DSD/HP NPs+Ni R组加Ni R照射,均有较好的抑制4T1细胞增殖的能力,且表现出时间和浓度依赖性,其中DTX-Sol、DSD NPs、MIX-Sol、DSD/HP NPs、MIX-Sol+Ni R和DSD/HP NPs+Ni R在24 h的IC50值分别为0.91±0.06、2.90±0.14、2.73±0.12、2.94±0.10、2.09±0.04和2.04±0.04μmol/L,在48h的IC50值分别为0.19±0.00、1.57±0.03、1.60±0.06、1.39±0.02、1.03±0.07和0.97±0.02μmol/L;细胞活性氧试验结果显示DSD/HP NPs加Ni R照射后细胞内产生更多的活性氧（P<0.01）;细胞凋亡试验结果显示加MIX-Sol,DSD/HP NPs组加Ni R照射后显着诱导了4T1细胞的凋亡（P<0.01）。3.多西紫杉醇前药/血卟啉共组装纳米粒大鼠体内药动学研究静脉注射DTX-Inj、DSD NPs和DSD/HP NPs后,血药浓度时间曲线下面积(AUC0-t)分别为4876.45±1104.82、13351.75±6118.42和9817.28±3612.52 ng/L·h,末端消除半衰期(t1/2 z)分别为2.55±3.53、11.01±5.91和8.79±5.76 h。4.多西紫杉醇前药/血卟啉共组装纳米粒在小鼠体内组织分布和药效学研究小动物活体成像试验结果显示:小鼠尾静脉注射Di R标记的DSD/HP NPs后肿瘤部位的荧光强度随时间的增加而加强,48 h后荧光主要富集于肿瘤组织;体内抗肿瘤试验结果显示,观察至第18天时,各组肿瘤体积大小为:Saline（1240±52 mm3）>HP-Sol+Ni R（688±57 mm3）>MIX-Sol+Ni R（680±55 mm3）>DTX-Inj（611±53mm3）>DSD NPs（566±14 mm3）≈DSD/HP NPs-3+Ni R（565±44 mm3）>DSD/HP NPs（535±48 mm3）>DSD/HP NPs-5+Ni R（491±25 mm3）>DSD/HP NPs-10+Ni R（395±63 mm3）;H&E染色结果显示制备的DSD/HP NPs无明显组织毒性,抗肿瘤效果好。结论:1.多西紫杉醇前药/血卟啉共组装纳米粒的制备与评价采用单因素优化和效应面优化后的纳米粒粒径小,载药量高,外观圆整呈类球形,具备良好的物理稳定性和长期稳定性,且DSD/HP NPs中DTX和HP能够在模拟肿瘤氧化还原环境和体内环境的介质中缓慢释放。2.多西紫杉醇前药/血卟啉共组装纳米粒体外抗肿瘤活性研究DSD/HP NPs加Ni R照射后对4T1细胞具有较强的抑制作用,且在细胞体内产生较多的活性氧,能够显着诱导4T1细胞凋亡。3.多西紫杉醇前药/血卟啉共组装纳米粒大鼠体内药动学研究DSD/HP NPs在大鼠体内与DTX-Inj相比,显着提高了DTX的血药浓度,增加了DTX在大鼠体内的循环时间。4.多西紫杉醇前药/血卟啉共组装纳米粒在小鼠体内的组织分布和药效学研究Di R标记的DSD/HP NPs在4T1细胞接种的Balb/c小鼠模型体内具有一定的肿瘤组织靶向性,在肿瘤组织以外其他主要的组织中分布少。DSD/HP NPs加Ni R照射后表明出明显的体内抗肿瘤活性,显着抑制肿瘤的增长,且对正常组织的毒性小。
李惠兰[2]（2021）在《新型NO供体聚合物紫杉醇胶束的制备及抗肿瘤作用和机制研究》文中指出目的:设计与合成NO供体（mPEG-PLA-NO）型可生物降解的聚合物胶束包载紫杉醇作为纳米药物输送系统（NO/PTX）,旨在增强紫杉醇的溶解度,降低毒性和增强抗肿瘤活性,并对其进行急性毒性研究,药物动力学研究,抗肿瘤的作用和机制研究以及药性评价,为新药开发提供依据。方法:第一部分一氧化氮供体型聚合物紫杉醇胶束的制备和表征选用呋咱型一氧化氮供体,采用活性酸酐法制备了m PEG-PLA-NO两亲性聚合物胶束,采用核磁共振谱（1H NMR）,凝胶渗透色谱仪对m PEG-PLA-NO进行分析。采用自乳化法制备包载紫杉醇于聚合物胶束内核的一氧化氮供体型聚合物紫杉醇纳米胶束（NO/PTX）,采用透射电镜,马尔文激光散射粒度仪对NO/PTX进行形态表征。采用高效液相法对药物载药量和包封率进行了检测和计算。采用Greiss法测定NO/PTX体外一氧化氮的释放。第二部分一氧化氮供体型聚合物紫杉醇胶束急性毒性研究SPF级昆明小鼠60只,适应喂养3 d后,分为m PEG-PLA组和m PEG-PLA-NO组。从800 mg/kg剂量开始,以20 m L/kg的给药体积进行尾静脉注射m PEG-PLA或m PEG-PLA-NO,每个剂量组最少6只小鼠。计算出LD50,进行载药材料安全性评价。另取SPF级昆明小鼠120只,适应喂养3 d后,分为PTX组,NO/PTX组,每组KM小鼠40只,禁食不禁水,称重标记。进行PTX组与NO/PTX组的急性毒性比较。按照15、30、45、60、75 mg/kg浓度梯度尾静脉注射的紫杉醇。在确定Dn和Dm后,根据给药间隔i,以i或i的倍数确定3-5个给药剂量。每个剂量至少5只小鼠,观察,记录状态和死亡情况。计算出LD50,进行药物安全性的比较。观察,记录状态和死亡情况。并且连续观察14 d内小鼠的体重变化,以及毛色、四肢活动、进食、饮水、排泄等情况,并记录各组有无中毒情况出现,以及是否有死亡情况。第三部分一氧化氮供体型聚合物紫杉醇胶束药物动力学研究采用H22细胞建立的雄性KM小鼠异种移植模型,研究了药代动力学和组织分布,以描述NO/PTX在体内的分布。通过尾静脉给小鼠注射盐水中的PTX（20 mg/kg,以紫杉醇计算）或NO/PTX（50 mg/kg,以紫杉醇计算）溶液。在0、0.05、0.5、1、2、3、4、8、12和24 h收集血浆和肿瘤。在每个采样时间点,用乙醚麻醉3至4只小鼠,并通过心脏穿刺从每只小鼠收集血液。然后,处死这些小鼠并收集所有肿瘤。离心后,从每只小鼠收集约100μL血浆并冷冻。通过HPLC测定血浆和肿瘤中PTX的浓度,并以多西紫杉醇为内标,通过HPLC-MS/MS测定心脏,肝脏,脾脏,肺和肾脏中PTX的浓度。使用DAS 2.0软件包（中国药理学会）通过房室分析处理药代动力学参数。第四部分一氧化氮供体型聚合物紫杉醇胶束体外抗肿瘤细胞及对P-gp蛋白的影响体外培养SMMC-7721,SCG-7901,SW480,Sk-ov-3,A549,Bel-7402,HCT-116,MCF-7,Hela,HEPG-2,HT29和NCI-H460共12株人源性肿瘤细胞,采用MTT法检测PTX和NO/PTX对肿瘤细胞的抑制率,并计算半效抑制浓度IC50,实验至少重复3次。体外培养SMMC-7721,SCG-7901,SW480,Sk-ov-3,A549,Bel-7402,HCT-116,MCF-7,Hela,HEPG-2,HT29和NCI-H460共12株人源性肿瘤细胞,采用Western blotting检测PTX和NO/PTX干预后,外排蛋白P-gp蛋白的表达。第五部分一氧化氮供体型聚合物紫杉醇胶束抗结肠癌和紫杉醇耐药性结肠癌作用机制研究通过体外培养人HCT116细胞,PTX,NO/PTX或不含一氧化氮供体的聚合物紫杉醇胶束（PTX Nano）干预24 h后,采用Hoechest/PI染色,倒置荧光显微镜观察细胞数量和形态;流式细胞术观察PTX,NO/PTX对HCT116细胞周期的影响;细胞划痕实验检测PTX,NO/PTX对细胞迁移的影响;Western Blot检测与细胞凋亡和增殖迁移相关蛋白的表达。通过体外培养人HCT116细胞和Taxol/HCT116细胞,倒置荧光显微镜观察两者细胞形态差异;CCK8实验检测PTX和NO/PTX对HCT116细胞和Taxol/HCT116细胞增殖的影响,并计算IC50值和Taxol/HCT116细胞的耐药指数;Western blotting检测HCT116与Taxol/HCT116细胞P-gp蛋白的表达差异以及PTX、NO/PTX对Taxol/HCT116细胞紫杉醇耐药关键蛋白P-gp蛋白和β3-Tublin蛋白的表达。第六部分一氧化氮供体型聚合物紫杉醇胶束抗肝癌作用机制研究通过体外培养人Bel-7402细胞,CCK8检测PTX和NO/PTX对Bel-7402细胞的抑制作用。采用Hoechst 33258染色观察细胞形态和数量。建立H22肝癌小鼠模型,分为空白组,m PEG-PLA组和m PEG-PLA-NO组,给药3次,每次间隔72 h,末次给药后72 h取瘤,称量瘤重计算抑瘤率（%）,观察m PEG-PLA和m PEG-PLA-NO干预后对各移植瘤的影响。通过建立H22肝癌小鼠模型,通过尾静脉注射PTX,Genexol?-PM和NO/PTX,并以生理盐水作为对照。同样给药3次,每次间隔72 h,末次给药后72 h取瘤,称量瘤重计算抑瘤率（%）,观察PTX和NO/PTX干预后对各移植瘤的影响。通过体外培养人Bel-7402细胞,给与PTX和NO/PTX 48 h后,提取Bel-7402细胞蛋白质,采用试剂盒检测细胞内SOD、MDA和GSH-PX水平。流式细胞术观察PTX和NO/PTX对细胞Bel-7402凋亡检测。Western Blot检测NO/PTX对于铁死亡,焦亡,内质网应激相关蛋白的作用。第七部分一氧化氮供体型聚合物紫杉醇胶束药性评价SD大鼠40只,分为空白组,PTX组,NO/PTX组,PTX Nano组。每组10只。每三天给药一次,共给药七次。检测大鼠体温和体重变化,安捷伦1290串联6460三重四级杆质谱仪检测大鼠尿液代谢组。正交偏最小二乘（OSC-PLS-DA）分析数据,进行药性判别。结果第一部分一氧化氮供体型聚合物紫杉醇胶束的制备和表征制备并合成了m PEG-PLA-NO,核磁共振谱（1H NMR）结构确证其分子结构,凝胶渗透色谱仪（GPC）分析m PEG-PLA的PDI为1.19,m PEG-PLA-NO的PDI为1.13。制备了聚合物胶束NO/PTX,粒径为30±0.58 nm,zeta电位为-2.76±0.25。透射电镜结果表明NO/PTX呈球形,分布均匀。NO/PTX的包封率为98.6%,NO/PTX的紫杉醇载药量4.69%。Greiss法测定一氧化氮释放率,结果表明,与硝酸甘油和PTX相比,NO/PTX在10 h内具有良好的释放性能,在6 h内释放率最高,达到66.8%。第二部分一氧化氮供体型聚合物紫杉醇胶束急性毒性研究通过CALC 2.0软件和BLISS方法确定半数致死量(LD50)和最大非致死剂量（MNLD）。m PEG-PLA和m PEG-PLA-NO的MNLD分别为2000 mg/kg和1500 mg/kg,表明m PEG-PLA和m PEG-PLA-NO均为无毒两亲性共聚物。PTX的最大耐受剂量LD0为36.3 mg/kg,绝对致死剂量LD100为45 mg/kg。NO/PTX的最大耐受剂量LD0为80 mg/kg,绝对致死剂量LD100为160 mg/kg。KM小鼠中PTX和NO/PTX的LD50分别为39.9 mg/kg和137.1 mg/kg。NO/PTX的急性毒性比PTX降低了3.43倍。第三部分一氧化氮供体型聚合物紫杉醇胶束药物动力学研究血清样品预处理后,其中的内源性物质不干扰紫杉醇和内标的测定。在此色谱条件下血浆中多西紫杉醇、紫杉醇的保留时间分别为19.43 min和22.08 min。按照加权最小二乘法计算线性关系式为:Y=0.0618X-0.0648（R2=0.9986）,（n=3）表明血浆紫杉醇的质量浓度在0.5～150μg/m L内线性关系好。按照加权最小二乘法计算线性关系式为:Y=0.0783X-0.2581（R2=0.9961）,（n=3）表明肿瘤组织紫杉醇的质量浓度在1～150μg/m L内线性关系好。紫杉醇浓度由高到低逐渐稀释,测定出最低检测限紫杉醇浓度为0.25μg/m L,最低定量限血浆紫杉醇浓度为0.5μM/m L,肿瘤组织为1μg/m L,准确度均在85%-115%之间,精密度RSD均小于15%。血浆提取回收率分别为103.2%,99.4%,95.7%,肿瘤提取去回收率分别为112.0%,95.2%,95.5%。内标提取回收率为92.55%。小鼠尾静脉注射PTX或NO/PTX后在体内的代谢与二室模型相符。小鼠尾静脉注射50 mg/kg剂量的NO/PTX后,获得的峰值血浆浓度(Cmax)为105.2μg/m L,尾静脉注射20 mg/kg剂量的PTX后,Cmax为71.7μg/m L。PTX的消除半衰期(t1/2β)1.5 h,NO/PTX的t1/2β为1.7 h。NO/PTX和PTX的血浆浓度-时间曲线下的面积(AUC（0-∞）)分别为128.1μg.h/m L和86.9μg.h/m L/kg。NO/PTX的AUC（0-∞）是PTX的1.35倍。在给药用后,紫杉醇广泛分布于大多数组织中。其中,在肿瘤中明显发现了最高的紫杉醇浓度。在所有时间点,肿瘤中NO/PTX组的紫杉醇浓度均高于PTX组,并在3 h左右达到最大紫杉醇浓度。除肿瘤外的各组织器官中紫杉醇的浓度较低,在KM小鼠组织器官中,紫杉醇最高浓度低于10μg/m L,大部分在24 h以后消除完全。给药后（3 min以后）,PTX在组织器官中分布顺序为:肿瘤>肾>肺>心>脾>肝,NO/PTX在各组织器官中分布顺序为:肿瘤>肺>肾>心>脾>肝。第四部分一氧化氮供体型聚合物紫杉醇胶束体外抗肿瘤细胞及对P-gp蛋白的影响本实验采MTT法对12种人源性肿瘤细胞进行药效学研究,实验均最少重复三次。结果显示NO/PTX在人乳腺癌细胞MCF-7,人胃腺癌细胞SCG-7901,人结肠癌细胞SW480,人结直肠腺癌细胞HCT-116,人肝癌细胞Bel-7402的IC50值较国产紫杉醇注射液低,表明其抗肿瘤效果优于国产紫杉醇注射液。电泳显色结果显示,在紫杉醇0.01μg/mL的浓度下,NO/PTX组Bel-7402细胞SW480细胞,Hela细胞,SMMC-7721细胞,HCT-116细胞,Hep G2细胞,MCF-7细胞,HT29细胞,SCG-7901细胞的P-gp蛋白表达量低于PTX组,表明NO/PTX增强紫杉醇抗肿瘤效果可能与抑制P-gp蛋白相关。第五部分一氧化氮供体型聚合物紫杉醇胶束抗结肠癌和紫杉醇耐药性结肠癌作用机制研究首先,通过Hoechst/PI染色,可以更直观的观察到NO/PTX较PTX具有更好的抗结肠癌HCT116作用。通过细胞周期实验,我们检测到NO/PTX在0.001μg/m L和PTX 0.01μg/m L两个浓度对细胞G2M期的抑制作用均大于PTX（NO/PTX抑制率为39.6%和50%,PTX为30.2%和36.3%）。Western Blot检测结果表明,NO/PTX较空白组,PTX组更能够降低HCT116细胞P-gp蛋白的表达。Western Blot检测同时表明,NO/PTX较空白组和PTX组,能够增加促凋亡蛋白BAX表达,降低抗凋亡蛋白Bcl-2表达,升高BAX/Bcl-2的比值,增加Cleaved Caspase 3的表达,显示出比市售紫杉醇注射液PTX更好的抗人结肠癌HCT116的结果。无一氧化氮供体的聚合物紫杉醇纳米胶束PTX Nano较空白组和PTX组,也能够降低HCT116细胞P-gp蛋白和增加Cleaved Caspase 3的表达,但降低P-gp蛋白和增加Cleaved Caspase 3的表达的作用比不上NO/PTX。PTX Nano证明m PEG-PLA聚合物胶束具有一定的抗肿瘤制剂优势,同时表明NO/PTX抗肿瘤作用不仅仅是因为制剂优势,还是紫杉醇与一氧化氮供体双重阻断的结果。其次,细胞划痕实验表明,NO/PTX较空白组和PTX组具有更好的抗HCT116细胞增殖迁移的能力。Western Blot检测结果表明,NO/PTX降低Vimentin蛋白表达,增加ZO-1蛋白表达,降低β3-Tublin和p-GSK-3β表达。PTX Nano较NO/PTX显示出更好的降低Vimentin蛋白表达,增加ZO-1蛋白表达能力,然而对于没有显示出降低β3-Tublin和p-GSK-3β表达作用。再者,NO/PTX抗结肠癌肿瘤优势还体现在对于结肠癌耐药细胞具有更好的抗肿瘤作用。我们首先对耐紫杉醇人结肠癌细胞Taxol/HCT116细胞的细胞形态,耐药稀释和P-gp蛋白表达进行了研究。确认Taxol/HCT116细胞较HCT116细胞具有强的紫杉醇耐药性。CCK8实验分析PTX和NO/PTX对taxol/HCT116细胞的增殖的影响,结果表明NO/PTX(IC50:1.2±0.4μg/m L)的IC50显着低于PTX(IC50:5.6±1.9μg/m L),NO/PTX具有比PTX低至4.66倍的IC50值,表明NO/PTX较PTX具有更加显着的抗结肠癌耐药性作用。Western Blot检测结果表明,NO/PTX较空白组和PTX组,显着降低了紫杉醇耐药性的关键蛋白P-gp蛋白和β3-tublin蛋白的表达。第六部分一氧化氮供体型聚合物紫杉醇胶束抗肝癌作用机制研究首先,我们用CCK8检查了NO/PTX和PTX对肝癌Bel-7402细胞的影响。PTX的IC50为7.8±0.4μg/m L,NO/PTX IC50为3.7±1.1μg/m L。这些结果表明,NO/PTX对Bel-7402细胞的毒性比PTX强。用Hoechst 33258染色法检测各组细胞凋亡情况有相同结论。其次,本部分首先制备了H22肝癌荷瘤小鼠模型,实验结果表明,聚合物m PEG-PLA没有显示任何抗肿瘤反应,在m PEG-PLA-NO组中观察到轻微的抗肿瘤作用。在PTX,Genexol?-PM和NO/PTX组中观察到了显着的抗肿瘤活性。PTX,Genexol?-PM和NO/PTX组在低剂量（10 mg/kg）下显示出可比的抗肿瘤活性（抑制率分别为39%,36%和41%）。此外,当剂量达到15 mg/kg时,NO/PTX的抗肿瘤作用明显强于PTX和Genexol?-PM组（PTX,Genexol?-PM和NO/PTX组分别为53%,41%和67%）,证明NO和紫杉醇的协同作用增强了抗肿瘤活性。此外,我们阐明了NO/PTX诱导肝癌细胞死亡是由铁死亡,焦亡,内质网应激（ERS）和凋亡相关网络介导的。NO/PTX通过增加活性氧（ROS）和丙二醛的水平,并降低谷胱甘肽过氧化物酶,超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶4的水平引起铁死亡。使用铁死亡抑制剂Ferrostatin-1或ROS抑制剂N-乙酰半胱氨酸会降低NO/PTX的抗癌活性。此外,NO/PTX上调了caspase-1的表达,下调了炎性细胞因子IL-1β,这是细胞焦亡的关键蛋白。此外,NO/PTX上调了一系列调节剂的表达,例如钙结合蛋白,需肌醇酶1a（IRE1a）,葡萄糖调节蛋白78（GRP78）,cleaved-caspase-7,cleaved-caspase-3和降低的B-细胞淋巴瘤2（BCL-2）,核NF-κB,可诱导Bel-7402内质网介导的应激和凋亡。更重要的是,我们证明了NO/PTX增强的抗肿瘤作用可能与下调多药耐药转运蛋白P-gp蛋白,β3-微管蛋白,致敏紫杉醇化疗有关。最后,我们通过流式细胞仪,紫杉醇干预48 h后,检测了Bel-7402细胞凋亡率。NO/PTX在各浓度的凋亡率均高于PTX,表明NO/PTX较PTX具有更好的抗Bel-7402细胞作用。第七部分一氧化氮供体型聚合物紫杉醇胶束药性评价PTX组,NO/PTX组和PTX Nano组均位于寒性药区域,无明显的差异。表明PTX,NO/PTX和PTX Nano均属于寒性药,通过制剂手段制备成聚合物紫杉醇胶束或者连接供体的聚合物紫杉醇胶束,均没有改变药物的药性。结论1、NO/PTX是一种粒径为30 nm左右,呈球形,分布均匀的一氧化氮供体型聚合物紫杉醇胶束,NO/PTX的包封率为98.6%,NO/PTX的紫杉醇的载药量4.69%,具有良好的一氧化氮释放性能。载药材料m PEG-PLA和m PEG-PLA-NO均具有良好的安全性。NO/PTX耐受性好,最大耐受剂量是PTX的2.2倍。NO/PTX主要分布于肿瘤组织中,在组织器官中的浓度低。2、NO/PTX对MCF-7,SCG-7901,SW480,HCT-116,Bel-7402细胞中抗肿瘤效果优于国产紫杉醇注射液PTX,其增强紫杉醇的抗肿瘤效果与抑制P-gp蛋白表达相关。3、NO/PTX较PTX具有更好的抗结肠癌HCT116作用和抗HCT116细胞增殖迁移的能力,与紫杉醇和一氧化氮供体双重阻断相关。NO/PTX较PTX对于结肠癌耐药具有更好的抗紫杉醇耐药性,NO/PTX的抗紫杉醇耐药性作用与NO/PTX抑制P-gp和β3-tublin蛋白表达相关。4、NO/PTX诱导肝癌细胞死亡是由铁死亡,焦亡,内质网应激和凋亡相关网络介导的。抑制铁死亡降低了NO/PTX对Bel-7402细胞毒性。高浓度的NO/PTX引起Bel-7402细胞主要死亡方式为凋亡,而焦亡发生在NO/PTX中低浓度。5、PTX,NO/PTX和PTX Nano均属于寒性药,通过制剂手段制备成PTX Nano或者连接供体的NO/PTX,均没有改变药物的药性。
王一同[3]（2021）在《华蟾素注射液治疗结肠癌腹水的优效人群分析及对VM的作用机制研究》文中研究指明研究背景恶性腹水是晚期结肠癌患者的常见并发症,是临床治疗的难点。西医目前主要采用腹腔穿刺置管引流、全身化疗或联合腹腔灌注化疗等方法,但恶性腹水患者多为肿瘤晚期,经过多程放、化疗治疗,体质较差,再次化疗的敏感性及耐受性降低,且恶性腹水多为血性,无法大量置管引流,使腹胀、喘憋等症状持续存在,严重影响生活质量。因此需探索更为温和、有效的治疗方法。中药腹腔灌注,可避免口服汤药引起的胃肠不适,副反应小,近年来广泛应用于恶性腹水的临床治疗。本团队致力于华蟾素注射液腔内灌注治疗研究多年,发现华蟾素注射液对恶性浆膜腔积液有一定的疗效,庄等研究发现,华蟾素注射液腔内灌注治疗恶性浆膜腔积液,有效率为66.42%;杨等研究发现,华蟾素注射液腔内灌注对于恶性胸水有效率为60.00%;袁等研究发现,华蟾素注射液对于消化系统肿瘤来源恶性腹水有效率为75.4%,疗效更好,但前期研究对于不同癌种患者分层后病例数较少,未进行具体分层讨论。恶性腹水的生成与血管新生密切相关。本团队前期基础研究发现华蟾素注射液能够降低恶性腹水中的红细胞数量,使腹水颜色变浅,推测华蟾素注射液可能通过抑制肿瘤血管新生干预恶性腹水的生成。血管生成拟态（Vasculogenic Mimicry,VM）是近年来提出的全新肿瘤血管新生模式,可能与传统内皮细胞参与的肿瘤血管新生共同促进恶性腹水的生成。既往多数研究关注在华蟾素对内皮细胞参与的肿瘤血管新生的影响,鲜有研究探究华蟾素对VM形成的影响。研究目的临床部分:明确华蟾素注射液腹腔灌注治疗对于结肠癌这一单一病种来源的恶性腹水的疗效及该治疗方法对应的优效人群特征,以期为华蟾素注射液腹腔灌注治疗结肠癌恶性腹水提供更为个体化的临床指导。实验部分:由临床现象探索内在机制。以VM为新切入点,通过体内、体外实验观察华蟾素注射液对结肠癌HCT116细胞VM形成的影响及作用机制,从而更为全面地从肿瘤血管新生角度阐述华蟾素注射液腹腔灌注抑制结肠癌恶性腹水的作用机制。研究方法临床部分:采用单臂回顾性研究方法,收集2010年1月1日～2020年12月31日于北京中医药大学东方医院肿瘤科行华蟾素注射液腹腔灌注治疗的结肠癌恶性腹水的患者临床资料,从腹水量控制率、腹水质改善率、KPS评分改善情况及患者生存期方面进行疗效评价,同时评价安全性。进一步对比不同因素（如肿瘤原发病特点、转移情况、整体及局部中医辨证分型、合并全身治疗等）对疗效的影响,从中筛选优效病例,总结优效人群特征。实验部分:（1）采用结肠癌HCT116细胞腹腔+脾脏原位接种法建立BALB/C裸鼠结肠癌血性腹水模型;观察造模前后及华蟾素注射液干预前后裸鼠一般体征、体重、腹围、腹水量、腹水红细胞数量及腹腔转移瘤瘤重等。（2）采用CoCl2化学诱导建立结肠癌HCT116细胞体外缺氧模型;采用CCK-8实验、细胞划痕实验、Transwell实验检测缺氧微环境及华蟾素注射液对结肠癌HCT116细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。（3）采用Matrigel基质胶细胞三维培养建立结肠癌HCT116细胞体外VM模型;通过PAS-CD31组织化学与免疫组化双染法显示结肠癌HCT116细胞体内VM的形成;显微镜下计数VM形成数目,观察缺氧微环境及华蟾素注射液对结肠癌HCT116细胞体内、体外VM形成的影响。（4）采用RT-qPCR、Western-blot实验检测缺氧微环境及华蟾素注射液对结肠癌 HCT116 细胞 VM 形成相关靶点 HIF-1α、VEGF、MMP2、MMP9、VE-cadherin mRNA及蛋白表达的影响。研究结果临床部分:（1）腹水量疗效评价:研究共纳入135例患者。灌注后腹围较灌注前显着减小（P<0.01）;完全缓解2例,部分缓解25例,稳定56例,合计有效83例,无效52例,总有效率61.5%。（2）腹水质疗效评价:灌注后腹水红细胞数、腹水肿瘤标记物、腹水乳酸脱氢酶水平较灌注前显着下降（P<0.01）;腹水红细胞较治疗前下降≥25%者94例,总有效率74.0%;腹水肿瘤标记物较灌注前下降≥25%者70例,总有效率55.1%,其中CEA、CA199、CA724水平下降显着,铁蛋白水平较灌注前差异无统计学意义（P>0.05）;腹水乳酸脱氢酶较治疗前下降≥25%者50例,总有效率39.4%。（3）KPS评分疗效评价:灌注后KPS评分较灌注前显着提高（P<0.01）;较治疗前提高者41例,较治疗前稳定者82例,较治疗前减少者12例。（4）生存情况疗效评价:纳入患者截至末次随访,仍存活者2例,腹水生存期为1～31个月,平均腹水生存期5.66±4.59个月,中位腹水生存期4.00个月;腹水1年生存率为9.6%,2年生存率为3.7%,未见大于3年生存者。（5）安全性评价:出现不良反应者27例,占比20.0%,主要不良反应为腹痛（10例）、发热（11例）、恶心呕吐（3例）、腹泻（3例）,多可耐受或对症治疗后可较快缓解,为1级轻度不良反应。未见由药物引起的骨髓抑制、肝、肾功能异常及心电图改变,未见腹腔感染、肠梗阻、消化道出血等严重并发症,安全性良好。（6）短期疗效优效人群特征分析:对于男性、有饮酒史、左半结肠、灌注前血液NLR≤2.81、初诊即诊断恶性腹水、血性腹水、全身辨证含瘀毒证,全身辨证非肝肾阴虚证、局部辨证为湿热毒证及合并全身中医治疗患者的腹水量控制方面疗效更好,其中结肠癌位置、腹水性质、合并全身中医治疗是影响腹水量控制率的独立预后因素;对于有饮酒史、无肝转移、有腹腔淋巴结转移、无胆红素升高、血性腹水、局部辨证为湿热毒证及合并全身中医治疗患者的腹水颜色改善方面疗效更好,其中肝转移、胆红素升高、腹水性质、局部辨证为影响腹水颜色改善率的独立预后因素。（7）长期疗效优效人群特征分析:有家族史、左半结肠、无肝转移、无脑转移、转移部位≤2个、灌注前无血中乳酸脱氢酶升高、初诊即诊断恶性腹水、全身辨证非肝肾阴虚证、无不良反应及腹水量得到控制的患者腹水生存期更长,但与外部研究结果对比生存期未见明显延长。实验部分:（1）结肠癌HCT116细胞腹腔+脾脏原位接种可建立较为稳定的BALB/C裸鼠结肠癌血性腹水模型;Matrigel基质胶细胞三维培养可建立结肠癌HCT116细胞体外VM模型。（2）华蟾素注射液腹腔注射可抑制结肠癌血性腹水的生成、降低腹水中红细胞数目,抑制结肠癌腹腔转移瘤的生成。（3）缺氧微环境可促进结肠癌HCT116细胞迁移、侵袭,增强体外VM的形成能力。（4）华蟾素注射液可逆转缺氧对HCT116细胞造成的不良影响,抑制其增殖、迁移、侵袭及体内、体外VM的形成。（5）缺氧微环境可上调HCT116细胞HIF-1α、VEGF、MMP2、MMP9、VE-cadherin mRNA及蛋白的表达,华蟾素注射液干预后可抑制HIF-1α、VEGF、MMP2、VE-cadherinmRNA及蛋白表达,对MMP9 mRNA及蛋白未见显着影响。研究结论临床部分:（1）华蟾素注射液腹腔灌注可有效抑制结肠癌恶性腹水的产生,延缓病情进展,降低腹水中的红细胞数量,提高KPS评分,改善患者生活质量,安全性良好;（2）左半结肠癌、无肝转移、无胆红素升高、血性腹水、局部辨证为湿热毒证及合并全身中医治疗的患者是华蟾素注射液腹腔灌注治疗的优效人群,通过人群特征初步筛选后用药可提高临床疗效。实验研究:华蟾素注射液腹腔灌注抑制结肠癌血性腹水的机制,可能与其逆转肿瘤缺氧微环境,下调HIF-1α、VEGF、MMP2、VE-cadherin mRNA及蛋白的表达从而抑制结肠癌细胞体内、体外VM的形成,同时抑制结肠癌细胞增殖、迁移及腹腔侵袭有关。
吴斌[4]（2021）在《肺癌靶向多西紫杉醇白蛋白纳米粒的制备及活性研究》文中指出恶性肿瘤是人类健康的最大威胁,肺癌的发病率最高,多西紫杉醇（DTX）是目前临床治疗肺癌重要的临床药物,其对肺癌治疗效果确切,但其具有剂量限制性毒性。这主要是由于DTX肿瘤靶向性差,药物全身广泛分布,导致药效降低的同时,还对健康器官造成毒性。为解决这个问题,我们设计并构建了一个新的药物传递系统,即采用肿瘤细胞靶向作用的碳酸酐酶抑制剂（4-（2-氨乙基）苯磺酰胺）与牛血清白蛋白（BSA）偶联,以此为载体,并采用乳化法包载DTX,制备了 DTX@4-（2-氨乙基）苯磺酰胺修饰的BSA纳米粒。通过单因素实验优化DTX@4-（2-氨乙基）苯磺酰胺修饰的BSA的制备条件,并对所制备纳米粒进行表征,最后对DTX@4-（2-氨乙基）苯磺酰胺修饰的BSA纳米粒进行了肿瘤靶向性、活性及毒性等研究,研究结果如下:（1）牛血清白蛋白和4-（2-氨乙基）苯磺酰胺偶联载体的制备:通过25%的戊二醛将牛血清白蛋白与4-（2-氨乙基）苯磺酰胺进行偶联,制成4-（2-氨乙基）苯磺酰胺修饰的牛血清白蛋白载体,采用乙酸-乙酸钠作缓冲液的茚三酮显色法和紫外分光光度法测定了该载体的偶联度,最终测定牛血清白蛋白偶联的4-（2-氨乙基）苯磺酰胺的分子数为15。（2）DTX@4-（2-氨乙基）苯磺酰胺修饰的BSA纳米粒的制备及优化:用乳化的技术方法制得DTX@4-（2-氨乙基）苯磺酰胺修饰的BSA纳米粒,通过单因素实验优化制备DTX@4-（2-氨乙基）苯磺酰胺修饰的BSA纳米粒的条件,最终得优化条件为。DTX浓度为6 mg/mL,偶联蛋白浓度为0.6 mg/mL,有机相与水相的体积比为1:13,匀浆转速为6000 rpm,匀浆时间为8 min,均质压力为600 bar,均质次数为5次,在上述纳米粒制备最优条件下,DTX@4-（2-氨乙基）苯磺酰胺修饰的BSA纳米粒的粒径87.3±10.5 nm,电位为-10.7±1.65 mV。（3）DTX@4-（2-氨乙基）苯磺酰胺修饰的BSA纳米粒的表征:按最佳条件制备得到DTX@4-（2-氨乙基）苯磺酰胺修饰的BSA纳米粒,采用紫外可见分光光度法计算DTX的含量,通过进一步计算得到该纳米粒的载药量和包封率分别为:7.2%±1.3%和78.6%±1.1%。为改善DTX@4-（2-氨乙基）苯磺酰胺修饰的BSA纳米粒乳液冻干后复溶效果,将甘露醇按固液比2%加入纳米乳中,其载药量为:1.6%±0.3%。通过扫描电子显微镜对纳米粒进行观察,DTX@4-（2-氨乙基）苯磺酰胺修饰的BSA纳米粒呈圆球型,排列紧密;对纳米粒进行晶体形态表征,使用热差分析射和X射线衍实验方法,表明在DTX@4-（2-氨乙基）苯磺酰胺修饰的BSA纳米粒中DTX是以无定形态存在;稳定性实验表明在24 h内,纳米粒的粒径大小没有明显改变,纳米粒的粒径均在220 nm以内,肉眼观察没有出现分层或沉淀现象,说明此纳米乳液体系稳定;体外释放实验,DTX组96 h时累积释放量为88.9%,DTX@4-（2-氨乙基）苯磺酰胺修饰的BSA纳米粒组96 h时最终累积释放量为85.3%,且释放较DTX组缓慢。（4）DTX@4-（2-氨乙基）苯磺酰胺修饰的BSA纳米粒肿瘤靶向性测定:用高内涵成像系统和流式细胞术对DTX@4-（2-氨乙基）苯磺酰胺修饰的BSA纳米粒肺癌A549细胞靶向性进行观察分析,DTX@4-（2-氨乙基）苯磺酰胺修饰的BSA纳米粒组细胞吸收荧光强度数值高于DTX@BSA纳米粒组,说明DTX@4-（2-氨乙基）苯磺酰胺修饰的BSA纳米粒具备明显的肿瘤细胞靶向性。（5）DTX@4-（2-氨乙基）苯磺酰胺修饰的BSA纳米粒活性与毒性测试:通过MTT法对人肺癌A549细胞进行了抑制率的测定。DTX@4-（2-氨乙基）苯磺酰胺修饰的BSA纳米粒在72 h的IC50值（5.792 μM）小于DTX原药（6.499 μM）。急毒实验中昆明小鼠的DTX@4-（2-氨乙基）苯磺酰胺修饰的BSA纳米粒的最大耐受剂量为60 mg/kg,而阳性对照（DTX）组为10 mg/kg,说明DTX@4-（2-氨乙基）苯磺酰胺修饰的BSA纳米粒毒副作用较小。综上所述,DTX@4-（2-氨乙基）苯磺酰胺修饰的BSA纳米粒制备条件温和,可工业放大,初步的活性和毒性实验表明,该纳米粒值得进一步开发研究,能为治疗肺癌提供新思路。
于珍[5]（2021）在《核酸适配体介导的承载多西紫杉醇的白蛋白纳米粒在结肠癌靶向治疗方面的应用》文中指出目的:结直肠癌是一种常见的恶性肿瘤,是威胁人类健康的重大疾病,其发病率和死亡率在所有恶性肿瘤中均位列第三。由于结肠癌的症状比较隐匿,很多患者确诊时已是中晚期。化疗是中晚期结肠癌患者的主要治疗方式,但传统的化疗方案常常伴有明显的毒副作用,严重降低了患者的生存质量。靶向治疗可选择性地将细胞毒性药物递送至肿瘤细胞,而减少对正常组织细胞的损伤,因此在改善化疗疗效、减轻药物的不良反应方面具有重要的应用前景。靶向治疗通常由靶向药物递送系统（Targeted drug delivery system,TDDS）来实现,TDDS由三部分组成:靶向肿瘤的配体、纳米药物载体、细胞毒性药物。核仁蛋白通常存在于细胞核内,但在很多肿瘤细胞膜表面也有高表达（包括结肠癌细胞）,因此被认为是具有重大应用潜能的肿瘤靶向治疗靶标。核酸适配体（Aptamer,Apt）是一类单链寡核苷酸分子,能形成复杂的三维结构,可与相关靶标特异性地结合,并具有低免疫原性、合成修饰简单、成本低廉、分子量小及肿瘤组织穿透力高等优点,因此是重要的新型肿瘤靶向配体。白蛋白是一种内源性蛋白,无免疫原性,可用于构建生物相容性良好的纳米药物载体。多西紫杉醇（Docetaxel,DTX）具有广谱抗癌作用,临床上可用于多种肿瘤的治疗,如宫颈癌、非小细胞肺癌、转移性乳腺癌等。迄今为止,将靶向核仁蛋白的含多西紫杉醇的白蛋白纳米粒用于治疗结肠癌,尚未见文献报道。AS1411是一种靶向核仁蛋白的核酸适配体。本研究计划构建AS1411介导的包载多西紫杉醇白蛋白纳米颗粒,用于结肠癌治疗,并在细胞系和体内实验中评估其对结肠癌的治疗效果。所选材料均曾被FDA批准用于人体疾病治疗,具有较好的临床应用前景。方法:将5’端用巯基修饰的核酸适配体通过偶联剂SMCC与白蛋白上的氨基相连。通过自组装法,将多西紫杉醇负载于AS1411核酸适配体功能化的白蛋白中,构成TDDS（Apt-NPs-DTX）。利用透射电镜观察纳米粒的形态。通过动态光散射法检测纳米粒粒径、多分散系数（PDI）和zeta电位。通过高效液相色谱法检测包封率、载药率及药物释放曲线。利用琼脂糖凝胶电泳实验,检测核酸适配体是否成功连接到白蛋白纳米粒上。将白蛋白包载荧光染料,利用荧光显微镜、流式细胞分析技术和激光共聚焦显微镜评估纳米颗粒对CT26结肠癌细胞的靶向性。通过体外杀伤实验检测Apt-NPs-DTX对结肠癌细胞和对照细胞的毒性。通过体内动物实验评估Apt-NPs-DTX的抗肿瘤疗效、对生存期的影响以及毒副作用。结果:所构建的Apt-NPs-DTX,其平均粒径为62 nm,zeta电位为-31.2 mV。DTX从白蛋白纳米颗粒的释放具有典型的缓释特性。相对于对照细胞,细胞表面高表达核仁蛋白的CT26结肠癌细胞能优先摄取AS1411介导的纳米颗粒。体外细胞杀伤研究表明,Apt-NPs-DTX显着增强了对CT26结肠癌细胞的杀伤力。动物实验表明,与不具靶向性的载药纳米颗粒相比,Apt-NPs-DTX显着提升了抗肿瘤疗效,延长了荷瘤小鼠的存活时间,但没有进一步增加毒副作用。结论:本研究构建了一种新型的AS1411修饰的包载多西紫杉醇的白蛋白纳米粒子,用于靶向治疗结肠癌。实验结果表明,Apt-NPs-DTX在小鼠体内能显着增强抗肿瘤疗效,在结肠癌的靶向治疗方面具有一定的应用潜能。
李宁[6]（2020）在《多西紫杉醇—双氢青蒿素偶联前药自组装纳米粒的构建与抗肿瘤活性评价》文中指出目的:为发挥多西紫杉醇（docetaxel,DTX）与双氢青蒿素（dihydroartemisinin,DHA）协同抗肿瘤效果,本文设计了以肿瘤内环境还原响应的二硫键为连接臂的多西紫杉醇-双氢青蒿素偶联前药（docetaxel-dihydroartemisinin prodrug）,通过纳米沉淀法制备成自组装纳米粒（docetaxel-dihydroartemisinin nanoconjugates,DSDNs）,并对纳米制剂的制剂学特性、在大鼠体内的药动学、对4T1细胞体外的抗肿瘤活性及对4T1荷瘤小鼠的体内抗肿瘤活性进行评价,以期为两者协同抗肿瘤提供支持。方法:1.多西紫杉醇-双氢青蒿素偶联前药的制备与表征以多西紫杉醇及双氢青蒿素为原料,通过两步酯化反应制备含有二硫键连接的DTX-DHA偶联前药（DTX-S-S-DHA）。采用高分辨质谱（HR-MS）,核磁共振氢谱与碳谱(1H-NMR,13C-NMR)和傅里叶红外光谱仪（FT-IR）进行结构确证。2.多西紫杉醇-双氢青蒿素偶联前药自组装纳米粒的制备及处方优化采用高效液相色谱法（high performance liquid chromatography,HPLC）建立DTX-S-S-DHA的体外分析方法;采用纳米沉淀法制备DSDNs,并以粒径、包封率（entrapment efficiency,EE）、多分散指数（polydispersity,PDI）以及Zeta电位为评价指标对其进行处方优化;通过透射电镜（transmission electron microscope,TEM）观察DSDNs的表面形态,采用超滤离心法测定纳米粒的载药量（drug-loading,DL）,采用小杯法对还原响应释放行为进行了考察,并考察了DSDNs一个月的稳定性。3.多西紫杉醇-双氢青蒿素偶联前药自组装纳米粒在大鼠体内的药动学考察建立高效液相色谱-质谱联用法（high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,HPLC-MS/MS）测定大鼠血浆中DTX及DHA的含量。将12只雄性SD大鼠随机分为3组（n=4）,以多西紫杉醇溶液（DTX-sol）、双氢青蒿素溶液（DHA-sol）为对照,考察了DSDNs静脉注射至大鼠后的药动学,以AUC0-t、AUC0-∞、MRT、CL、t1/2和V为指标评价其药动学特性。4.多西紫杉醇-双氢青蒿素偶联前药自组装纳米粒体外抗肿瘤活性评价采用MTT法考察DSDNs对乳腺癌4T1细胞增殖的抑制作用;采用Annexin V-FITC/PI双染法进行细胞的凋亡研究;采用PI染色法进行周期抑制试验;采用划痕试验考察DTX-sol、DHA-sol、DTX和DHA混合溶液（MIX-sol）及DSDNs对4T1细胞的迁移抑制作用。5.多西紫杉醇-双氢青蒿素偶联前药自组装纳米粒体内抗肿瘤活性评价建立4T1细胞皮下接种的Balb/c荷瘤小鼠模型,尾静脉注射对照组生理盐水（saline）、多西紫杉醇注射剂（DTX-inj）、DHA-sol、MIX-sol以及DSDNs溶液,通过连续5次隔天给药法,以小鼠体重变化、肿瘤生长体积、肿瘤重量、生存曲线以及H&E染色组织病理学结果为评价指标,评价DSDNs的体内抗肿瘤活性。结果:1.多西紫杉醇-双氢青蒿素偶联前药的合成与表征二硫代二丙酸脱水生成酸酐反应产率高达75.12%;二硫代二丙酸与双氢青蒿素产物（S-S-DHA）与DTX产率为55.39%。HR-MS测得的m/z为1288.479,产物经1H-NMR,13C-NMR和FT-IR确证表明合成目标化合物正确。2.多西紫杉醇-双氢青蒿素偶联前药自组装纳米粒的制备及处方优化建立了HPLC法用于DTX-S-S-DHA含量测定及其制剂的体外制剂学评价,采用单因素及响应面法优化后的处方得到的纳米粒为淡蓝色乳状,粒径为172.10±1.70nm,PDI为0.05±0.01,Zeta电位为-22.60±0.50 mV,包封率为84.00%±1.30%,载药量为75.91%±1.20%,且在储存一个月之内稳定性良好,在条件为10 mM的二硫苏糖醇（DTT）条件下,DTX和DHA在48小时的累积释放量分别高达76.86%±3.10%及82.99%±3.98%。3.多西紫杉醇-双氢青蒿素偶联前药自组装纳米粒在大鼠体内的药动学考察尾静脉注射DTX-sol、DHA-sol及DSDNs至大鼠。给予DTX-sol、DSDNs后DTX的血药浓度时间曲线下面积(AUC0-t)分别为35.26±6.67、64.97±9.00 mg/L?h,DTX的t1/2分别为:6.08±1.29、9.41±3.16 h;给予DHA-sol、DSDNs后,DHA的血药浓度时间曲线下面积(AUC0-t)分别为和0.54±0.21、0.30±0.16 mg/L?h,DHA的t1/2分别为0.39±0.26、0.22±0.12 h。4.多西紫杉醇-双氢青蒿素偶联前药自组装纳米粒体外抗肿瘤活性评价MTT试验表明对4T1细胞的增殖具有抑制作用,且具有时间依赖性与浓度依赖性,DTX-sol、DHA-sol、MIX-sol及DSDNs在48 h的IC50分别为0.2201±0.0341,1.6060±0.1033,0.4419±0.0177,0.5113±0.0121μM,72 h时IC50为0.0281±0.0199,0.3800±0.0213,0.1624±0.0118,0.1613±0.0036μM;细胞凋亡结果表明DSDNs具有更显着的诱导细胞凋亡能力（P<0.05）;细胞周期结果显示DSDNs主要阻滞4T1细胞在G0/G1期;划痕试验结果表明,与对照组相比,DSDNs具有更显着的抑制肿瘤细胞迁移的能力（P<0.01）。5.多西紫杉醇-双氢青蒿素偶联前药自组装纳米粒体内抗肿瘤活性评价在体内抗肿瘤活性试验中,试验结束时,肿瘤体积大小顺序为:对照组>MIX-sol>DTX-inj>DHA-sol>DSDNs,对应肿瘤体积分别为:2482±102、1417±148、1241±118、1134±102、989±164 mm3;对照组、DTX-inj、DHA-sol、MIX-sol、DSDNs的平均瘤重为2.37±0.09、1.52±0.18,1.40±0.02,1.30±0.18,1.02±0.08g。在第20天时,DSDNs组小鼠存活率为8/8,DHA-sol组小鼠存活率为7/8、DTX-inj组小鼠存活率为5/8、MIX-sol组小鼠存活率为4/8、saline组小鼠存活率为3/8;H&E染色结果显示MIX-sol组出现肝损伤,其他制剂组,均未发现肝损伤。结论:1.多西紫杉醇-双氢青蒿素偶联前药的合成与表征HR-MS测得的精确质量数和理论值的相对误差在±3 ppm之内,1H-NMR和13C-NMR的图谱结果与对应化合物的结构相一致,FI-TR结果表明对应化合物特征峰与化合物的结构特征相一致,表明成功合成了多西紫杉醇-双氢青蒿素偶联前药。2.多西紫杉醇-双氢青蒿素偶联前药自组装纳米粒的制备及处方优化使用响应面法优化后的工艺条件制备的纳米粒形态、粒径及其分布、EE、DL、稳定性等评价指标都符合预期的要求。体外释放结果表明DSDNs具有还原响应性能。3.多西紫杉醇-双氢青蒿素偶联前药自组装纳米粒在大鼠体内的药动学考察将DTX与DHA通过二硫键连接后的偶联前药,可以优化药动学参数,增大DTX血药浓度,延长DTX半衰期等。4.多西紫杉醇-双氢青蒿素偶联前药自组装纳米粒体外抗肿瘤活性评价DSDNs对4T1细胞的增殖具有抑制作用,具有较强的细胞毒性;可以显着诱导细胞凋亡;DSDNs与DHA-sol周期阻滞相似,表明通过化学键连接的DSDNs中DHA发挥主要作用;同时DSDNs组具有较强的抗迁移能力。5.多西紫杉醇-双氢青蒿素偶联前药自组装纳米粒体内抗肿瘤活性评价DSDNs具有较强的体内抗肿瘤活性,能显着抑制肿瘤体积的生长,显着提高了小鼠的存活率,且可以减小对正常组织的毒性。
吴元玉[7]（2019）在《STEAP1调控胃癌腹膜转移过程中的肿瘤发生和化疗耐药性》文中进行了进一步梳理研究目的:作为全球第三大最致死性肿瘤,胃癌的发病率和病死率仍然较高,危害较大。随着科技的进步和治疗手段的多样化,胃癌的5年生存率明显提高。但由于胃癌易发生转移,在治疗上仍存在巨大的挑战。胃癌的转移途径主要有直接浸润,血行转移,淋巴转移以及腹膜种植转移。目前对于胃癌细胞腹膜转移的分子机制尚不清晰,因此研究胃癌腹膜转移的机制显得尤为重要。研究发现:在胃癌腹膜转移过程中,转录后的调控机制发挥至关重要的作用,因此本部分实验主要筛选胃癌腹膜转移过程中在翻译水平存在表达差异的基因,以此寻找针对腹膜转移治疗的潜在分子靶点。STEAP1在胃癌腹膜转移患者肿瘤组织和转染miR-3978拮抗剂的HMrSV5细胞中表达水平均显着上调,且上调幅度最大。STEAP1在前列腺癌、膀胱癌、尤因肉瘤等肿瘤中均发现表达水平显着上调,且可以调控肿瘤细胞的体外增殖、侵袭和迁移能力,以及调控体内肿瘤生长能力。但是STEAP1是否参与胃癌细胞的细胞增殖能力、侵袭能力和迁移能力的调控,目前机制尚不明确。因此本实验主要研究STEAP1表达水平变化对胃癌腹膜转移过程中的肿瘤发生和肿瘤细胞对化疗药物敏感性的调控作用。研究方法:收集20名胃癌腹膜转移患者的癌症组织样本和癌旁正常组织样本进行多聚核糖体分离,通过qRT-PCR技术分析在胃癌腹膜转移患者肿瘤组织和癌旁正常组织的多聚核糖体中与上皮至间质转化过程相关基因的表达水平差异。然后使用转染miR-3978拮抗剂的人腹膜上皮细胞系HMRSv5细胞模拟腹膜转移,并提取转染miR-3978拮抗剂的HMRSv5细胞和未转染miR-3978拮抗剂的HMRSv5细胞中的多聚核糖体,使用qRT-PCR技术分析多聚核糖体中与上皮至间质转化过程相关基因的表达水平变化。随后再将siRNA-STEAP1转染至胃癌细胞系MKN45细胞以敲低胃癌细胞中STEAP1的表达水平。在STEAP1表达水平敲低后,使用MTT实验检测胃癌细胞增殖能力,Transwell细胞迁移实验检测胃癌细胞迁移能力,Transwell细胞侵袭实验检测胃癌细胞侵袭能力。使用稳定转染shRNA-STEAP1的胃癌MKN45细胞建立大鼠异种种植瘤,从而检测STEAP1调控体内肿瘤细胞生长能力。MTT实验检测STEAP1表达水平降低后胃癌MKN45细胞对于多西紫杉醇的敏感性。研究结果:通过比较胃癌腹膜转移患者的肿瘤组织和正常组织核糖体的差异性变化,我们发现共49种基因表达水平存在显着差异,其中30种基因在胃癌腹膜转移患者肿瘤组织中的表达水平显着高于正常组织,19种基因在胃癌腹膜转移患者肿瘤组织中的表达水平显着低于正常组织。30种表达水平显着上调的基因中前十位基因分别是:STEAP1、SPP1、VPS13A、MMP2、BMP1、ZEB1、TBP、ESR1、ZEB2、MMP9。其中STEAP1是在肿瘤组织中表达水平上调最显着的基因。19种表达水平显着下调的基因中下调最显着的前十位基因分别是:CDH1、KRT14、CALD1、FGFBP1、EGFR、CAV2、IL1RN、SPARC、GNG11、DSP。与未转染miR-3978拮抗剂的HMRSv5细胞相比,发现前者细胞中存在59种与上皮至间质转化相关的基因表达水平具有显着变化,其中42种基因表达水平显着上调,17种基因表达水平显着下调。42种表达水平显着上调的基因中上调最显着的前十位基因分别是:STEAP1、VCAN、SPP1、VPS13A、KRT19、FN1、TMEM132A、TGFB3、ZEB2、MMP9。而 STEAP1 是在转染 miR-3978 拮抗剂的 HMRSv5 细胞中表达水平上调最显着的基因。17种表达水平显着下调的基因中下调最显着的前十位基因分别是:KRT14、CDH1、FGFBP1、EGFR、CAV2、CAMK2N1、ERBB3、CALD1、SNAI2、SNAI1。此外,我们还发现有41种基因在胃癌腹膜转移患者肿瘤组织与转染miR-3978拮抗剂的HMrSV5细胞中存在差异表达。胃癌细胞系MKN45细胞转染siRNA-STEAP1后,qRT-PCR实验验证STEAP1表达水平显着下调。STEAP1表达水平降低可显着抑制MKN45细胞体外增殖能力、细胞迁移能力和细胞侵袭能力。使用稳定转染两种shRNA-STEAP1的MKN45细胞建立的大鼠异种种植瘤模型,在STEAP1表达水平显着下调后,能够有效的抑制体内肿瘤细胞生长。在不同浓度多西紫杉醇处理后的HMrSV5细胞中,STEAP1表达水平上调可增强HMrSV5细胞活力,即HMrSV5细胞对多西紫杉醇敏感性降低。在不同浓度多西紫杉醇处理的MKN45细胞中,STEAP1表达水平下调后MKN45细胞活力降低,即MKN45细胞对于多西紫杉醇敏感性增加。结论:1.在胃癌腹膜转移患者肿瘤组织和正常组织的多聚核糖体中,49种上皮至间质转化过程相关基因存在表达差异,包括30种表达水平显着上调的基因和19种表达水平显着下调的基因,其中STEAP1表达水平上调幅度最大。2.在转染miR-3978拮抗剂模拟腹膜转移的HMrSV5细胞多聚核糖体中,59种上皮至间质转化过程相关基因存在表达差异,包括42种表达水平显着上调的基因和17种表达水平显着下调的基因,同样发现STEAP1表达水平上调幅度最大。3.胃癌腹膜转移患者肿瘤组织与转染miR-3978拮抗剂的HMrSV5细胞存在41种共同差异表达基因,两种模型具有很高的相似性。4.在胃癌细胞系MKN45中,STEAP1表达水平降低可以抑制MKN45细胞的体外增殖能力、迁移能力和侵袭能力。5.STEAP1表达水平下调后,胃癌细胞系MKN45细胞建立的异种种植瘤体内生长被抑制。6.STEAP1表达水平上调可以降低人间皮细胞系HMrSV5对于多西紫杉醇的化疗敏感性,STEAP1表达水平下调可以显着增加MKN45细胞对多西紫杉醇治疗的化学敏感性。7.STEAP1可能是胃癌腹膜转移患者治疗的潜在生物靶点。
尹林林[8]（2019）在《来那度胺增强化疗药物对三阴性乳腺癌生长抑制作用的研究》文中提出背景三阴性乳腺癌（Triple-negative breast cancer,TNBC）的发病率约占新诊断乳腺癌的1 5%-20%,发病年龄早,组织学分化差,生长非常活跃。由于雌激素受体、孕激素受体和人表皮生长因子受体2均阴性,故TNBC患者不能从内分泌和靶向治疗中获益。化疗在TNBC的治疗中,占据十分重要的地位。目前TNBC最常用的一线化疗药物包括蒽环类、紫杉醇、顺铂及5-氟尿嘧啶类。虽然TNBC患者接受了强烈化疗,但由于肿瘤本身的高度恶性及其对药物的耐药性,但TNBC患者的临床治疗效果并不理想。除了常规的化疗药物之外,肿瘤的治疗还可以使用免疫调节剂增强化疗效果。来那度胺是一种免疫调节剂,不仅可以调节免疫,还可以诱导肿瘤细胞凋亡和抑制血管新生。来那度胺在多发性骨髓瘤、骨髓增生异常综合征中己经取得了很好的的治疗效果。近年研究显示,来那度胺对部分实体肿瘤如结直肠癌、前列腺癌、胰腺癌、肾癌也有一定的疗效。另外,来那度胺还可增强化疗药物在前列腺癌、结直肠癌中的作用。但来那度胺在乳腺癌中的研究非常少,仅限于细胞水平上。研究报道,来那度胺联合维生素D可以诱导人TNBC细胞MDA-MB-231的凋亡,但对MDA-MB-231增殖无明显抑制作用。目前尚无来那度胺联合化疗药物对人TNBC细胞MDA-MB-231增殖抑制和凋亡的研究。乳腺癌的发生伴随大量血管的新生。抗血管生成的治疗,可抑制乳腺癌转移灶的部分生长。因此,抗肿瘤血管生成在乳腺癌的治疗中有一定的价值。肿瘤的血管新生是比较复杂的过程,其中,血管内皮细胞的增殖、迁移是肿瘤血管生成中非常关键的步骤之一。而由于血管内皮细胞基因稳定、不易耐药,因此抑制血管内皮细胞增殖、迁移的治疗,是抗肿瘤血管生成治疗的策略之一。来那度胺除诱导人TNBC细胞MDA-MB-231凋亡外,还可以作用于血管内皮细胞,抑制血管内皮细胞迁移,从而抑制肿瘤血管新生。化疗药物在大剂量、长间歇的给药模式下,主要杀死肿瘤细胞,对肿瘤血管的抑制作用比较弱。但近年研究显示,化疗药物在小剂量、长疗程、短间歇的给药模式下也可以抑制血管内皮细胞增殖、迁移,抑制肿瘤血管的新生。并不是所有的化疗药物都适合用于抑制血管新生的治疗。只有化疗药物抑制血管内皮细胞剂量低于对肿瘤细胞的细胞毒剂量时,才适合被用于抑制血管新生的治疗。阿霉素、紫杉醇、顺铂及5-氟尿嘧啶四种化疗药物哪种药物适合用于抑制TNBC血管新生治疗尚有争议。来那度胺、化疗药物均可以作用于肿瘤细胞和血管内皮细胞,但来那度胺的作用机制又与普通的化疗药物不同,提示来那度胺与化疗药物联合对肿瘤可能有协同抑制作用。来那度胺联合化疗药物的治疗方式有可能成为TNBC治疗的新模式。但目前尚无来那度胺联合阿霉素、紫杉醇、顺铂及5-氟尿嘧啶对人TNBC细胞MDA-MB-231增殖、凋亡和血管内皮细胞增殖、迁移作用的研究,亦无来那度胺联合化疗药物在TNBC动物水平上的研究。目的本研究通过对肿瘤细胞、血管内皮细胞和小鼠模型的研究,在细胞、动物两个水平上,观察来那度胺单药及联合化疗药物对TNBC生长抑制的作用。在肿瘤细胞水平上,选择人TNBC细胞MDA-MB-231作为研究对象;在血管内皮细胞水平上,选择人脐静脉内皮细胞（Human Umvilical Vein Endothelial Cell,HUVEC）作为研究对象。观察来那度胺联合TNBC一线化疗药物（阿霉素、紫杉醇、顺铂及5-氟尿嘧啶）分别对MDA-MB-231细胞增殖、凋亡的作用和对HUVEC细胞增殖、迁移的作用。比较化疗药物单药及与来那度胺联合对MDA-MB-231细胞和HUVEC细胞增殖抑制的差异,比较MDA-MB-231细胞和HUVEC细胞对化疗药物敏感性差异,筛选出既与来那度胺有协同作用,又适合用于抑制血管新生的化疗药物。并观察药物对MDA-MB-231细胞增殖、凋亡和对HUVEC细胞增殖、迁移通路关键蛋白的影响。同时构建人三阴性乳腺癌MDA-MB-231裸鼠皮下移植瘤模型,在动物水平观察来那度胺联合筛选出的化疗药物对肿瘤生长抑制的作用,并观察药物对肿瘤组织增殖、凋亡及微血管密度的变化,初步探讨来那度胺增强化疗药物抑制三阴性乳腺癌生长作用的机制。方法1.用MTT方法检测药物对MDA-MB-231细胞增殖能力的影响。将不同浓度来那度胺、化疗药物（阿霉素、紫杉醇、顺铂和5-氟尿嘧啶）及其联合,分别与MDA-MB-231细胞作用24 h,48 h和72 h,观察药物对MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用。根据来那度胺与四种化疗药物的联合作用结果,筛选出来那度胺能增效的化疗药物。2.用流式细胞术方法检测药物对MDA-MB-231细胞凋亡的影响。将来那度胺、筛选出的化疗药物及其联合,与MDA-MB-231细胞作用72 h,观察药物对MDA-MB-231细胞凋亡的影响。3.用Western Blot方法检测蛋白表达。将来那度胺、筛选出的化疗药物及其联合,与MDA-MB-231细胞作用72 h,观察药物对MDA-MB-231细胞pERK、Bc1-2和Caspase-3蛋白表达的影响。4.用MTT方法检测药物对HUVEC细胞增殖能力的影响。将不同浓度来那度胺、筛选出的化疗药物,分别与HUVEC细胞作用24 h,48 h和72 h,观察药物对HUVEC细胞增殖抑制的作用。5.第二次筛选化疗药物。从第一次筛选出的化疗药物中,再根据化疗药物对MDA-MB-231细胞和HUVEC细胞增殖抑制曲线,筛选出对HUVEC细胞更敏感的化疗药物。6.用MTT方法检测药物对HUVEC细胞增殖能力的影响。将来那度胺及第二次筛选出的化疗药物与HUVEC细胞作用72 h,观察两者联合对HUVEC细胞增殖的抑制作用。7.用细胞划痕方法检测药物对细胞迁移的影响。来那度胺、第二次筛选出的化疗药物及其联合,在1%EGM2培养基下培养HUVEC细胞24 h,观察药物对HUVEC细胞迁移的影响。8.用Western Blot方法检测蛋白表达。来那度胺、第二次筛选出的化疗药物及其联合,与HUVEC细胞作用72 h,观察药物对HUVEC细胞pAkt蛋白的影响。9.建立三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞裸鼠皮下移植瘤模型。将30只裸鼠随机分为6组,每组5只。PBS组（向腹腔注射PBS,10 mg/kg,每天一次,连续用14天）;LEN组（向胃灌注LEN,25 mg/天,连续用14天）;5 mg/kg5-FU组（向腹腔注射5-FU,5 mg/kg,每天一次,连续用14天）;25 mg/kg 5-FU组（向腹腔注射5-FU,25 mg/kg,每天一次,连续用5天）;LEN+5 mg/kg 5-FU组（向胃灌注LEN,25 mg/天,连续用14天;并向腹腔注射5-FU,5 mg/kg,每天一次,连续用14天）;LEN+25 mg/kg 5-FU组（向胃灌注LEN,25 mg/天,连用药14天;并向腹腔注射5-FU,25 mg/kg,每天一次,共用5天）。各组裸鼠给药28天后处死,观察各组肿瘤组织体积的变化,并绘制肿瘤生长曲线。并运用免疫组化方法检测肿瘤组织Ki67表达、微血管密度的情况,用TUNEL方法检测药物对肿瘤组织凋亡的影响。用Western Blot方法检测肿瘤组织pERK、Bc1-2和Caspase-3蛋白表达的变化。结果1.来那度胺、化疗药物及其联合对MDA-MB-231细胞增殖抑制作用MTT结果显示,来那度胺单药对MDA-MB-231细胞增殖无抑制作用。四种化疗药物阿霉素、紫杉醇、顺铂及5-氟尿嘧啶对MDA-MB-231细胞增殖均有明显抑制作用,而且均呈剂量和时间依赖性。并且来那度胺可以增强顺铂及5-氟尿嘧啶对MDA-MB-231细胞增殖抑制作用,但不能增强阿霉素、紫杉醇对MDA-MB-231细胞增殖抑制作用。2.来那度胺、化疗药物及其联合对MDA-MB-231细胞凋亡的影响流式细胞术结果显示,来那度胺、顺铂均能诱导MDA-MB-231细胞凋亡。联合组,与顺铂组比较,MDA-MB-231细胞凋亡率明显升高。流式细胞术结果显示,5-氟尿嘧啶能诱导MDA-MB-231细胞凋亡。联合组,与5-氟尿嘧啶组比较,MDA-MB-231细胞凋亡率明显升高。3.来那度胺、化疗药物及其联合对MDA-MB-231细胞pERK、Bc1-2和Caspase-3蛋白表达的影响Western Blot结果显示,来那度胺降低MDA-MB-231细胞的pERK蛋白的表达,顺铂上调MDA-MB-231细胞pERK蛋白的表达。联合组,与顺铂组比较,pERK蛋白表达明显下降。来那度胺、顺铂均能下调MDA-MB-231细胞Bc1-2蛋白表达,上调MDA-MB-231细胞Caspase-3蛋白表达;联合组,与顺铂组比较,Bcl-2蛋白表达进一步下降和Caspase-3蛋白表达进一步升高。Western Blot结果显示,5-氟尿嘧啶上调MDA-MB-231细胞pERK蛋白的表达。联合组,与5-氟尿嘧啶组比较,pERK蛋白的表达明显下降。5-氟尿喃啶能下调MDA-MB-231细胞Bcl-2蛋白的表达,并上调MDA-MB-231细胞Caspase-3的表达;联合组,与5-氟尿嘧啶组比较,Bcl-2蛋白表达进一步下降,Caspase-3的表达进一步升高。4.来那度胺、化疗药物对HUVEC细胞增殖抑制作用来那度胺对HUVEC细胞无明显增殖抑制作用。而顺铂、5-氟尿嘧啶对HUVEC细胞增殖有明显抑制作用,而且呈剂量和时间依赖性。5.MDA-MB-231、HUVEC细胞对顺铂及5-氟尿嘧啶敏感性差异同样浓度的顺铂对MDA-MB-231细胞抑制率明显高于HUVEC细胞,提示MDA-MB-231细胞对顺铂更敏感;同样浓度的5-氟尿嘧啶对HUVEC细胞的抑制率明显高于对MDA-MB-231细胞,提示HUVEC细胞对5-氟尿嘧啶更敏感。结果提示,5-氟尿嘧啶适合用于抑制血新生的治疗。6.来那度胺联合5-氟尿嘧啶对HUVEC细胞增殖的抑制作用MTT结果显示,来那度胺联合5-氟尿嘧啶组,与5-氟尿嘧啶单药组比较,对HUVEC细胞增殖抑制作用更明显。7.来那度胺联合5-氟尿嘧啶对HUVEC细胞迁移的抑制作用细胞划痕实验结果显示,来那度胺、5-氟尿嘧啶单药均能抑制HUVEC细胞的迁移,而且来那度胺可以增强5-氟尿嘧啶对HUVEC细胞迁移的抑制作用。8.来那度胺、5-氟尿嘧啶及联合对HUVEC细胞pAkt蛋白的影响Western Blot结果显示,来那度胺、5-氟尿嘧啶均能下调HUVEC细胞pAkt蛋白的表达;而两药联合与5-氟尿嘧啶组比较,可以进一步下调pAkt蛋白的表达。9.来那度胺、5-氟尿嘧啶及其联合对三阴性乳腺癌裸鼠移植瘤组织生长抑制作用30 只裸鼠均建瘤成功。LEN、5 mg/kg 5-FU、25 mg/kg 5-FU 及 LEN+5-FU组均能抑制三阴性乳腺肿瘤的生长。与PBS组比较,LEN组Ki67的表达没有明显下降,凋亡细胞数量增多,微血管密度降低。5 mg/kg 5-FU组对肿瘤组织Ki67表达没有影响,凋亡细胞数量轻微升高,微血管密度降低。25 mg/kg 5-FU组,肿瘤组织Ki67表达明显下降、凋亡细胞数量明显增加,微血管密度明显下降。LEN+5-FU组,与5-FU组比较,肿瘤组织Ki67表达进一步降低,凋亡细胞数量进一步升高,微血管密度进一步降低。Western Blot结果显示,与PBS组比较,LEN组中pERK蛋白明显下降,Bcl-2蛋白下降和Caspase-3蛋白升高;5 mg/kg 5-FU组中pERK蛋白轻微升高,Bcl-2蛋白轻微下降和Caspase-3蛋白轻微升高;25 mg/kg 5-FU组中pERK蛋白明显升高,Bcl-2蛋白明显下降和Caspase-3蛋白明显升高;LEN+5-FU组,与5-FU组比较,pERK蛋白明显下降,Bcl-2蛋白明显下降和Caspase-3蛋白明显升高。结论1.来那度胺可以通过诱导人三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231凋亡,抑制人血管内皮细胞HUVEC的迁移,抑制三阴性乳腺癌的生长。2.在阿霉素、紫杉醇、顺铂和5-氟尿嘧啶四种化疗药物中,来那度胺可以增强顺铂、5-氟尿嘧啶对人三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖抑制作用;其中,5-氟尿嘧啶适合用于抑制血管新生的治疗,同时来那度胺可以增强5-氟尿嘧啶对血管内皮细胞HUVEC增殖和迁移作用。3.来那度胺通过降低pERK、Bcl-2蛋白的表达,升高Caspase-3蛋白的表达,并降低微血管密度来增强5-氟尿嘧啶对三阴性乳腺癌的生长抑制的作用。
胡映波[9]（2019）在《非编码RNA调控的SPRY2表达的分子机制及其在前列腺癌进展中的作用研究》文中认为研究背景:前列腺癌（PC）是常见的男性恶性肿瘤,在我国男性恶性肿瘤中发病率排名第6位,且发病率近年来逐渐上升。前列腺癌患者在早期诊断时的5年生存率为100%,而当癌细胞扩散到远处时,5年生存率降至27%。尽管目前诊断前列腺癌的生物标志物是前列腺特异性抗原（PSA）,但已经证明,前列腺特异性抗原与13年后前列腺癌的死亡率无关。PSA筛查的不良后果导致过度诊断、过度治疗和治疗并发症。因此,研究诊断早期前列腺癌的新的生物标志物,探索治疗晚期前列腺癌的新的治疗靶点,显得十分紧迫。微miRs（miRs/miRs）是一种长度为21～25个核苷酸的小的非编码单RNA,在人体液中稳定表达,包括血清、血浆和尿液。通过在mRNAs的3’非翻译区上的序列特异性碱基配对,miRs发挥重要的调节作用,导致mRNA降解或翻译抑制。几项研究表明,前列腺癌表现出特定的miRs表达谱,包括miR-106a、miR-223、miR-20a、miR-21、miR-141 和 miR-27a。在这些 miRs 中,在高级别前列腺癌中发现了对miR-27a的下调,但最近的研究表明,雄激素调节的miR-27a作为致癌基因发挥作用,并通过靶向肿瘤抑制因子和雄激素受体共抑制因子增加前列腺癌细胞的生长。在其他类型的癌症中,包括胰腺癌、肾细胞癌和骨肉瘤,miR-27a也是一种癌基因,参与细胞增殖、集落形成和转移。然而,在肝细胞癌中,miR-27a被证明是下调的,通过抑制上皮间充质转化抑制肿瘤转移。因此,本研究的重点之一是探讨miR-27a在前列腺发展中的作用及机制。过去十年的研究表明,人类基因组的90%或更多转录并产生长度超过200个核苷酸的非编码RNAs（lncRNAs）。lncRNAs可以影响大量的细胞过程,包括正常的生理活动和病理过程。在许多人类疾病,包括恶性肿瘤,lncRNAs的表达出现失调;lncRNAs可能通过作为转录后调节网络的一部分发挥作用。例如,lncRNAs可以通过一个miRs响应元件作为竞争性内源性RNAs（ceRNAs）,从而阻止miRs与其下游靶基因的结合。根据以往的研究,CASC2、PTENP1、H19、HOTAIR、MALAT1等可以充当ceRNAs,通过吸附miRs影响基因表达,从而调节细胞生理活动。在众多已报道的lncRNAs中,CASC2被报道在许多癌症中起着肿瘤抑制作用,如胶质瘤、胃癌和肝细胞癌。CASC2在癌症中的作用在2004年由Baldinu等人首次报道在人类子宫内膜癌中,提示CASC2可能是一个潜在的肿瘤抑制基因。在非小细胞肺癌中,CASC2表达显着下调,CASC2低表达可预测非小细胞肺癌患者预后不良。在分子机制上,CASC2作为不同miRs的ceRNA,包括miR-18a和miR-21,调节miRs的表达,然后调节大肠癌和宫颈癌的细胞增殖、肿瘤生长和化疗抵抗。尽管CASC2在癌症中的表达下调已被频繁报道,但CASC2在PC中的作用和潜在机制,以及是否与PC对多西紫杉醇的化疗耐药性相关,仍不清楚。受体酪氨酸激酶（RTKs）介导的异常信号传导事件,包括表皮生长因子（EGF）、成纤维细胞生长因子（FGF）和肝细胞生长因子（HGF）的受体,已被报道促进癌变。此外,在增殖、分化和生存的调节中,包括RAS/MAP激酶和RAS/PI3K/AKT途径在内的几种重要途径的诱导作用依赖于通过配体结合而激活的RTK。影响RTK信号传导的突变常常导致细胞转化,这在多种恶性肿瘤中被广泛观察到。这些突变会影响RTK或下游通路的组成部分,如MAP激酶和PI3K/AKT,从而导致转化细胞的过度增殖、存活、侵袭和转移。因此,靶向RTK信号通路仍然是癌症预防中的一个挑战。一些小分子inhibitors和抗体正在临床上发展为靶向RTK和下游途径。Sprouty2（SPRY2）是RTK信号的主要拮抗调节因子,如果抑制其表达,可能会加速恶性肿瘤的增殖和血管生成。在许多癌症中,SPRY2的表达被报道下调,包括肾癌、结肠癌、胰腺癌和PC。在上述报道的癌症中,通过直接靶向,miRs可以抑制SPRY2的表达,提示CASC2可能通过吸附miRs参与了 PC对多西紫杉醇的化疗抵抗。本研究从两个方面来探讨非编码RNA调控SPRY2的分子机制及其在前列腺癌进展中的作用。一方面,本研究致力于研究miR-27a在前列腺癌组织中的表达情况及其对肿瘤细胞增殖的影响。本研究同时进一步本研究发现SPRY2是miR-27a的直接靶点,而SPRY2的诱导表达可挽救PC细胞中miR-27a介导的肿瘤细胞增殖增加。另一方面,本研究首先检测了 PC组织和细胞系中CASC2和SPRY2的表达,并评价了 CASC2和SPRY2对多西紫杉醇下PC细胞增殖和凋亡以及下游细胞外调节蛋白激酶ERK信号相关因子的影响。通过生物信息学分析发现miR-183分别具有潜在的CASC2和SPRY2结合位点。验证了 miR-183与CASC2、SPRY2的相互作用。最后,本研究研究了 CASC2/miR-183/SPRY2在PC对多西紫杉醇的耐药中的作用。研究方法:1.收集人前列腺癌组织样本,以及患者病历资料;常规培养前列腺癌细胞株,包括 LNPC、PC-3、RWPE-1、C4-2、DU145 等;2.采用 qRT-PCR 检测 miR-27a、CASC2、miR-183、SPRY2mRNA 在组织和细胞中的表达,并采用Pearson相关分析评价这些分子的表达与临床病理特征的相关性;采用Western blotting检测SPRY2及ERK信号通路相关蛋白的表达;3.分别采用miR-27a、miR-183的inhibitors和mimics干扰或过表达这两个miRs,分别采用CASC2、SPRY2的siRNAs和pcDNA3.1过表达质粒,干扰或过表达这两条RNAs,采用脂质体3000进行转染;4.采用荧光素酶实验验证miR-27a、miR-183的靶基因;5.采用CCK-8、MTT、流式检测前列腺癌细胞的增殖和凋亡。研究结果:一、第一部分研究结果1.miR-27a在患者前列腺癌及血清样本中高表达,miR-27a的血清水平可能作为早期PC的诊断标志物及与患者生存率相关。2.miR-27a直接抑制SPRY2的表达,且他们的表达水平在PC组织中呈显着负相关。3.miR-27a促进PC细胞的增殖,而过表达SPRY2能够逆转这一功能。4.miR-27a/SPRY2调节PC细胞的周期。二、第二部分研究结果1.CASC2和SPRY2在前列腺组织及细胞中的表达及其相关性分析。2.CASC2和SPRY2的过表达增强PC细胞对多烯紫杉醇的敏感性。3.CASC2和SPRY2能够抑制ERK信号通路。4.CASC2吸附miR-183并减少其表达水平,SPRY2是miR-183的下游靶基因,且能够被miR-183负性调控。5.干扰SPRY2的表达能够逆转miR-183 inhibitors介导的PC细胞对多烯紫杉醇的敏感性。研究结论:1.血清miR-27a可能是PC患者诊断和预后的一种新的非侵入性生物标志物,miR-27a/SPRY2可能是治疗PC的治疗靶点。2.CASC2与SPRY2竞争miR-183结合,挽救PC细胞中SPRY2的表达,从而通过SPRY2下游ERK信号通路增强PC细胞对多西紫杉醇的敏感性;CASC2和SPRY2可能是多西紫杉醇为基础的PC化疗的新佐剂。
付启瑞[10]（2019）在《鳄胆素诱导卵巢癌细胞凋亡的机制研究》文中研究指明卵巢癌（Ovarain Cancer）是致死率最高的的妇科癌症,因缺乏快速精准的早期诊断方法,大多数患者被诊断出来时已经是中晚期,大约30%上皮性卵巢癌患者在不到五年的时间内死亡。胆汁被用来药用的历史悠久,中国多部古典书籍中均有关于动物胆汁功效的记载,但关于暹罗鳄鱼胆汁的应用国内外报道较少,我们实验室从暹罗鳄鱼胆汁中提取分离纯化出一种具备广谱性抗癌活性的鳄胆素,本论文以卵巢癌A2780和SKOV-3细胞为研究对象,对体外和体内两个方面研究鳄胆素对卵巢癌的生物学功效。在体外,我们首先采用MTT法测量鳄胆素对常见癌细胞生长的抑制作用,鳄胆素可以显着抑制卵巢癌A2780和SKOV-3细胞的生长,其IC50分别为37.4 μg/ml和67.3 μg/ml。集落形成能力实验显示,鳄胆素可以显着地降低卵巢癌细胞的克隆形成能力,此外鳄胆素作用卵巢癌48 h后,细胞周期分布发生了显着变化。细胞形态学观察发现,鳄胆素作用之后,细胞发生了一些类凋亡的表观特征,综合Western blot和RT-PCR实验结果,发现鳄胆素是通过Notch信号通路和Wnt信号通路诱导卵巢癌A2780细胞发生凋亡的。鳄胆素可以和阿霉素和姜黄素在特定浓度比例下产生较好的协同联合效应,同时联合用药也提示在进行联合用药时,要注意区分不同卵巢癌类型。在体内,建立BALB/c卵巢癌模型,通过动物活动、精神状态记录、体重指标、脏器系数和五脏病理学切片的实验结果,证明鳄胆素在给药剂量范围内的安全性,和厦门大学动物实验中心出具的急性毒理、慢性毒理实验报告相一致。鳄胆素作用之后,卵巢癌移植瘤的体积产生了较显着的变化,证明鳄胆素作用于卵巢癌的有效性。通过Western blot等分子生物学手段,检测发现,鳄胆素可以显着地降低增殖细胞核抗原和血管内皮生长因子的蛋白表达量,为动物表观数据提供了合理的机制解释。综上所述,通过对鳄胆素诱导卵巢癌A2780细胞凋亡的机制研索、联合常见化疗药物抑制卵巢癌生长组方的探索以及动物模型的建立,为鳄胆素在卵巢癌的临床治疗提供一定的基础理论。
二、多西紫杉醇体外抑制血管生成的作用（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、多西紫杉醇体外抑制血管生成的作用（论文提纲范文）
（1）多西紫杉醇前药/血卟啉共组装纳米粒的构建及其药效学与药动学考察（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 常用缩写词中英文对照表 |
| 前言 |
| 第一部分 多西紫杉醇前药/血卟啉共组装纳米粒的制备与评价 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料与仪器 |
| 1.2 血卟啉体外分析方法的建立 |
| 1.3 多西紫杉醇体外分析方法的建立 |
| 1.4 多西紫杉醇前药体外分析方法的建立 |
| 1.5 多西紫杉醇前药/血卟啉共组装纳米粒的制备与质量评价 |
| 2 结果 |
| 2.1 血卟啉体外分析方法的确证 |
| 2.2 多西紫杉醇体外分析方法的确证 |
| 2.3 多西紫杉醇前药体外分析方法的确证 |
| 2.4 多西紫杉醇前药/血卟啉共组装纳米粒的单因素优化结果 |
| 2.5 多西紫杉醇前药/血卟啉共组装纳米粒的响应面优化结果 |
| 2.6 多西紫杉醇前药/血卟啉共组装纳米粒形态学观察 |
| 2.7 多西紫杉醇前药/血卟啉共组装纳米粒的稳定性考察 |
| 2.8 多西紫杉醇前药/血卟啉共组装纳米粒的体外释放考察 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第二部分 多西紫杉醇前药/血卟啉共组装纳米粒体外抗肿瘤活性研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料与仪器 |
| 1.2 溶液的配制 |
| 1.3 细胞培养 |
| 1.4 细胞毒试验方案 |
| 1.5 细胞活性氧(ROS)试验方案 |
| 1.6 细胞凋亡试验方案 |
| 2 结果 |
| 2.1 细胞毒性试验研究结果 |
| 2.2 活性氧(ROS)试验测定结果 |
| 2.3 细胞凋亡试验结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第三部分 多西紫杉醇前药/血卟啉共组装纳米粒大鼠体内药动学研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料与仪器 |
| 1.2 大鼠血浆中多西紫杉醇LC-MS/MS分析方法的建立 |
| 1.3 大鼠体内药动学研究 |
| 2 结果 |
| 2.1 大鼠血浆中多西紫杉醇LC-MS/MS分析方法的确证 |
| 2.2 大鼠体内药动学试验结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第四部分 多西紫杉醇前药/血卟啉共组装纳米粒小鼠体内靶向性分布和药效学研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料与仪器 |
| 1.2 荷瘤小鼠模型的建立 |
| 1.3 多西紫杉醇前药/血卟啉共组装纳米粒的靶向性分布 |
| 1.4 荷瘤小鼠体内药效学研究 |
| 1.5 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 多西紫杉醇前药/血卟啉共组装纳米粒的靶向性分布结果 |
| 2.2 Balb/c荷瘤小鼠的体重变化 |
| 2.3 Balb/c荷瘤小鼠的肿瘤体积生长变化 |
| 2.4 Balb/c小鼠组织H&E染色 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 光动力疗法在肿瘤治疗中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（2）新型NO供体聚合物紫杉醇胶束的制备及抗肿瘤作用和机制研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 中文摘要 |
| abstract |
| 缩略词表 |
| 引言 |
| 第一部分 一氧化氮供体型聚合物紫杉醇胶束的制备和表征 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果与分析 |
| 4 讨论与小结 |
| 第二部分 一氧化氮供体型聚合物紫杉醇胶束急性毒性研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果与分析 |
| 4 讨论与小结 |
| 第三部分 一氧化氮供体型聚合物紫杉醇胶束药物动力学研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果与分析 |
| 4 讨论与小结 |
| 第四部分 一氧化氮供体型聚合物紫杉醇胶束体外抗肿瘤细胞及对P-糖蛋白的影响 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果与分析 |
| 4 讨论与小结 |
| 第五部分 一氧化氮供体型聚合物紫杉醇胶束抗结肠癌和紫杉醇耐药性结肠癌作用机制研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果与分析 |
| 4 讨论与小结 |
| 第六部分 一氧化氮供体型聚合物紫杉醇胶束抗肝癌作用机制研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果与分析 |
| 4 讨论与小结 |
| 第七部分 一氧化氮供体型聚合物紫杉醇胶束药性评价 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 结果和讨论 |
| 4 讨论与小结 |
| 全文总结 |
| 创新点 |
| 参考文献 |
| 综述 一氧化氮对肿瘤作用的浓度依赖作用和化疗增敏机制 |
| References |
| 个人简介 |
（3）华蟾素注射液治疗结肠癌腹水的优效人群分析及对VM的作用机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 恶性腹水的中西医研究进展 |
| 1. 恶性腹水的西医研究进展 |
| 1.1 恶性腹水的形成机制 |
| 1.2 恶性腹水的西医诊断 |
| 1.3 恶性腹水的西医治疗 |
| 2. 恶性腹水的中医研究进展 |
| 2.1 恶性腹水的中医病因病机 |
| 2.2 恶性腹水的中医辨证 |
| 2.3 恶性腹水的中医治疗 |
| 3. 结语 |
| 参考文献 |
| 综述二 血管生成拟态(VM)在结肠癌中的研究进展 |
| 1. 结肠癌VM的发现及生物学特性 |
| 2. VM的形成机制 |
| 2.1 肿瘤缺氧微环境与VM |
| 2.2 肿瘤干细胞与VM |
| 2.3 上皮间质转化与VM |
| 2.4 促血管生成相关因子与VM |
| 2.5 VM形成相关信号通路 |
| 3. VM与结肠癌不良预后的相关性 |
| 4. VM与结肠癌的治疗 |
| 5. 结语 |
| 参考文献 |
| 综述三 华蟾素注射液干预肿瘤血管生成作用的研究进展 |
| 1. 肿瘤血管生成的病理机制 |
| 2. 华蟾素注射液的主要化学成分及其抗肿瘤作用 |
| 3. 华蟾素注射液干预肿瘤血管生成的机制 |
| 3.1 VEGF/VEGFR通路抑制作用 |
| 3.2 MMPs/TIMPs通路抑制作用 |
| 3.3 肿瘤血管内皮细胞诱导凋亡作用 |
| 3.4 其他潜在靶点 |
| 4. 结语 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第二部分 临床研究 华蟾素注射液腹腔灌注治疗结肠癌恶性腹水的疗效评价及优效人群分析 |
| 1. 资料与方法 |
| 1.1 研究方法 |
| 1.2 研究对象 |
| 1.3 病例筛选方法 |
| 1.4 治疗方法 |
| 1.5 提取指标 |
| 1.6 疗效评价 |
| 1.7 安全性评价 |
| 1.8 统计方法 |
| 1.9 技术路线图 |
| 2. 研究结果 |
| 2.1 总体资料分析 |
| 2.2 疗效评价 |
| 2.3 安全性评价 |
| 2.4 优效人群特征筛选 |
| 3. 讨论 |
| 3.1 结肠癌恶性腹水的治疗现状 |
| 3.2 优效人群研究的必要性 |
| 3.3 华蟾素注射液治疗结肠癌恶性腹水的潜在机制 |
| 参考文献 |
| 第三部分 实验研究 基于血管生成拟态(VM)研究华蟾素注射液抑制结肠癌血性腹水的机制 |
| 实验一: 华蟾素注射液抑制裸鼠结肠癌血性腹水生成的研究 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 实验二: 华蟾素注射液体外抑制结肠癌细胞增殖、迁移、侵袭的研究 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 实验三: 华蟾素注射液体内、体外抑制结肠癌细胞VM形成的研究 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 实验四: 华蟾素注射液抑制结肠癌VM形成的机制研究 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 1. 研究结论 |
| 2. 研究创新性 |
| 3. 不足与展望 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（4）肺癌靶向多西紫杉醇白蛋白纳米粒的制备及活性研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 绪论 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 多西紫杉醇概述 |
| 1.2.1 多西紫杉醇的结构 |
| 1.2.2 多西紫杉醇的理化性质 |
| 1.2.3 多西紫杉醇的抗癌作用机制 |
| 1.2.4 多西紫杉醇的应用 |
| 1.3 碳酸酐酶抑制剂概述 |
| 1.3.1 碳酸酐酶抑制剂的结构 |
| 1.3.2 碳酸酐酶抑制剂的抗癌作用机制 |
| 1.4 白蛋白概述 |
| 1.4.1 白蛋白载体的修饰 |
| 1.4.2 白蛋白载体的现状 |
| 1.5 纳米药物概述 |
| 1.5.1 纳米药物类型 |
| 1.5.2 纳米药物制备方法 |
| 1.6 靶向制剂概述 |
| 1.6.1 靶向制剂的种类及载体 |
| 1.6.2 靶向制剂的现状 |
| 1.7 课题的研究内容及意义 |
| 1.7.1 课题的研究内容 |
| 1.7.2 课题的研究意义 |
| 2 白蛋白和4-(2-氨乙基)苯磺酰胺偶联载体的制备 |
| 2.1 实验材料与试剂 |
| 2.2 实验仪器设备 |
| 2.3 白蛋白和4-(2-氨乙基)苯磺酰胺偶联载体的制备 |
| 2.4 白蛋白偶联4-(2-氨乙基)苯磺酰胺的偶联度测定 |
| 2.4.1 pH5.5的乙酸-乙酸钠溶液配置 |
| 2.4.2 3%茚三酮乙二醇溶液配置 |
| 2.4.3 牛血清白蛋白标准曲线绘制 |
| 2.4.4 透析溶液测定 |
| 2.5 实验结果与分析 |
| 2.6 本章小结 |
| 3 DTX@4-(2-氨乙基)苯磺酰胺修饰的BSA纳米粒的制备及优化 |
| 3.1 实验材料与试剂 |
| 3.2 实验仪器设备 |
| 3.3 DTX@4-(2-氨乙基)苯磺酰胺修饰的BSA纳米粒的制备 |
| 3.4 制备工艺的优化 |
| 3.5 实验结果与分析 |
| 3.5.1 偶联蛋白浓度对纳米粒粒径的影响 |
| 3.5.2 有机相与水相的体积比对纳米粒粒径的影响 |
| 3.5.3 匀浆转速对纳米粒粒径的影响 |
| 3.5.4 匀浆时间对纳米粒粒径的影响 |
| 3.5.5 均质压力对纳米粒粒径的影响 |
| 3.5.6 均质次数对纳米粒粒径的影响 |
| 3.6 本章小结 |
| 4 DTX@4-(2-氨乙基)苯磺酰胺修饰的BSA纳米粒的表征 |
| 4.1 实验材料与试剂 |
| 4.2 实验仪器设备 |
| 4.3 DTX标准曲线的绘制 |
| 4.4 DTX@4-(2-氨乙基)苯磺酰胺修饰的BSA纳米粒载药量及包封率的测定 |
| 4.5 DTX@4-(2-氨乙基)苯磺酰胺修饰的BSA纳米粒形态学观察 |
| 4.6 DTX@4-(2-氨乙基)苯磺酰胺修饰的BSA纳米粒XRD检测 |
| 4.7 DTX@4-(2-氨乙基)苯磺酰胺修饰的BSA纳米粒的DSC检测 |
| 4.8 DTX@4-(2-氨乙基)苯磺酰胺修饰的BSA纳米粒的稳定性测定 |
| 4.9 DTX@4-(2-氨乙基)苯磺酰胺修饰的BSA纳米粒的体外释放性质测定 |
| 4.10 实验结果与分析 |
| 4.10.1 DTX标准曲线的绘制 |
| 4.10.2 制备的纳米粒载药量及包封率的测定结果 |
| 4.10.3 制备的纳米粒扫描电镜(SEM)检测结果 |
| 4.10.4 制备的纳米粒的XRD检测结果 |
| 4.10.5 制备的纳米粒的DSC检测结果 |
| 4.10.6 制备的纳米粒的稳定性测定结果 |
| 4.10.7 制备的纳米粒的体外释放性质测定结果 |
| 4.11 本章小结 |
| 5 DTX@4-(2-氨乙基)苯磺酰胺修饰的BSA纳米粒肿瘤细胞靶向性评价 |
| 5.1 实验材料与试剂 |
| 5.2 实验仪器设备 |
| 5.3 细胞培养 |
| 5.3.1 细胞传代 |
| 5.3.2 细胞冻存 |
| 5.4 DTX@4-(2-氨乙基)苯磺酰胺修饰的BSA纳米粒靶向性的测定 |
| 5.4.1 高内涵细胞成像分析 |
| 5.4.2 流式细胞检测分析 |
| 5.5 实验结果与分析 |
| 5.5.1 细胞培养情况 |
| 5.5.2 DTX@4-(2-氨乙基)苯磺酰胺修饰的BSA纳米粒靶向性的测定结果 |
| 5.6 本章小结 |
| 6 DTX@4-(2-氨乙基)苯磺酰胺修饰的BSA纳米粒活性与毒性评价 |
| 6.1 实验材料与试剂 |
| 6.2 实验仪器设备 |
| 6.3 DTX@4-(2-氨乙基)苯磺酰胺修饰的BSA纳米粒体外抑制率的测定 |
| 6.4 DTX@4-(2-氨乙基)苯磺酰胺修饰的BSA纳米粒急毒性测定 |
| 6.5 实验结果与分析 |
| 6.5.1 DTX@4-(2-氨乙基)苯磺酰胺修饰的BSA纳米粒体外抑制率的测定结果 |
| 6.5.2 DTX@4-(2-氨乙基)苯磺酰胺修饰的BSA纳米粒急毒性测定结果 |
| 6.6 本章小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
| 致谢 |
| 东北林业大学硕士学位论文修改情况确认表 |
（5）核酸适配体介导的承载多西紫杉醇的白蛋白纳米粒在结肠癌靶向治疗方面的应用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 前言 |
| 1. 结肠癌 |
| 1.1 概述 |
| 1.2 结肠癌的治疗现状 |
| 2. 白蛋白 |
| 2.1 白蛋白的基本性质 |
| 2.2 白蛋白在肿瘤靶向治疗中的应用 |
| 3. 核酸适配体 |
| 3.1 核酸适配体在疾病治疗中的应用 |
| 3.2 核酸适配体在肿瘤诊断中的应用 |
| 3.3 AS1411核酸适配体 |
| 4. 选题依据及研究意义 |
| 5. 研究策略和技术路线 |
| 5.1 研究策略 |
| 5.2 技术路线 |
| 第二章 材料和方法 |
| 1. 实验材料和试剂 |
| 1.1 细胞系及培养 |
| 1.2 实验动物 |
| 1.3 核酸适配体 |
| 1.4 主要试剂 |
| 1.5 溶液配制 |
| 2. 实验仪器和设备 |
| 3. 实验方法 |
| 3.1 Apt-NPs-DTX的制备 |
| 3.2 Apt-NPs-DTX形态观察 |
| 3.3 Apt-NPs-DTX粒径与多分散系数测定 |
| 3.4 Apt-NPs-DTX zeta电位测定 |
| 3.5 核酸适配体与纳米粒偶联测定 |
| 3.6 纳米粒包封率和载药率测定 |
| 3.7 纳米粒体外药物释放 |
| 3.8 细胞对纳米粒的摄取 |
| 3.9 Apt-NPs-DTX体外杀伤作用 |
| 3.10 Apt-NPs-DTX体内抗肿瘤实验 |
| 3.11 统计分析 |
| 第三章 实验结果与分析 |
| 1. Apt-NPs-DTX实验设计思路 |
| 2. Apt-NPs-DTX的构建和表征 |
| 3. 核酸适配体与纳米粒的偶联 |
| 4. 纳米粒的包封率和载药率 |
| 5. 纳米粒的体外药物释放 |
| 6. 细胞对纳米粒的摄取 |
| 7. Apt-NPs-DTX体外杀伤作用 |
| 8. Apt-NPs-DTX体内抗肿瘤实验 |
| 第四章 讨论与结论 |
| 1. 讨论 |
| 2. 结论 |
| 参考文献 |
| 附录一 英文缩略词汇表 |
| 附录二 博士期间发表论文 |
| 附录三 非论文综述 转移性结肠癌靶向治疗的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（6）多西紫杉醇—双氢青蒿素偶联前药自组装纳米粒的构建与抗肿瘤活性评价（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 常用缩写词中英文对照表 |
| 前言 |
| 第一部分 多西紫杉醇-双氢青蒿素偶联前药的合成与表征 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 仪器 |
| 1.3 实验方法 |
| 1.4 结构鉴定 |
| 1.5 熔点测定 |
| 2 结果 |
| 2.1 HR-MS分子量鉴定 |
| 2.2 ~1H-NMR结构鉴定 |
| 2.3 ~(13)C-NMR结构鉴定 |
| 2.4 FT-IR结构鉴定 |
| 2.5 产物熔点的测定 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第二部分 多西紫杉醇-双氢青蒿素偶联前药自组装纳米粒的制备与质量评价 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 仪器 |
| 1.3 多西紫杉醇、双氢青蒿素及多西紫杉醇-双氢青蒿素偶联前药体外分析方法的建立与确证 |
| 1.4 多西紫杉醇-双氢青蒿素偶联前药自组装纳米粒的制备与质量评价 |
| 2 结果 |
| 2.1 多西紫杉醇体外分析方法 |
| 2.2 双氢青蒿素体外分析方法 |
| 2.3 多西紫杉醇-双氢青蒿素偶联前药体外分析方法 |
| 2.4 处方优化 |
| 2.5 多西紫杉醇-双氢青蒿素偶联前药自组装纳米粒形态、粒径及Zeta电位 |
| 2.6 多西紫杉醇-双氢青蒿素偶联前药自组装纳米粒包封率和载药量 |
| 2.7 多西紫杉醇-双氢青蒿素偶联前药自组装纳米粒体外释放 |
| 2.8 多西紫杉醇-双氢青蒿素偶联前药自组装纳米粒初步稳定性 |
| 3 讨论 |
| 3.1 多西紫杉醇-双氢青蒿素偶联前药体外分析方法 |
| 3.2 多西紫杉醇-双氢青蒿素偶联前药自组装纳米粒的制备 |
| 3.3 多西紫杉醇-双氢青蒿素偶联前药自组装纳米粒体外释放 |
| 4 结论 |
| 第三部分 多西紫杉醇-双氢青蒿素偶联前药自组装纳米粒的初步药动学考察 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料与仪器 |
| 1.2 大鼠血浆中多西紫杉醇、双氢青蒿素及多西紫杉醇-双氢青蒿素偶联前药的HPLC-MS/MS分析方法 |
| 1.3 大鼠体内药动学研究 |
| 1.4 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 大鼠血浆中多西紫杉醇、双氢青蒿素及多西紫杉醇-双氢青蒿素偶联前药的HPLC-MS/MS分析方法 |
| 2.2 多西紫杉醇、双氢青蒿素及多西紫杉醇-双氢青蒿素偶联前药在大鼠体内的药动学特征 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第四部分 多西紫杉醇-双氢青蒿素偶联前药自组装纳米粒体外抗肿瘤活性评价 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料与仪器 |
| 1.2 溶液的配制 |
| 1.3 细胞培养 |
| 1.4 细胞毒性试验 |
| 1.5 细胞凋亡试验 |
| 1.6 细胞周期试验 |
| 1.7 细胞迁移试验 |
| 1.8 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 细胞毒性试验 |
| 2.2 细胞凋亡试验 |
| 2.3 细胞周期试验 |
| 2.4 细胞迁移试验 |
| 3 讨论 |
| 3.1 细胞毒性试验 |
| 3.2 细胞凋亡试验 |
| 3.3 细胞周期试验 |
| 3.4 细胞迁移试验 |
| 4 结论 |
| 4.1 细胞毒性试验 |
| 4.2 细胞凋亡试验 |
| 4.3 细胞周期试验 |
| 4.4 细胞迁移试验 |
| 第五部分 多西紫杉醇-双氢青蒿素偶联前药自组装纳米粒体内药效学研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 试验动物 |
| 1.3 试验方法 |
| 1.4 Balb/c荷瘤小鼠药效学评价指标 |
| 1.5 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 Balb/c荷瘤小鼠体重变化曲线 |
| 2.2 Balb/c荷瘤小鼠肿瘤体积变化曲线与肿瘤重量 |
| 2.3 Balb/c荷瘤小鼠生存分析 |
| 2.4 Balb/c荷瘤小鼠组织H&E染色病理分析 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（7）STEAP1调控胃癌腹膜转移过程中的肿瘤发生和化疗耐药性（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词 |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 胃癌腹膜转移中上皮至间质转化过程相关基因差异表达筛选 |
| 1.2 STEAP1调控胃癌腹膜转移过程中的肿瘤发生和化疗耐药性 |
| 第2章 实验方法 |
| 2.1 实验仪器与试剂 |
| 2.1.1 实验仪器 |
| 2.1.2 实验试剂 |
| 2.2 组织样本收集 |
| 2.3 细胞培养、传代、冻存 |
| 2.3.1 细胞培养 |
| 2.3.2 细胞传代 |
| 2.3.3 细胞冻存 |
| 2.4 细胞转染 |
| 2.4.1 miR-3978转染步骤 |
| 2.4.2 pcDNA-STEAP1、荧光素酶过表达载体、si-STEAP1和sh-TEAP1转染步骤 |
| 2.5 多聚核糖体提取 |
| 2.6 RNA提取实验 |
| 2.7 多聚核糖体RNA提取 |
| 2.8 实时荧光定量PCR实验 |
| 2.8.1 多聚核糖体中基因的表达水平 |
| 2.8.2 MKN45细胞中转染sh-STEAP1或者si-STEAP1后细胞中STEAP1 mRNA的表达水平 |
| 2.9 MTT法检测细胞活力 |
| 2.10 细胞侵袭实验 |
| 2.11 细胞迁移实验 |
| 2.12 异种种植瘤实验 |
| 2.13 数据分析 |
| 第3章 实验结果 |
| 3.1 胃癌腹膜转移患者肿瘤组织多聚核糖体中上皮至间质转化过程相关基因差异表达谱 |
| 3.2 模拟腹膜转移的HMRSV5细胞(转染MIR-3978拮抗剂)模型多聚核糖体中上皮至间质转化过程相关基因差异表达谱 |
| 3.3 QRT-PCR实验验证STEAP1表达水平被SIRNA-STEAP1敲低 |
| 3.4 STEAP1表达水平下调可以降低胃癌细胞的增殖能力 |
| 3.5 STEAP1表达水平下调可以降低胃癌细胞的迁移能力 |
| 3.6 STEAP1表达水平下调可以降低胃癌细胞的侵袭能力 |
| 3.7 SHRNA-1-STEAP1和SHRNA-2-STEAP1转染MKN45细胞后敲低STEAP1表达水平 |
| 3.8 STEAP1表达水平降低抑制胃癌体内肿瘤生长能力 |
| 3.9 STEAP1表达水平上调降低人间皮细胞系HMRSV5对于多西紫杉醇的化疗敏感性 |
| 3.10 STEAP1表达水平下调增加胃癌细胞系MKN45细胞对于多西紫杉醇的化疗敏感性 |
| 第4章 讨论 |
| 第5章 结论 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在校期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（8）来那度胺增强化疗药物对三阴性乳腺癌生长抑制作用的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 符号说明 |
| 第一部分 来那度胺联合化疗药物对人三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、凋亡的体外研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附图 |
| 参考文献 |
| 第二部分 来那度胺联合化疗药物对人血管内皮细胞HUVEC增殖、迁移的体外研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附图 |
| 参考文献 |
| 第三部分 来那度胺增强化疗药物对三阴性乳腺癌裸鼠皮下移植瘤抑制作用的研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附图 |
| 附表 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的论文 |
| 学位论文评阅及答辩情况 |
| 外文论文1 |
| 外文论文2 |
（9）非编码RNA调控的SPRY2表达的分子机制及其在前列腺癌进展中的作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 miR-27a在前列腺癌组织中的表达及其对肿瘤细胞增殖影响的相关研究 |
| 1 前言 |
| 2 实验对象 |
| 2.1 临床信息 |
| 2.2 主要试剂 |
| 2.3 主要仪器 |
| 2.4 主要试剂配制 |
| 2.5 细胞系 |
| 3 实验方法 |
| 3.1 总RNA的提取 |
| 3.2 qRT-PCR |
| 3.3 细胞培养 |
| 3.4 寡核苷酸转染 |
| 3.5 免疫印迹流程 |
| 3.6 细胞增殖实验 |
| 3.7 细胞周期检测的流式细胞术 |
| 4 统计方法 |
| 5 结果 |
| 5.1 miR-27a在前列腺癌中的表达情况 |
| 5.2 miR-27a对SPRY2表达的影响 |
| 5.3 miR-27a对细胞增殖活性的影响 |
| 5.4 miR-27a/SPRY2轴调控PC细胞的细胞周期 |
| 6 讨论 |
| 第二章 长链非编码RNA CASC2通过吸附miR-183调节SPRY2的分子机制及其在前列腺细胞多西紫杉醇耐药中的作用 |
| 1 前言 |
| 2 实验对象 |
| 2.1 临床样本 |
| 2.2 主要试剂 |
| 2.3 主要仪器 |
| 2.4 主要试剂配制 |
| 2.5 PC细胞 |
| 3 实验方法 |
| 3.1 细胞培养 |
| 3.2 总RNA的提取 |
| 3.3 qRT-PCR |
| 3.4 流式细胞检测凋亡 |
| 3.5 MTT法 |
| 3.6 免疫印迹法 |
| 3.7 寡核苷酸转染 |
| 3.8 荧光素酶实验 |
| 4 统计方法 |
| 5 结果 |
| 5.1 CASC2和SPRY2在前列腺组织和细胞系中的表达及相关性 |
| 5.2 CASC2或SPRY2过表达对PC细胞对多西紫杉醇的化学敏感性的影响 |
| 5.3 CASC2和SPRY2对PC细胞系下游ERK信号表达的影响 |
| 5.4 CASC2对miR-183表达的影响 |
| 5.5 miR-183对SPRY2表达的影响 |
| 5.6 SPRY2基因敲除对PC细胞对多西紫杉醇敏感性的影响 |
| 6 讨论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 综述 |
| 参考文献 |
（10）鳄胆素诱导卵巢癌细胞凋亡的机制研究（论文提纲范文）
| 主要缩略语表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 1 前言 |
| 1.1 卵巢癌研究状况 |
| 1.1.1 卵巢癌的治疗 |
| 1.1.2 卵巢癌的分类 |
| 1.1.3 卵巢癌的诊断 |
| 1.1.4 卵巢癌的诱因及分子生物学机制 |
| 1.2 天然抗肿瘤药物的研究状况 |
| 1.2.1 植物来源抗肿瘤药物 |
| 1.2.2 动物来源抗肿瘤药物 |
| 1.2.3 微生物来源抗肿瘤药物 |
| 1.2.4 新型抗肿瘤药物及方式 |
| 1.3 鳄鱼 |
| 1.3.1 鳄鱼血的开发研究进展 |
| 1.3.2 鳄鱼油烫伤膏的开发研究 |
| 1.4 动物胆汁 |
| 1.4.1 胆汁酸 |
| 1.4.2 胆汁的药用价值 |
| 1.5 细胞周期 |
| 1.5.1 细胞周期的概念 |
| 1.5.2 细胞周期的调控 |
| 1.5.3 细胞周期调控相关因子 |
| 1.6 细胞凋亡通路及具体机制 |
| 1.6.1 Notch信号通路及研究进展 |
| 1.6.2 Wnt信号通路及研究进展 |
| 1.7 本论文的研究内容及意义 |
| 1.7.1 论文研究内容 |
| 1.7.2 研究意义 |
| 2 实验试剂与仪器 |
| 2.1 主要材料和试剂 |
| 2.2 主要实验仪器 |
| 3 实验方法 |
| 3.1 鳄胆素的提取 |
| 3.2 卵巢癌细胞的培养 |
| 3.3 MTT实验法测量细胞的增值率 |
| 3.4 CCK-8实验 |
| 3.5 集落形成实验 |
| 3.6 普通光学相差显微镜下观察细胞形态 |
| 3.7 荧光显微镜下细胞形态的观察 |
| 3.8 检测细胞周期的变化 |
| 3.9 双染流式细胞术定置栓测鳄胆素处理之后细胞的凋亡率 |
| 3.10 Western blotting |
| 3.10.1 总蛋白的提取 |
| 3.10.2 配胶 |
| 3.10.3 电泳 |
| 3.10.4 电转 |
| 3.10.5 封闭 |
| 3.10.6 一抗孵育 |
| 3.10.7 二抗孵育 |
| 3.10.8 显影 |
| 3.11 BALB/c裸鼠体外移植瘤模型的构建 |
| 3.12 肿瘤及脏器组织染色(苏木精-伊红染色法) |
| 3.13 肿瘤组织蛋白的提取 |
| 3.14 数据分析 |
| 4 实验结果 |
| 4.1 MTT法初筛癌细胞对鳄胆素的敏感程度 |
| 4.2 鳄胆素对人卵巢癌A2780细胞的抑制作用 |
| 4.3 鳄胆素对人卵巢癌A2780细胞形态的影响 |
| 4.3.1 光镜显微镜下观察鳄胆素对A2780细胞形态学的影响 |
| 4.3.2 倒置荧光显微镜下观察鳄胆素对A2780细胞形态学的影响 |
| 4.4 鳄胆素对人卵巢癌A2780细胞集落形成能力的影响 |
| 4.5 鳄胆素对人卵巢癌A2780细胞周期分布的影响 |
| 4.6 Annexin V/PI双染法定量检测鳄胆素对人卵巢癌A2780的凋亡诱导效果 |
| 4.7 鳄胆素对人卵巢癌SKOV-3细胞的抑制作用 |
| 4.8 倒置荧光显微镜下观察鳄胆素对A2780细胞形态学的影响 |
| 4.9 鳄胆素对人卵巢癌SKOV-3细胞周期分布的影响 |
| 4.10 鳄胆素对卵巢癌SKOV-3细胞的凋亡率的检测 |
| 4.11 鳄胆素对卵巢癌SKOV-3细胞克隆形成能力的影响 |
| 4.12 鳄胆素对Bax、Bcl-2和P53蛋白表达量影响 |
| 4.13 鳄胆素对Notch信号通路中蛋白表达量影响 |
| 4.14 鳄胆素对Wnt信号通路中蛋白表达量影响 |
| 4.15 鳄胆素联合常见化疗药物对卵巢癌A2780细胞的抑制作用 |
| 4.15.1 鳄胆素联合阿霉素 |
| 4.15.2 鳄胆素联合多西紫杉醇 |
| 4.15.3 鳄胆素联合吉西他滨 |
| 4.15.4 鳄胆素联合姜黄素 |
| 4.15.5 鳄胆素联合卡铂 |
| 4.15.6 鳄胆素联合顺铂 |
| 4.15.7 鳄胆素联合奈达铂 |
| 4.15.8 鳄胆素联合5-氟尿嘧啶 |
| 4.16 鳄胆素对BALB/c裸鼠体重和肿瘤生长的影响 |
| 4.17 鳄胆素对肿瘤组织的病理形态学影响 |
| 4.18 鳄胆素对裸鼠脏器病理形态学的影响 |
| 4.19 鳄胆素对Bax、Bcl-2和P53蛋白表达量的影响 |
| 4.20 鳄胆素鳄胆素对Notch通路蛋白表达量的影响 |
| 4.21 鳄胆素对Wnt通路关键蛋白表达量的影响 |
| 4.22 鳄胆素对VEGF和PCNA蛋白表达量的影响 |
| 5 讨论 |
| 5.1 鳄胆素对卵巢癌细胞生长的抑制作用 |
| 5.2 鳄胆素诱导卵巢癌细胞发生凋亡 |
| 5.3 鳄胆素诱导卵巢癌A2780细胞发生凋亡的信号通路 |
| 5.4 鳄胆素和常见化疗药物的联合作用 |
| 5.5 鳄胆素对人卵巢癌A2780细胞BALB/c裸鼠移植瘤模型的影响 |
| 6 结论 |
| 7 展望 |
| 8 参考文献 |
| 在读期间发表学术论文 |
| 在读期间获得荣誉 |
| 致谢 |
四、多西紫杉醇体外抑制血管生成的作用（论文参考文献）
- [1]多西紫杉醇前药/血卟啉共组装纳米粒的构建及其药效学与药动学考察[D]. 李玉洁. 山西医科大学, 2021
- [2]新型NO供体聚合物紫杉醇胶束的制备及抗肿瘤作用和机制研究[D]. 李惠兰. 江西中医药大学, 2021(01)
- [3]华蟾素注射液治疗结肠癌腹水的优效人群分析及对VM的作用机制研究[D]. 王一同. 北京中医药大学, 2021(01)
- [4]肺癌靶向多西紫杉醇白蛋白纳米粒的制备及活性研究[D]. 吴斌. 东北林业大学, 2021
- [5]核酸适配体介导的承载多西紫杉醇的白蛋白纳米粒在结肠癌靶向治疗方面的应用[D]. 于珍. 北京协和医学院, 2021(02)
- [6]多西紫杉醇—双氢青蒿素偶联前药自组装纳米粒的构建与抗肿瘤活性评价[D]. 李宁. 山西医科大学, 2020
- [7]STEAP1调控胃癌腹膜转移过程中的肿瘤发生和化疗耐药性[D]. 吴元玉. 吉林大学, 2019(03)
- [8]来那度胺增强化疗药物对三阴性乳腺癌生长抑制作用的研究[D]. 尹林林. 山东大学, 2019(02)
- [9]非编码RNA调控的SPRY2表达的分子机制及其在前列腺癌进展中的作用研究[D]. 胡映波. 南昌大学, 2019(01)
- [10]鳄胆素诱导卵巢癌细胞凋亡的机制研究[D]. 付启瑞. 厦门大学, 2019(08)