一、p57~(kip2)在膀胱癌的表达及意义（论文文献综述）
周潇妮[1]（2020）在《基于整合组学探讨细胞周期相关基因在高级别浆液性卵巢癌发生及发展中的作用》文中提出目的:从拷贝数异常的角度出发,探讨细胞周期相关基因在高级别浆液性卵巢癌发生及发展中的作用,从中挖掘出影响该疾病预后的靶基因,为今后临床治疗上药物的选择及研发提供参考。方法:1.从GEO数据库中获得高级别浆液性卵巢癌病例的差异表达基因。2.从TCGA数据库中获得高级别浆液性卵巢癌病例的拷贝数变异基因。3.从GO、KEGG、REACTOME、BIOCARTA数据库中筛选出与细胞周期相关的通路与基因。4.将高级别浆液性卵巢癌病例中与细胞周期相关,同时发生了拷贝数变异及差异表达的基因进行整合。5.结合生存曲线获得影响该疾病发生及发展的靶基因。结果:1.从GEO数据库中以P值10-9为截值筛选得到827个肿瘤中显着上调的基因;950个肿瘤中显着下调的基因。2.从TCGA数据库中以突变频率10%为截值筛选出拷贝数扩增（AMP）基因共1999个;拷贝数缺失（DEL）基因共47个。3.从GO、KEGG、REACTOME和BIOCARTA数据库中确定了178条与细胞周期相关的通路,共包含3213个与细胞周期相关的基因。4.整合以上数据,筛选得到36个与细胞周期相关,同时发生了拷贝数变异及差异表达的基因。5.结合生存曲线分析发现ECT2、RAD51AP1、YWHAZ、RAD21、SMC4、TFB2M等6个基因与高级别浆液性卵巢癌的不良生存预后显着相关。结论:1.部分高级别浆液性卵巢癌的发生可能是通过基因的拷贝数扩增导致细胞周期相关基因表达的上调,从而影响到细胞周期造成的。2.与细胞周期相关,同时发生了拷贝数变异及差异表达且与高级别浆液性卵巢癌的不良生存预后显着相关的基因有ECT2、RAD51AP1、YWHAZ、RAD21、SMC4、TFB2M。3.与细胞周期相关,同时发生了拷贝数变异及差异表达的MECOM、PRKCI、ECT2基因可能共用了同一条信号通路促使高级别浆液性卵巢癌的发生及发展。
何柳佳[2]（2020）在《miR-501-3p在肾癌中的抑癌作用及其机制研究》文中提出背景:肾癌即肾细胞癌（renal cell carcinoma）,是泌尿系统常见的恶性肿瘤之一,其起源于肾实质泌尿小管上皮系统,占肾脏恶性肿瘤的80%～90%,发病率约占全身肿瘤的2.1%。近年来由于吸烟、饮食变化等原因,肾癌发病率有逐渐上升的趋势。肾癌易进展,预后差,且其分子机制尚不明确。阐明肾癌发生发展的生物学机制,对于肾癌早期诊断及治疗具有重要的临床意义。microRNAs（miRNAs）是一类由内源性基因编码的非编码RNA,通过靶向基因mRNA3’端非编码区调控基因表达。研究表明miRNAs如miR-501-3p参与肿瘤的发生发展,过表达miR-501-3p可抑制前列腺癌细胞增殖和集落形成,并诱导细胞周期G1期阻滞。miR-501-3p在肺癌、大肠癌、胰腺导管腺癌等肿瘤中也有促癌或抑癌作用。但miR-501-3p在肾癌中的表达模式及其生物学功能仍缺乏系统性研究,其对肾癌细胞增殖、迁移的影响及其分子机制尚不明确。目的:通过生物信息学网站分析miR-501-3p在肾癌中的表达模式并分析其表达下调的表观遗传学机制。采用一系列功能实验探究miR-501-3p在肾癌中的生物学功能。利用生物信息学网站预测以及双荧光素酶报告基因实验验证miR-501-3p在肾癌中的直接靶基因。分析靶基因在肾癌中的生物学功能,阐述miR-501-3p对其调控的机制,并探索下游分子通路。方法:1.通过生物信息学网站分析miR-501-3p在肾癌中的表达模式并分析miR-501-3p表达下调是否与其启动子区域CpG岛异常甲基化相关。2.转染miR-501-3pmimic上调肾癌细胞786-O和Caki-1细胞株的miR-501-3p表达量。通过CCK-8实验、流式细胞周期检测、平板克隆形成实验、Transwell迁移实验探究miR-501-3p对肾癌细胞增殖与迁移能力的影响。3.利用生物信息学网站预测和双荧光素酶报告基因实验验证miR-501-3p在肾癌中的靶基因。通过CCK-8实验、流式细胞周期检测、平板克隆形成实验、Trans well迁移实验探究靶基因对肾癌细胞增殖与迁移能力的影响。4.通过拯救实验、m6A Dot Blot实验探究miR-501-3p与靶基因之间的调控关系和作用机制。结果:1.我们发现miR-501-3p在肾癌组织中较正常组织表达明显降低。但miR-501-3p转录起始位点前后约5000bp区域内未找到CpG岛,我们推测miR-501-3p在肾癌中低表达与启动子区域异常甲基化无关。2.过表达miR-501-3p可显着抑制肾癌细胞的增殖、克隆形成、迁移的能力,同时诱导肾癌细胞G1期阻滞。3.我们通过生物信息学网站预测和双荧光素酶报告基因实验证实WTAP是miR-501-3p在肾癌中的靶基因。4.我们发现WTAP在肾癌组织中较正常组织表达明显增高。敲低WTAP可显着抑制肾癌细胞的增殖、克隆形成以及细胞迁移,但可诱导肾癌细胞G1期阻滞。WTAP主要通过下游分子CDK2调节肾癌细胞周期。5.拯救实验证实过表达miR-501-3p可有效抑制WTAP诱导的肾癌细胞增殖与迁移。m6A Dot Blot实验证实敲低WTAP或过表达miR-501-3p均可下调肾癌细胞的m6A表达水平。但我们未在CDK2mRNA上找到m6A修饰位点,因此我们推测m6A修饰并不是miR-501-3p/WTAP/CDK2轴影响肾癌的作用机制。结论:miR-501-3p在肾癌细胞中显着低表达,过表达miR-501-3p可诱导肾癌细胞G1期阻滞从而抑制肾癌细胞的增殖、克隆形成。miR-501-3p在肾癌中的靶基因是WTAP。最终我们发现miR-501-3p/WTAP/CDK2作为调控轴参与肿瘤进展,为肾癌的发生发展机制提出新的理论。
李珍瑾[3]（2019）在《高糖经LncRNA-GAS5影响子宫内膜癌进展的机制研究》文中研究说明目的:子宫内膜癌（Endometrial Carcinoma,EC）是女性常见的恶性肿瘤之一,合并肥胖、糖尿病（Diabetes Mellitus,DM）、高血压皆是高危险族群,近几年发病率呈逐年上升,并且发病人群越来越年轻化。临床上,主要的治疗方法是手术切除,但治疗后复发率和死亡率仍较高、预后差。临床实践中发现,EC患者中DM是普遍存在的伴发疾病,长期高血糖状态增加EC的发生和发展危险。LncRNA（long non-coding RNA）是一类长度超过200个核苷酸的非编码RNA,在多种肿瘤中异常表达,通过多种机制调控肿瘤的发生发展,被证实为恶性肿瘤形成的重要的基因表达调控器。长链非编码RNA生长阻滞特异性转录物5（LncRNA Growth arrest-specific transcript 5,LncRNA GAS5）在乳腺癌、胃癌、宫颈癌等肿瘤中低表达,过表达GAS5可抑制肿瘤细胞增殖、促进凋亡、阻滞细胞周期,目前关于GAS5在DM合并EC中的研究并不多,因此本研究探讨GAS5在DM促进EC发展过程中的作用及机制。方法:1、根据生物信息学预测影响EC生存期的指标,收集并统计天津中心妇产医院2017年5月-2018年2月新发的EC患者的病历资料,将所有EC患者依据是否合并DM分为单纯EC组和DM合并EC组,对两组患者的临床病理特点比较,采用qRT-PCR检测两组癌组织中GAS5和miR-222-3p的表达,同时分析其与临床病理特点的关系和各指标之间的关系。2、体外培养EC细胞株HEC-1A和Ishikawa,采用不同浓度的葡萄糖（5.5mM、15mM、20mM、25mM）,干预EC细胞48h,利用qRT-PCR检测GAS5和miR-222-3p的表达变化,构建GAS5过表达载体,和miR-222-3p抑制剂,应用CCK-8实验、克隆形成及Transwell侵袭实验检测细胞增殖、克隆形成及侵袭作用。3、在不同高糖浓度下,采用qRT-PCR检测P27的表达,利用核质分离试剂盒检测GAS5在Ishikawa细胞中的亚细胞定位,使用双荧光素酶实验验证GAS5和miR-222-3p及miR-222-3p和P27（CDKN1B）的关系;过表达GAS5和上调miR-222-3p共同转染Ishikawa细胞后,检测miR-222-3p和P27表达的变化,使用Western blot检测P27蛋白的表达变化。结果:1、利用生物信息学,挑选出与EC相关的LncRNA GAS5进行研究,与高表达GAS5的EC患者相比,低表达GAS5的EC患者远期预后差,生存期缩短（P=0.072）。临床资料分析,DM合并EC组的患者初诊时,肿瘤FIGO分期和组织分级都高于单纯EC组,且更容易发生淋巴结转移（P<0.05）。在EC组织中GAS5呈低表达,且下降程度与是否合并DM、肿瘤组织分级、FIGO分期和淋巴结转移有关。与单纯EC组相比,DM合并EC组的癌组织中GAS5的表达量更低（P<0.05）;与癌旁正常子宫内膜相比,EC合并与不合并DM患者miR-222-3p的表达均升高,且DM合并EC组的患者miR-222-3p的表达升高更多,其上升程度与肿瘤FIGO分期和淋巴结转移有关（P<0.05）,两组中GAS5与miR-222-3p之间均呈负相关关系（P<0.05）。2、与正常子宫内膜细胞相比,HEC-1A及Ishikawa细胞中,GAS5的表达水平明显下调,而miR-222-3p的表达水平明显上调（P<0.01）。随着高糖浓度的增加,GAS5的表达呈下降趋势,而miR-222-3p的表达呈上升趋势（P<0.05）。过表达GAS5质粒转染进EC细胞系内,并稳定表达;体外细胞生物学行为研究发现,高糖（25mM）能够促进EC细胞增殖、增强克隆形成和侵袭能力,而过表达GAS5或者抑制miR-222-3p后都可逆转高糖诱导的EC细胞的增殖、克隆形成及侵袭（P<0.01）。3、在HEC-1A及Ishikawa细胞中,P27的表达水平明显下调（P<0.01）,随着高糖浓度的增加,P27的表达呈下降趋势（P<0.05）。在Ishikawa细胞中GAS5在细胞浆的表达量高于细胞核;双荧光素酶实验结果提示GAS5与miR-222-3p存在结合位点,两者能直接调控,而P27（CDKN1B）可以与miR-222-3p结合。与对照组相比,过表达GAS5后,miR-222-3p的表达量下降,P27的表达水平上升（P<0.01）;上调miR-222-3p后,P27 mRNA和蛋白水平均下调;而过表达GAS5同时上调miR-222-3p后,P27 mRNA和蛋白水平出现了明显减少（P<0.01）。结论:1、DM可能会通过影响EC的分期分级、淋巴结转移,促进肿瘤的进展、影响患者的预后,LncRNA GAS5可能作为EC患者的一个预后指标。2、GAS5和miR-222-3p可能在DM合并EC中起着重要作用,过表达GAS5或抑制miR-222-3p后,可逆转高糖诱导的EC细胞的增殖、克隆形成及侵袭能力。3、高糖经LncRNA GAS5/miR-222-3p通过调控P27影响EC细胞增殖和侵袭。
张跃明[4]（2019）在《KIF3B在上皮性卵巢癌中的表达及对卵巢癌细胞生长的调控作用及其机制研究》文中认为第一部分:KIF3B在卵巢癌中的表达及临床意义目的:旨在探讨KIF3B在卵巢癌中的表达及其与预后之间的关系。方法:采用免疫组化、Western blot方法检测KIF3B在卵巢癌组织中的表达;并分析KIF3B与Ki-67水平、临床病理特征及其与卵巢癌患者生存质量之间的关系。结果:KIF3B在卵巢癌组织中的蛋白表达水平明显高于正常卵巢组织中的表达,并且组织学级别越高,KIF3B的蛋白表达越高。KIF3B在卵巢癌细胞中主要定位在细胞质中,与常用的细胞增殖相关的抗原Ki-67一致,随病理分级的增加其表达逐渐增强。KIF3B的表达水平与卵巢癌患者的组织学分级、患者有无腹水、腹水中是否存在肿瘤细胞、其他脏器有无转移,以及Ki-67的表达水平相关;而与患者的年龄、经期状态、FIGO分期、淋巴结分期无关。卵巢癌患者的存活率与KIF3B的表达有相关性,KIF3B高表达的患者,存活率低,差异有统计学意义。KIF3B表达低的患者术后生存时间长,KIF3B表达水平与预后呈负相关。结论:KIF3B在卵巢癌患者中高表达,与组织学分级呈正相关;KIF3B表达量高的患者生存期短,与卵巢癌患者不良预后相关。第二部分:KIF3B促进细胞周期由G0/G1期向S期转换,并促进卵巢癌细胞的生长目的:探讨KIF3B对卵巢癌细胞生长的影响及其机制。方法:Western blot 检测卵巢癌细胞（HO8910、OVCAR-3、SK-OV-3、A2780）中 KIF3B表达水平;慢病毒感染技术建立过表达或敲减KIF3B表达的细胞系;MTT检测过表达KIF3B、敲减KIF3B对卵巢癌细胞生长的影响;流式细胞术检测过表达KIF3B、敲减KIF3B对卵巢癌细胞周期分布的影响;Western blot检测过表达KIF3B、敲减KIF3B对细胞周期相关蛋白表达的影响。体内移植瘤模型检测过表达KIF3B、敲减KIF3B对卵巢癌肿瘤生长的影响。结果:HO8910细胞中KIF3B蛋白表达量最高,A2780细胞中KIF3B蛋白表达量最低;慢病毒载体介导建立过表达/敲减KIF3B表达的细胞系;KIF3B shRNA显着抑制HO8910细胞的生长;过表达KIF3B显着促进A2780细胞的生长;KIF3B shRNA显着上调G0/G1期细胞比例,下调S期细胞比例;过表达KIF3B显着上调S期细胞比例,下调G0/G1期细胞比例;敲减KIF3B抑制HO8910细胞中Cyclin A和CDK2的表达;过表达KIF3B上调A2780细胞中Cyclin A和CDK2的表达。KIF3B shRNA显着抑制HO8910移植瘤的生长;过表达KIF3B显着促进A2780移植瘤的生长。结论:KIF3B可促进细胞周期由G0/G1期向S期转换,并促进卵巢癌的生长。第三部分:KIF3B通过PI3K/AKT通路调控周期相关基因Cyclin A和CDK2的表达目的:探讨KIF3B促进细胞周期由G0/G1期向S期转换的机制。方法:基因芯片检测了敲减KIF3B对HO8910细胞基因表达谱的影响;David软件（https://david.ncifcrf.gov/）对差异基因进行功能富集分析;采用KEGG数据库（https://www.genome.jp/kegg/）分析差异基因影响的信号通路;Western blot检测蛋白表达水平和磷酸化水平;MTT检测卵巢癌细胞生长的影响。结果:基因芯片检测敲减KIF3B对HO8910细胞基因表达谱的影响,选择表达水平改变超过1.8倍的基因为差异基因。敲减KIF3B下调了 2293个基因的表达,上调了 204个基因的表达;敲减KIF3B的差异基因富集在FoxO上游的关键通路PI3K/AKT;采用Western blot检测了 HO8910细胞中PI3K调节亚基PIK3R2 （p85）的表达水平,以及AKT的磷酸化水平,发现敲减KIF3B可抑制p85的表达,并抑制AKT的磷酸化;过表达KIF3B促进p85的表达,并促进AKT的磷酸化;PI3K抑制剂Wortamannin能够削弱过表达KIF3B对AKT的激活,提示KIF3B通过PI3K依赖性机制激活AKT;Wortamannin能够削弱过表达KIF3B对Cyclin A和CDK2表达的上调作用;Wortamannin能够削弱过表达KIF3B对卵巢癌细胞生长的促进作用。结论:KIF3B高表达能够上调PI3K调节亚基PIK3R2 （p85）的表达,激活PI3K/AKT通路,进而上调卵巢癌细胞中周期调控相关蛋白Cyclin A和CDK2的表达,促进细胞周期由G0/G1期向S期的转换,最终促进卵巢癌的生长。
张效通[5]（2019）在《circINTS4/miR-146b/CARMA3轴调控膀胱癌肿瘤发生的机制研究》文中认为目的:膀胱癌是泌尿系最常见的恶性肿瘤,也是世界第九大常见的恶性肿瘤。在对膀胱癌致病原因及致病机理的研究上,已经取得了很多突破性的进展,然而,现今对膀胱癌的治疗上主要仍局限于手术治疗及化学治疗,究其原因主要是因为膀胱癌的易复发及易转移特性,这导致现如今对膀胱癌的治疗手段有限。近期,有越来越多的证据表明CARMA3对炎症及肿瘤的发生发展上,起到了至关重要的作用。CARMA3在诸如乳腺癌、肾癌、肺癌及结直肠癌等一系列肿瘤中均呈现高表达。并且,CARMA3被认为是一种癌基因参与调节肿瘤细胞的增殖、侵袭、转移以及凋亡等各种肿瘤细胞特性。环状RNA（circRNA）对基因表达的调控作用可通过对微小RNA（microRNA）的海绵吸附作用进而影响肿瘤的发生发展。然而,在膀胱癌中,circRNA的作用及对miRNA的海绵吸附作用罕有报道。因此,本文通过探索circRNA/microRNA/CARMA3通路在膀胱癌中的促癌/抑癌作用以及其详细机制,寻找关键分子标志物,为膀胱癌的有效诊断及治疗奠定理论基础。方法:1.CARMA3上游microRNA的筛选及检测通过对Targetscan,miRWalk,miRBase及Starbase等生物信息学网站分析,筛选与CARMA3 mRNA 3’-UTR区具有碱基互补且高度保守的miRNA,挑选表达丰度低且在膀胱癌中未被研究过的miRNA。从标本库中随机选取40对病理诊断明确的膀胱癌病例,提取癌组织及癌旁组织的总RNA及蛋白;培养7种膀胱癌细胞系及上皮永生化细胞系,提取各自总RNA及蛋白,利用qRT-PCR技术检测CARMA3 mRNA及miRNA表达丰度,利用Western blot实验检测CARMA3蛋白表达情况。分析CARMA3及miRNA在组织中表达相关性。2.miRNA对CARMA3的调控机制及在膀胱癌细胞系中的功能实验对膀胱癌细胞系分别检测转染miRNA模拟物/抑制物后CARMA3 mRNA/蛋白水平变化。根据生物信息学的预测位点,构建野生及突变型双荧光素酶报告基因质粒,判定miRNA与CARMA3 mRNA 3’-UTR区特异性结合。对膀胱癌T24及UMUC3细胞转染miRNA的模拟物/抑制物及对应的阴性对照,利用RTCA实验检测转染后细胞增殖能力;利用Transwell实验检测细胞侵袭及转移能力;利用流式细胞仪技术检测膀胱癌细胞周期及凋亡水平。回复实验检测miRNA对CARMA3的调控及miRNA通过CARMA3对膀胱癌细胞功能实验的影响。3.miRNA上游circRNA的筛选及结合验证利用RNAhybrid等生物信息学网站预测,挑选与所研究miRNA具有碱基互补且未被研究的circRNA。通过双荧光素酶报告基因实验,RNA pulldown试验及RNA免疫沉淀试验,验证预测的circRNA与所研究miRNA具有相同的靶点并且可以与之结合。通过荧光原位杂交试验对预测的circRNA与所研究miRNA进行细胞共定位。4.上游circRNA在膀胱癌中的功能在膀胱癌组织与相应癌旁组织及7种膀胱癌细胞系与上皮永生化细胞中,对所研究circRNA的表达丰度进行检测,并分析circRNA及miRNA在组织中相关性。在膀胱癌细胞系中沉默circRNA,利用RTCA实验检测转染后细胞增殖能力;利用Transwell实验检测细胞侵袭及转移能力;利用流式细胞仪技术检测膀胱癌细胞周期及凋亡水平。进行裸鼠皮下成瘤实验,在4-6周Balb/c裸鼠皮下注射稳转后的UMUC3细胞,观察移植瘤模型的生长情况,并对比不同组别生长情况。取移植瘤进行免疫组化,检测Ki-67变化以判断circRNA对增殖能力的影响;Western blot实验检测不同组别瘤细胞中Bcl-2表达以判断细胞凋亡情况。5.上游circRNA对miRNA的调控作用及机制qRT-PCR及Western blot实验检测内源性过表达/沉默circRNA对CARMA3表达影响。回复实验检测circRNA对miRNA的调控及circRNA通过miRNA调控CARMA3的表达及对膀胱癌细胞功能的影响。6.circRNA对通路激活/抑制的验证Western blot实验检测内源性过表达/沉默circRNA对相应NF-κB通路及P38 MAPK通路变化的影响。结果:1.相较于对应的癌旁组织及上皮永生化细胞,CARMA3在膀胱癌组织中及7种膀胱癌细胞系中呈现高表达。通过生物信息学方法分析预测及双荧光素酶报告基因实验验证发现,miR-146b与CARMA3 mRNA 3’-UTR区特异性结合并且负向调控CARMA3 mRNA及蛋白水平表达。并且miR-146b在膀胱癌组织中及7种膀胱癌细胞系中较相应的癌旁组织及上皮永生化细胞呈现低表达。2.体外实验验证发现,miR-146b具有负向调控膀胱癌细胞增殖、侵袭、转移,促进膀胱癌细胞凋亡及诱导细胞G1/S期阻滞的功能。并且,miR-146b影响膀胱癌细胞增殖、侵袭、转移及凋亡的作用是通过靶向调控CARMA3的方式进而实现的。3.生物信息学方法分析预测发现,circINTS4可能作为内源性竞争RNA吸附miR-146b。通过双荧光素酶报告基因实验,RNA pulldown试验及RNA免疫沉淀试验,证实了circINTS4包含了一个与miR-146b相同的靶点并且可以与之结合。通过荧光原位杂交试验揭示circINTS4与miR-146b共同定位于胞质。内源性抑制/激活circINTS4可负向调控miR-146b表达量升高/降低。4.相较于对应的癌旁组织及上皮永生化细胞,circINTS4在膀胱癌组织中及7种膀胱癌细胞系中呈现高表达,并且circINTS4及miR-146b在组织中表达呈负相关。体外实验验证发现,下调circINTS4可抑制膀胱癌细胞增殖、侵袭、转移,促进膀胱癌细胞凋亡及诱导细胞G1/S期阻滞的功能。在裸鼠体内实验中同样证实了上调circINTS4可以促进移植瘤生长,抑制凋亡。5.内源性过表达/沉默circINTS4可正向调控CARMA3的表达,并且circINTS4调控CARMA3的作用是通过竞争性结合miR-146b的方式实现。体外功能实验研究同样发现,circINTS4影响膀胱癌细胞增殖、侵袭、转移、周期及凋亡的作用是对miR-146b的海绵吸附作用方式进而实现的。6.内源性过表达/沉默circINTS4可激活/抑制NF-κB通路及抑制/激活P38 MAPK通路。并且这种激活或抑制作用是通过CARMA3介导进而实现的。结论:circINTS4能够作为内源性竞争RNA对miR-146b起到海绵吸附作用,进而解除miR-146b对CARMA3表达的抑制作用。circINTS4在膀胱癌中呈现高表达并且通过circINTS4/miR-146b/CARMA3轴充当促癌基因的作用,而且circINTS4还能够调节NF-κB及P38 MAPK通路进而影响膀胱癌的发生发展。这些都为膀胱的有效诊断及治疗奠定理论基础。
李小舟,熊羊,张向阳,黄芳[6]（2018）在《miR-222对膀胱癌增殖行为的影响及其机制研究》文中研究说明目的探讨miR-222表达水平变化对膀胱癌细胞增殖行为的调控作用及可能机制,阐明miR-222在膀胱癌中可能作用的靶向蛋白及其作用位点。方法利用qRT-PCR法检测正常膀胱上皮细胞和膀胱癌细胞中的miR-222的表达水平;利用CCK8法和EdU染色法检测各组细胞的增殖能力;利用细胞周期试剂盒检测各组细胞周期的分布;利用Western blot法和qRTPCR检测各组细胞内抑癌基因p27kip1和p57kip2的表达;利用TargetScan Human 7. 1软件预测miR-222与p27kip1和p57kip2 mRNA 3非编码区（UTR）的结合位点;利用双荧光素酶法验证miR-222与p27kip1和p57kip2的靶向结合位点。结果miR-222在膀胱癌细胞中的表达水平显着高于正常膀胱上皮细胞;miR-222表达水平的上调会明显促进细胞的增殖并且抑制p27kip1和p57kip2的表达,下调则会抑制细胞的增殖,引起膀胱癌细胞的细胞周期G0/G1期滞留,并促进了p27kip1和p57kip2的表达;miR-222通过靶向结合目标蛋白p27kip1和p57kip2 mRNA的3UTR抑制其转录。结论miR-222在膀胱癌中特异性高表达,通过与p27kip1和p57kip2 mRNA的3’-UTR特异性结合抑制其表达水平,并促进膀胱癌细胞周期由G1期向S期转变,从而促进了癌细胞的增殖。
李晓萌[7]（2018）在《TBX3蛋白在甲状腺乳头状癌发生发展中的功能及机制研究》文中研究说明目的:甲状腺癌（Thyroid Carcinoma,TC）作为最常见的内分泌系统癌症,在过去的几十年里发病率不断上升。虽然BRAFV600E突变及RET/PTC染色质重排在TC病例中的作用已比较明确,但是其它遗传学事件还知之甚少,因此,寻找新的分子靶标指导早期诊断和进行靶向治疗具有非常重要的意义。TBX3基因,作为T-box转录因子家族的重要成员,在胚胎发育及癌症发生中具有重要功能,被报道在多种癌症中过量表达,通常扮演癌基因的角色,参与肿瘤发生的多种生物学行为。主要通过抑制p53的激活子p14ARF或CDK激酶抑制剂p21WAF1/CIP1,以p53依赖及非依赖的方式促进癌症发生,TBX3在甲状腺乳头状癌中的功能尚未见报道。本课题的主要目的是研究TBX3如何影响甲状腺乳头状癌（PTC）的发生、发展,探讨TBX3在PTC中异常表达存在的可能分子机制。方法:第一部分:研究TBX3在甲状腺乳头状癌临床标本中的表达情况及分析TBX3表达与临床病理特征的相关性。该部分主要从三个方面进行研究。首先,收集98例甲状腺乳头状癌病人组织,其中71例标本包含临近的癌旁组织。应用免疫组化法检测所有标本中TBX3的表达情况。其次,应用qRT-PCR及免疫印迹技术检测15对乳头状癌组织及对应癌旁组织中TBX3蛋白的表达情况;与此同时,提取5株甲状腺癌细胞系及1株正常甲状腺上皮细胞的蛋白,免疫印迹技术检测TBX3的表达程度。最后,将癌组织中TBX3表达水平与肿瘤分级和临床病理特征进行?2检验,分析相关程度。第二部分:探讨TBX3蛋白异常表达对甲状腺乳头状癌细胞增殖行为的影响。一方面,在PTC细胞系中瞬时转染siTBX3或稳定感染TBX3敲减慢病毒,下调TBX3蛋白的表达,之后应用CCK8、克隆形成实验及流式细胞术分析增殖表型变化情况。另一方面,将稳定低表达TBX3的K1细胞接种至裸鼠背部皮肤两侧,定期观察及测定肿瘤体积变化,进一步用免疫组化分析方法检测TBX3、Ki-67的表达变化。为了探索TBX3影响PTC细胞增殖的分子机制,对野生型和敲减TBX3的细胞进行RNA-seq测序分析。qRT-PCR及免疫印迹方法对靶基因p57KIP2进行验证,观察TBX3蛋白对p57KIP2表达的影响。之后,通过Rescue实验,在TBX3低表达的K1细胞中,进一步敲减p57KIP2表达,检测增殖表型的变化。第三部分:首先,用生物信息学方法预测TBX3在p57KIP2编码基因CDKN1C启动子区存在的潜在结合位点。之后将设计的不同位点的CDKN1C启动子截短报告质粒与TBX3过表达质粒共转染293T细胞中,用虫荧光素酶活性实验初步筛选潜在结合区段。其次,通过内外源性ChIP及DNA-pull down实验精确确定TBX3结合于p57KIP2编码基因CDKN1C启动子的精确位点。进一步,CoIP实验检测TBX3与PRC2复合体及HDAC1/2物理上能否相互作用。最后,在过表达TBX3的K1细胞中,同时加入S-腺苷高半胱氨酸水解酶和HDAC1/2的抑制剂DZnep和TSA后,检测p57KIP2蛋白表达及细胞增殖表型。结果:第一部分:人甲状腺乳头状癌癌组织中,TBX3在mRNA和蛋白水平均呈现高表达,在癌旁组织中低表达甚至不表达。进一步分析发现TBX3的表达水平与淋巴结转移及TNM分期成正比（p<0.001）,与年龄、性别及肿瘤大小无关。与此一致的是,相对于正常甲状腺上皮细胞Nthy,TBX3在甲状腺乳头状癌细胞系K1和TPC-1中高表达。第二部分:TBX3影响PTC细胞系的增殖表型。体外实验表明:PTC细胞系中瞬时或稳定敲减TBX3蛋白后,细胞生长变慢,细胞周期阻滞于G1/S期。体内动物实验观察到,TBX3蛋白敲减后,裸鼠体内成瘤能力下降,肿瘤体积明显减小。高通量转录组测序分析发现一个新的与增殖变化密切相关的CKI分子,p57KIP2。在细胞中敲减或过表达TBX3后,p57KIP2表达水平相应的升高或降低。进一步的Rescue实验,观察到周期阻滞表型有了一定程度的回复,说明p57KIP2在PTC中作为TBX3的下游分子发挥功能。第三部分:TBX3直接转录调节p57KIP2表达。首先,通过虫荧光素酶及内外源性ChIP实验确定TBX3结合于p57KIP2编码基因CDKN1C启动子的-1297及-800位点处。其次,通过内外源性CoIP实验,验证TBX3与PRC2复合体及HDAC1/2物理上能够相互结合。最后,通过Rescue实验,发现抑制H3K27me3和HDAC1/2在复合物中的作用后,细胞过快增长的表型得以恢复,证明TBX3需要PRC2复合物及HDAC1/2发挥功能。结论:下调甲状腺乳头状癌细胞系中TBX3的表达将会延迟G1/S期的转变,减少体外细胞增殖及抑制体内成瘤。p57KIP2是TBX3控制PTC细胞增殖的一个新的下游靶基因。TBX3表达减少可以导致p57KIP2表达水平的上升,随后敲低p57KIP2亦可以恢复细胞周期阻滞的表型。在PTC临床样本中,TBX3的表达与肿瘤分型密切相关,而与p57KIP2的表达呈现负相关。机制研究表明TBX3直接结合在p57KIP2的编码基因CDKN1C的启动子区域,抑制其转录。此外,TBX3招募PRC2复合物的核心成分及组蛋白去乙酰化酶HDAC1/2,共同实现转录抑制功能。总之,我们的研究说明:TBX3-p57KIP2轴参与细胞周期调节的新的功能和机制,也表明此过程中PRC2复合体及HDAC1/2的作用。
魏鑫[8]（2013）在《子宫内膜间质肉瘤P57KIP2的表达及临床意义研究》文中研究表明目的：探讨P57KIP2在子宫内膜间质肉瘤中的表达及与妇产科分期和预后的关系,为研究子宫内膜间质肉瘤的发病机制、临床诊断及进一步开展基因治疗提供理论依据。方法：收集聊城市人民医院2004-2011年44例子宫内膜间质肉瘤和21例子宫肌瘤标本石蜡切片,采用免疫组化Envision两步法检测P57KIP2的表达。结果：P57KIP2在子宫内膜间质肉瘤细胞核中的表达（阳性率47.7%）远低于子宫肌瘤细胞核中的表达（阳性率95.2%）,两组间有显着差异（X2=0.454,p<0.05）；与子宫内膜间质肉瘤无复发转移组比较,P57KIP2蛋白在复发转移子宫内膜间质肉瘤中表达阳性率较低,有显着差异（P=0.031<0.05）；且与子宫内膜间质肉瘤无复发转移组比较,复发转移子宫内膜间质肉瘤组其阳性细胞表达率也显着降低（15%vs56.3%,P<0.05）。结论：P57KIP2在子宫内膜间质肉瘤的发生和发展过程密切相关,且与子宫内膜间质肉瘤的预后有关,低表达或缺失提示预后不良。
徐维果[9]（2013）在《化疗药物在p53缺陷型肿瘤细胞中对p21启动子激活机制的研究》文中研究指明恶性肿瘤,又称癌症,已成为严重危害人类生命健康的疾病之一,全球因癌症而死亡的人数呈逐年上升的趋势。多年来，肿瘤治疗一直是生命科学领域关注的重点。癌症从本质上来说是一种细胞增殖性疾病，因此控制细胞生长，抑制细胞增殖是治疗癌症的有效手段。正常细胞在转化成为癌细胞时，会在细胞生长周期上出现一系列的改变，而这些改变是造成细胞恶性增殖的直接原因。细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子（cyclin-dependent kinaseinhibitors, CKIs）是对细胞生长周期有重要负调节作用的蛋白因子，主要分为两大类：INK4家族和CIP/KIP家族。而p21WAF1/CIP1（p21）是后者的主要成员之一。作为最早被发现的CKI基因，其生物学作用及调控机制得到了广泛深入的研究。p21主要通过抑制细胞周期蛋白与相应激酶结合形成复合物，从而诱导细胞周期停滞,起到抑制细胞增殖的功能。同时，p21还与细胞分化、衰老、凋亡有重要关系，是细胞外各种生长分化信号作用的靶标，因此在细胞信号传递网络中具有中心节点的作用。大量研究发现，p21是一个潜在的肿瘤抑制基因，但它在生物体内高度保守，很少发生突变。p21在癌细胞中的主要变化是表达量的变化。p21在细胞内的表达水平往往是通过p53依赖型及p53非依赖型两种机制，从转录水平来调控的。许多治疗肿瘤的化学药物能够通过不同的方式上调p21表达，实现抑制肿瘤细胞生长的效果。研究发现，半数以上的人类肿瘤是p53功能缺陷或缺失的，在p53基因突变或缺失的肿瘤细胞中，p21的表达量相对较低，这类细胞中p21转录激活主要是通过p53非依赖型途径实现的。而基因的转录效率与启动子活性直接相关，因此对p21启动子的研究成为关注的重点。我们选取了卵巢癌细胞系SKOV3作为实验对象。该细胞系是p53基因缺陷型细胞，恶性程度较高，且对多种化学药物具有耐受性。为了研究化疗药物抑制肿瘤细胞生长的效果与p21表达量之间的关系，我们构建了p21启动子-荧光素酶报告基因系统，对常用化学药物进行了筛选检测，发现铂类化合物奥沙利铂（oxaliplatin, Oxa）具有明显的激活p21启动子，诱导p21表达，使细胞停滞在S期的作用，而其他化疗药物没有这一效果。说明奥沙利铂对肿瘤细胞的抑制作用与其诱导p21表达具有正相关性。同时在动物水平也证明了奥沙利铂对SKOV3细胞移植肿瘤的抑制效果，而其他化学药物则没有显着作用。为了阐明奥沙利铂是通过启动子上哪种功能元件以及怎样的方式来激活p21启动子的，我们首先对该基因启动子进行了一系列突变，构建了10个不同的突变体。通过启动子-荧光素酶报告基因系统对这些突变体分析检测，将奥沙利铂的应答元件定位在了p21启动子转录起始点上游-216至-236bp之间的碱基序列。同时我们运用生物信息学数据库分析了转录起始点上游-1至-500bp的序列保守性，发现在这500个碱基的DNA片段上，存在一个此前未被报道过的，脊椎动物中序列高度保守的片段，其所在位置是-219至-237bp，恰好与奥沙利铂应答元件的序列重合。说明这一药物应答保守序列在p21启动子的转录调控方面可能具有关键作用。为了研究转录调控机制，我们用电泳迁移率实验（Electrophoretic Mobility Shift Assay，EMSA）检测了DNA-蛋白质体外结合的情况。针对奥沙利铂应答元件保守序列设计并合成了生物素标记和未标记的寡核苷酸探针，命名F3（wt-213/-242），同时也根据该序列上游相邻位置的DNA序列合成了另外两个寡核苷酸探针F1（-323/-352）和F2（-275/-306），用以和核蛋白提取物孵育反应。这些探针中只有F3能够与细胞核提取物中的蛋白结合，与药物处理与否无关，进一步证实了该区域的重要性。当我们用抗体对蛋白进行鉴定后，确定了该序列是转录因子Sp1/Sp3的结合位点，且Sp1/Sp3所结合的DNA序列恰好形成回文结构。通过对药物处理前后细胞内Sp1/Sp3蛋白量、细胞定位及蛋白磷酸化修饰的检测，发现药物处理的细胞Sp1/Sp3的蛋白量及胞内定位并没有改变，但是Sp1蛋白的磷酸化明显增多，而且Sp1/Sp3与DNA的结合更加紧密。推测奥沙利铂可能通过磷酸化修饰Sp1，进而改变Sp1/Sp3的结合活性而调控p21启动子。对p21全长启动子的分析结果显示，这一新发现的Sp1/Sp3结合位点与p21启动子上6个经典的Sp1/Sp3结合位点不同，它是唯一的具有高度保守性的元件。最后我们对F3在细胞内的生物学作用进行了初步研究。通过F3片段与p21启动子-荧光素酶报告基因（pFL-Luc）共转染SKOV3，F3与启动子上Sp1/Sp3回文序列进行竞争。发现在没有药物处理的情况下，转染F3片段能够激活p21启动子，得到与奥沙利铂处理细胞后类似的结果。通过免疫荧光证实p21启动子活化促进了p21蛋白表达。我们推测，在正常情况下，Sp1/Sp3结合在奥沙利铂应答保守元件上，并且募集其他转录抑制因子/辅因子与之结合，形成抑制转录的蛋白复合物，维持p21在正常细胞内的基础表达水平，维持细胞正常生长繁殖，当细胞受到DNA损伤物质刺激时，Sp1磷酸化，该保守元件上的转录抑制因子/辅因子脱落，原有的抑制功能丧失，使得p21启动子活化，从而促进蛋白表达。因此这段序列在奥沙利铂诱导p21的过程中起到了类似“开关”的作用。综上所述，我们首次报道了p21启动子上存在一个高度保守的、能与Sp1/Sp3结合的抑制性功能元件，是维持p21基础表达水平所必需的，并且在奥沙利铂诱导的启动子去抑制调控中具有重要作用。提示我们运用这一保守元件作为筛选诱导p21表达的药物可能是抗肿瘤药物筛选的新策略；而且在选择临床化疗药物和研发抗p53缺陷型肿瘤的新药方面具有应用前景。
葛雷,曲晓伟,胡建庭,单中杰,韩前河,杨庆祥,翟晓磊,赵阳[10]（2012）在《膀胱移行细胞癌组织中p57kip2 mRNA表达变化》文中研究表明目的观察膀胱移行细胞癌组织中p57kip2基因表达变化。方法采用逆转录聚合酶链反应法（RT-PCR）检测26例膀胱移行细胞癌组织（观察组）和19例癌旁正常组织（对照组）中的p57kip2mRNA。结果观察组p57kip2mRNA阳性表达率为38.45%（10/26）,对照组为100%（19/19）,两组相比,P<0.01。结论膀胱移行细胞癌组织中p57kip2mRNA表达下降。
二、p57~(kip2)在膀胱癌的表达及意义（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、p57~(kip2)在膀胱癌的表达及意义（论文提纲范文）
（1）基于整合组学探讨细胞周期相关基因在高级别浆液性卵巢癌发生及发展中的作用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 中英文缩略词对照 |
| 第1章 前言 |
| 1.1 概述 |
| 1.2 卵巢癌简述 |
| 1.2.1 我国卵巢癌的概况 |
| 1.2.2 卵巢癌治疗的研究现状 |
| 1.3 细胞周期 |
| 1.3.1 细胞周期简述 |
| 1.3.2 细胞周期与肿瘤的关系 |
| 1.3.3 细胞周期研究对肿瘤治疗的意义 |
| 1.4 拷贝数变异(copy number variation,CNV) |
| 1.5 生物信息学 |
| 1.6 本研究的意义 |
| 第2章 材料和方法 |
| 2.1 数据来源 |
| 2.1.1 肿瘤基因组数据库 |
| 2.1.2 细胞周期相关通路及基因的获取 |
| 2.2 数据分析相关工具 |
| 2.2.1 STRING网站 |
| 2.2.2 cBioPortal网站 |
| 2.2.3 KM-PLOT网站 |
| 2.2.4 R语言 |
| 第3章 实验结果 |
| 3.1 细胞周期相关基因的筛选 |
| 3.2 细胞周期相关基因的整合 |
| 3.3 被筛选出的36 个基因的拷贝数与差异表达之间的关系 |
| 3.4 被筛选出的36 个基因与高级别浆液性卵巢癌之间的关系 |
| 3.5 被筛选出的36 个基因表达蛋白之间的关联性分析 |
| 3.6 被筛选出的36 个基因对高级别浆液性卵巢癌患者生存率的影响 |
| 第4章 讨论 |
| 第5章 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 综述 |
| 参考文献 |
（2）miR-501-3p在肾癌中的抑癌作用及其机制研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 中英文对照表 |
| 1 绪论 |
| 1.1 肾癌的流行病学及治疗方法 |
| 1.2 miRNA的生物学特性 |
| 1.3 miRNA在肾癌中的应用 |
| 2 miR-501-3p在肾癌中的表达模式及生物学功能 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 研究思路 |
| 2.3 实验材料与实验方法 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.5 本章讨论 |
| 2.6 本章小结 |
| 3 WTAP作为miR-501-3p在肾癌中的靶基因 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 研究思路 |
| 3.3 实验材料与实验方法 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.5 本章讨论 |
| 3.6 本章小结 |
| 4 WTAP在肾癌中的生物学功能及其作用机制 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 研究思路 |
| 4.3 实验材料与实验方法 |
| 4.4 实验结果 |
| 4.5 本章讨论 |
| 4.6 本章小结 |
| 5 讨论与总结 |
| 参考文献 |
| 综述 肿瘤细胞中microRNA对细胞周期的作用及其在肿瘤中的生物学机制 |
| 参考文献 |
| 作者简介 |
（3）高糖经LncRNA-GAS5影响子宫内膜癌进展的机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、糖尿病合并子宫内膜癌患者的临床病理特点及其与LncRNA GAS5和miR-222-3p的相关性研究 |
| 1.1 对象和方法 |
| 1.1.1 研究对象及分组 |
| 1.1.2 主要仪器及试剂 |
| 1.1.3 采集资料和组织标本 |
| 1.1.4 苏木精-伊红染色(HE染色) |
| 1.1.5 定量PCR检测 Lnc GAS5和miR-222-3p |
| 1.1.6 统计分析 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 预测GAS5 对子宫内膜癌患者的生存影响 |
| 1.2.2 DM组和NDM组子宫内膜癌患者的临床病理参数比较 |
| 1.2.3 DM组和NDM组子宫内膜癌患者组织的形态学特点 |
| 1.2.4 GAS5、miR-222-3p 在DM组和NDM组子宫内膜癌患者组织中的表达检测及其表达水平之间的相关性分析 |
| 1.2.5 GAS5和miR-222-3p的表达水平与临床病理参数的相关性分析 |
| 1.3 讨论 |
| 1.3.1 糖尿病与子宫内膜癌 |
| 1.3.2 LncRNA GAS5/miR-222-3p与糖尿病合并子宫内膜癌的关系 |
| 1.4 小结 |
| 二、高糖浓度下LncRNA GAS5/miR-222-3p在子宫内膜癌细胞中的表达及其对肿瘤细胞生物学行为的影响 |
| 2.1 对象和方法 |
| 2.1.1 研究对象 |
| 2.1.2 主要仪器及试剂 |
| 2.1.3 细胞培养 |
| 2.1.4 定量PCR检测GAS5和miR-222-3p |
| 2.1.5 构建过表达GAS5 质粒 |
| 2.1.6 细胞转染 |
| 2.1.7 CCK-8 检测细胞增殖 |
| 2.1.8 细胞克隆形成实验 |
| 2.1.9 Transwell检测细胞侵袭 |
| 2.1.10 统计学分析 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 子宫内膜癌细胞系中GAS5和miR-222-3p的表达水平 |
| 2.2.2 不同糖浓度作用子宫内膜癌细胞系后GAS5 的表达水平 |
| 2.2.3 不同糖浓度作用子宫内膜癌细胞系后miR-222-3p的表达水平 |
| 2.2.4 子宫内膜癌细胞系中过表达GAS5 对细胞生物学行为的影响 |
| 2.2.5 子宫内膜癌细胞系中miR-222-3p抑制剂对细胞生物学行为的影响 |
| 2.3 讨论 |
| 2.3.1 高糖对子宫内膜癌细胞LncRNA GAS5/miR-222-3p表达的影响 |
| 2.3.2 LncRNA GAS5和miR-222-3p对子宫内膜癌细胞生物学行为的影响 |
| 2.4 小结 |
| 三、高糖经LncRNA GAS5/miR-222-3p通过调控P27 影响子宫内膜癌细胞的机制研究 |
| 3.1 对象和方法 |
| 3.1.1 研究对象 |
| 3.1.2 主要仪器及试剂 |
| 3.1.3 细胞培养 |
| 3.1.4 定量PCR检测GAS5/miR-222-3p/P27 |
| 3.1.5 细胞转染 |
| 3.1.6 Western Blotting检测P27 蛋白的表达 |
| 3.1.7 双荧光素酶报告基因实验验证LncRNA GAS5与miR-222-3p的关系和miR-222-3p与P27(CDKN1B)的关系 |
| 3.1.8 统计学分析 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 在子宫内膜癌细胞系中P27 的表达水平以及在不同糖浓度作用下P27的表达水平 |
| 3.2.2 子宫内膜癌细胞系中GAS5 可作为miR-222-3p的直接靶标 |
| 3.2.3 子宫内膜癌细胞系中miR-222-3p调控P27 的转录活性 |
| 3.2.4 子宫内膜癌细胞系中GAS5与miR-222-3p、P27 的关系 |
| 3.3 讨论 |
| 3.3.1 LncRNA GAS5/miR-222-3p/P27 之间的关系 |
| 3.3.2 LncRNA GAS5 通过作用于miR-222-3p来调控P27 的机制 |
| 3.4 小结 |
| 全文结论 |
| 论文创新点 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研情况说明 |
| 综述 长链非编码RNA GAS5在疾病中作用的研究进展 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（4）KIF3B在上皮性卵巢癌中的表达及对卵巢癌细胞生长的调控作用及其机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第一部分 KIF3B在卵巢癌中的表达及临床意义 |
| 引言 |
| 材料和方法 |
| 1. 研究资料及仪器设备 |
| 2. 实验流程与方法 |
| 结果 |
| 1. KIF3B的序列及结构 |
| 2. KIF3B在人类正常卵巢组织和卵巢癌组织中的蛋白表达 |
| 3. KIF3B在上皮性卵巢癌病理切片中的表达与临床意义 |
| 4 KIF3B对上皮性卵巢癌患者生存的影响 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 KIF3B促进细胞周期由G0/G1期向S期转换,并促进卵巢癌细胞的生长 |
| 引言 |
| 材料和方法 |
| 1. 实验材料、仪器设备 |
| 3. 实验方法 |
| 结果 |
| 1. 各株卵巢癌细胞系中KIF3B表达水平 |
| 2. 建立敲减KIF3B的卵巢癌细胞系 |
| 3. 敲减KIF3B对卵巢癌细胞生长的影响 |
| 4. 建立KIF3B过表达的卵巢癌细胞系 |
| 5. 过表达KIF3B对卵巢癌细胞生长的影响 |
| 6. 敲减KIF3B对卵巢癌移植瘤生长的影响 |
| 7. 过表达KIF3B对卵巢癌移植瘤生长的影响 |
| 8. 敲减KIF3B对卵巢癌细胞周期的影响 |
| 9. 过表达KIF3B对卵巢癌细胞周期的影响 |
| 10. 敲减KIF3B抑制Cyclin A和CDK2的表达 |
| 11. 过表达KIF3B上调CyclinA和CDK2的表达 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 KIF3B通过PI3K/AKT通路调控周期相关基因Cyclin A和CDK2的表达 |
| 引言 |
| 材料和方法 |
| 1. 实验材料、仪器设备 |
| 2. 实验方法 |
| 结果 |
| 1. 敲减KIF3B对HO8910细胞基因表达谱的影响 |
| 2. 差异基因的功能富集 |
| 3. 敲减KIF3B对FoxO通路的影响 |
| 4. 敲减KIF3B对PI3K/AKT通路的影响 |
| 5. 过表达KIF3B对PI3K/AKT通路的影响 |
| 6. KIF3B通过PI3K依赖性机制激活AKT通路 |
| 7. KIF3B通过PI3K依赖性机制上调Cyclin A和CDK2表达 |
| 8. KIF3B通过PI3K依赖性机制促进卵巢癌细胞生长 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 综述 Kinesin 蛋白家族在肿瘤中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 英文缩写词表 |
| 攻读学位期间本人公开发表的论文 |
| 参与的研究项目 |
| 致谢 |
（5）circINTS4/miR-146b/CARMA3轴调控膀胱癌肿瘤发生的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文略缩语 |
| 第一部分 :miR-146b/CARMA3 轴对膀胱癌细胞生物学功能的影响 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 临床资料及实验材料 |
| 2.1.1 临床资料来源 |
| 2.2 实验试剂所需要主要仪器,药品,试剂 |
| 2.2.1 实验用细胞系 |
| 2.2.2 实验仪器 |
| 2.2.3 实验试剂 |
| 2.3 试验方法 |
| 2.3.1 细胞培养 |
| 2.3.2 生物信息学预测 |
| 2.3.3 脂质体转染 |
| 2.3.4 实时定量PCR |
| 2.3.5 免疫印迹(Western Blot) |
| 2.3.6 双萤光素报告基因检测 |
| 2.3.7 RTCA实验 |
| 2.3.8 侵袭转移实验 |
| 2.3.9 流式检测细胞周期 |
| 2.3.10 流式检测细胞凋亡 |
| 2.3.11 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 CARMA3 在膀胱癌中高表达 |
| 3.2 miR-146b在膀胱癌中低表达 |
| 3.3 miR-146b介导CARMA3 的表达 |
| 3.4 miR-146b影响膀胱癌细胞生物学功能 |
| 3.5 miR-146b通过调控CARMA3 进而影响膀胱癌细胞生物学功能 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第二部分 :circINTS4 通过调控miR-146b/CARMA3 轴影响膀胱癌生物学功能 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 临床资料及实验材料 |
| 2.1.1 临床资料来源 |
| 2.2 实验试剂所需要主要仪器,药品,试剂 |
| 2.2.1 实验用细胞系 |
| 2.2.2 实验仪器 |
| 2.2.3 实验试剂 |
| 2.3 试验方法 |
| 2.3.1 细胞培养 |
| 2.3.2 生物信息学预测 |
| 2.3.3 脂质体转染 |
| 2.3.4 实时定量PCR |
| 2.3.5 免疫印迹(Western Blot) |
| 2.3.6 双萤光素报告基因检测 |
| 2.3.7 CircRNA pull-down实验 |
| 2.3.8 FISH实验(荧光原位杂交) |
| 2.3.9 RIP实验 |
| 2.3.10 RTCA实验 |
| 2.3.11 侵袭转移实验 |
| 2.3.12 流式检测细胞周期 |
| 2.3.13 流式检测细胞凋亡 |
| 2.3.14 免疫组织化学 |
| 2.3.15 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 circINTS4 在膀胱癌中内源性吸附miR-146b |
| 3.2 .circINTS4 在膀胱癌中高表达 |
| 3.3 .circINTS4 影响膀胱癌细胞生物学功能 |
| 3.4 .circINTS4 通过调控miR-146b/CARMA3 轴而影响膀胱癌细胞生物学功能 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第三部分 :circINTS4 在膀胱癌中可通过CARMA3 介导的方式激活NF-kB信号通路及抑制P38 MAPK信号通路 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验试剂所需要主要仪器,药品,试剂 |
| 2.1.1 实验用细胞系 |
| 2.1.2 实验仪器 |
| 2.1.3 实验试剂 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.2.1 细胞培养 |
| 2.2.2 脂质体转染 |
| 2.2.3 免疫印迹(Western Blot) |
| 2.2.4 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 .circINTS4 在膀胱癌中可通过CARMA3 介导的方式激活NF-kB信号通路 |
| 3.2 .circINTS4 在膀胱癌中可通过CARMA3 介导的方式抑制P38 MAPK信号通路 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 本论文创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（7）TBX3蛋白在甲状腺乳头状癌发生发展中的功能及机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、TBX3在PTC临床标本中的表达 |
| 1.1 对象和方法 |
| 1.1.1 甲状腺乳头状癌病理切片、RNA和蛋白 |
| 1.1.2 乳头状甲状腺癌细胞系 |
| 1.1.3 主要试剂 |
| 1.1.4 主要溶液、缓冲液和培养基 |
| 1.1.5 主要仪器和设备 |
| 1.1.6 实验方法及流程 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 免疫组织化学染色检测TBX3的表达 |
| 1.2.2 PTC组织中mRNA和蛋白水平TBX3的表达情况 |
| 1.2.3 PTC细胞系中检测TBX3的表达情况 |
| 1.2.4 TBX3表达与临床病理特征的相关性分析 |
| 1.3 讨论 |
| 1.4 小结 |
| 二、TBX3蛋白促进PTC细胞增殖 |
| 2.1 对象和方法 |
| 2.1.1 细胞、菌种和质粒 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要溶液、缓冲液与培养基 |
| 2.1.4 主要仪器、设备 |
| 2.1.5 实验方法及流程 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 应用siRNA瞬时敲低TBX3检测细胞增殖变化 |
| 2.2.2 应用shRNA稳定敲低TBX3检测细胞增殖变化 |
| 2.2.3 慢病毒稳定过表达TBX3检测细胞增殖变化 |
| 2.2.4 应用RNA-seq寻找下游靶基因 |
| 2.2.5 研究p57KIP2水平变化对于TBX3促PTC发生功能的影响 |
| 2.2.6 TBX3促进PTC发生发展的在体作用 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 三、TBX3蛋白调控p57KIP2表达的具体分子机制研究 |
| 3.1 对象和方法 |
| 3.1.1 细胞、菌种和质粒 |
| 3.1.2 主要试剂 |
| 3.1.3 主要溶液、缓冲液和培养基 |
| 3.1.4 主要仪器和设备 |
| 3.1.5 实验方法及流程 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 虫荧光素酶报告质粒的构建 |
| 3.2.2 虫荧光素酶实验检测TBX3蛋白调控CDKN1C的转录活性 |
| 3.2.3 内源性TBX3蛋白与PRC2复合物及HDAC1/2的胞内结合实验 |
| 3.2.4 ChIP实验检测TBX3与CDKN1C启动子结合能力 |
| 3.2.5 DNApulldown实验证明TBX3与p57KIP2启动子处的结合程度 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 全文结论 |
| 论文创新点 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研情况说明 |
| 综述 转录因子TBX3的结构及功能研究 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（8）子宫内膜间质肉瘤P57KIP2的表达及临床意义研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第1章 材料与方法 |
| 1.1 研究对象及分组 |
| 1.1.1 研究对象 |
| 1.1.2 实验分组 |
| 1.2 实验设备及制剂 |
| 1.2.1 实验设备 |
| 1.2.2 主要试剂 |
| 1.3 实验原理及方法 |
| 1.3.1 实验原理 |
| 1.3.2 实验方法 |
| 1.4 结果判定 |
| 1.5 统计学处理 |
| 第2章 结果 |
| 2.1 P57~(KIP2)在子宫肌瘤及子宫内膜间质肉瘤的表达 |
| 2.2 P57~(KIP2)的表达与子宫内膜间质肉瘤预后之间的关系 |
| 第3章 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间研究成果 |
（9）化疗药物在p53缺陷型肿瘤细胞中对p21启动子激活机制的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 综述 |
| 1. 导言 |
| 2. 细胞周期调控因子 |
| 2.1 正调控因子（positive regulators） |
| 2.2 负调控因子（negative regulator） |
| 3. p~(21wif1/cip1)与肿瘤 |
| 3.1 p21 的肿瘤抑制功能概述 |
| 3.2 p21 的调控 |
| 3.3 转录因子 Sp1/Sp3 概述 |
| 3.4 研究内容及意义 |
| 第二章 实验结果 |
| 1. 化疗药物的疗效与 p21 表达水平呈正相关 |
| 1.1 细胞转染条件确定 |
| 1.2 奥沙利铂诱导 p21 启动子活化 |
| 1.3 奥沙利铂诱导 p21 mRNA 增加 |
| 1.4 原位免疫荧光鉴定 p21 在细胞内表达量 |
| 1.5 奥沙利铂诱导 p21 蛋白表达增加 |
| 1.6 细胞周期分析结果 |
| 1.7 奥沙利铂对裸鼠异种移植肿瘤的抑制效果 |
| 2. 奥沙利铂对 p21 启动子转录调控的研究 |
| 2.1 p21 启动子上的奥沙利铂应答元件 |
| 2.2 奥沙利铂应答元件位置的独特性 |
| 2.3 启动子上-1 至-500bp 的生物信息学分析 |
| 3. Sp1/Sp3 是与奥沙利铂应答元件结合的主要蛋白因子 |
| 3.1 电泳迁移率(EMSA)实验条件确定 |
| 3.2 蛋白浓度标准曲线制作 |
| 3.3 细胞核提取物特异性的与 F3 结合 |
| 3.4 转录因子 Sp1/Sp3 特异性的结合在 F3 上 |
| 3.5 奥沙利铂诱导 Sp1 磷酸化 |
| 4. Sp1/Sp3 与 DNA 结合亲和力及结合位点分析 |
| 4.1 奥沙利铂增加 Sp1/Sp3 蛋白与药物应答元件(F3)的亲和力 |
| 4.2 F3 片段上 Sp1/Sp3 蛋白结合位点的重要性 |
| 5. F3(wt -213 /-242)在细胞内的生物学作用初探 |
| 5.1 片段 F3 能够诱导激活 p21 启动子 |
| 5.2 双链 DNA Sp1 及突变片段 mu4 均不能活化 p21 启动子 |
| 5.3 片段 F3 能诱导细胞内源性的 p21 表达 |
| 5.4 p53 与奥沙利铂应答元件协同作用诱导 p21 |
| 第三章 实验仪器和方法 |
| 1. PEI 介导的真核细胞转染 |
| 1.1 缓冲溶液及试剂 |
| 1.2 质粒 DNA 与 PEI 质量比的确定 |
| 1.3 pFL-luc 和 pCMV- -gal 共转染 SKOV3 |
| 1.4 定点突变构建 p21 启动子-报告基因突变体及重组质粒转染 |
| 1.5 pFL-luc 或 pFL- 9 与 pCMV-p53 共转染 SKOV3 |
| 1.6 质粒 pFL-luc 和双链寡核苷酸 DNA 共转染 SKOV3 细胞 |
| 1.7 生物素标记探针(biotin-labeled probe)转染 SKOV3 细胞 |
| 2. 免疫印迹实验(western blot) |
| 2.1 缓冲液、试剂和仪器 |
| 2.2 细胞裂解液的获得 |
| 2.3 配制 SDS-PAGE 蛋白胶及蛋白电泳 |
| 2.4 电泳转膜及抗体杂交步骤 |
| 3. 半定量 RT-PCR(reverse transcription- PCR) |
| 3.1 细胞总 RNA 提取 |
| 3.2 反转录及 PCR 扩增 |
| 4. 流式细胞术（FACS） |
| 4.1 溶液和仪器 |
| 4.2 实验步骤 |
| 5. 原位免疫荧光实验（immunofluorescence studies） |
| 6. 奥沙利铂对 SKOV3 异种移植肿瘤的抑制 |
| 7. 电泳迁移率实验(electrophoretic mobility shift assay, EMSA) |
| 7.1 DNA 探针合成及制备 |
| 7.2 细胞核提取物制备及浓度测定 |
| 7.3 电泳迁移率实验条件确定 |
| 8. 统计分析 |
| 9. 序列保守性的生物信息学分析 |
| 第四章 讨论和展望 |
| 参考文献 |
| 符号与标记（附录 1） |
| 致谢 |
| 攻读博士学位期间发表或待发表的学术论文及专利 |
（10）膀胱移行细胞癌组织中p57kip2 mRNA表达变化（论文提纲范文）
| 1 资料与方法 |
| 1.1 临床资料 |
| 1.2 p57kip2 mRNA检测方法 |
| 1.3 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
四、p57~(kip2)在膀胱癌的表达及意义（论文参考文献）
- [1]基于整合组学探讨细胞周期相关基因在高级别浆液性卵巢癌发生及发展中的作用[D]. 周潇妮. 南昌大学, 2020(08)
- [2]miR-501-3p在肾癌中的抑癌作用及其机制研究[D]. 何柳佳. 浙江大学, 2020(01)
- [3]高糖经LncRNA-GAS5影响子宫内膜癌进展的机制研究[D]. 李珍瑾. 天津医科大学, 2019(02)
- [4]KIF3B在上皮性卵巢癌中的表达及对卵巢癌细胞生长的调控作用及其机制研究[D]. 张跃明. 苏州大学, 2019
- [5]circINTS4/miR-146b/CARMA3轴调控膀胱癌肿瘤发生的机制研究[D]. 张效通. 中国医科大学, 2019(01)
- [6]miR-222对膀胱癌增殖行为的影响及其机制研究[J]. 李小舟,熊羊,张向阳,黄芳. 国际泌尿系统杂志, 2018(05)
- [7]TBX3蛋白在甲状腺乳头状癌发生发展中的功能及机制研究[D]. 李晓萌. 天津医科大学, 2018(01)
- [8]子宫内膜间质肉瘤P57KIP2的表达及临床意义研究[D]. 魏鑫. 青岛大学, 2013(05)
- [9]化疗药物在p53缺陷型肿瘤细胞中对p21启动子激活机制的研究[D]. 徐维果. 上海交通大学, 2013(07)
- [10]膀胱移行细胞癌组织中p57kip2 mRNA表达变化[J]. 葛雷,曲晓伟,胡建庭,单中杰,韩前河,杨庆祥,翟晓磊,赵阳. 山东医药, 2012(38)