一、体外受精-胚胎移植技术中精卵培养成功280枚的体会（论文文献综述）
张小余[1]（2021）在《生育利益的私法实践样态与保护》文中认为生育利益不仅影响个人的生活、家庭的稳定,同时也影响国家的建设、社会的秩序,因此,为防止他人对生育利益的不当干预,应以法律的手段予以保障和救济。从我国已有法律体系来看,对生育利益的私法保护明显弱于公法保护,不仅规范的数量较少,规定的内容也较为概括。而私法领域的生育利益案件涉及领域较广、发生数量较多、案件情节较复杂,对生育利益私法保护的疏漏,不仅降低了司法审判效率,也无法全面保护生育主体受损的生育利益。由此,从私法层面完善对生育利益的规制十分必要。生育利益的私法完善方向,应立足我国司法实践现状予以明确。通过分析个人与个人之间的生育利益案件、个人与组织之间的生育利益案件,在参考国际文件和其他国家生育利益私法保护方式以及我国生育利益私法保护观念的基础上,针对司法实践中人民法院审理生育利益案件所反映的裁判问题,可更好地明确我国生育利益私法保护的路径选择。加强对生育利益的私法保护,既要由法律肯定生育权的民法地位,细化生育权的权利内涵,还应综合司法解释、部门规章等其他规范,对个别类型化生育利益案件的特殊性予以特殊规制,进行及时、专业的调整。从而实现理论与实际的结合,以法律规范的补足促进实践问题的解决。完善生育利益私法保护规范,不仅有益于丰富生育利益私法保护体系,实现不同规范的协调统一,而且也能为人民法院的司法审判活动提供更为充分的裁判依据,增强司法裁判效能,更好地保障生育主体的生育利益。
杨海燕[2]（2020）在《低水平血清泌乳素与PCOS患者代谢紊乱和IVF-ET结局的关系及相关机制研究》文中指出第一章低水平血清泌乳素与多囊卵巢综合征不孕患者代谢紊乱的相关性研究研究背景:泌乳素（prolactin,PRL）除了在调节乳房发育和泌乳方面起良好作用外,已有其他300多种独立功能得到证实。研究表明PRL在机体代谢中起重要的调控作用,但是处于正常生理范围内和超出正常生理范围时血清PRL和代谢风险的关系是不一样的。超出生理范围的高PRL血症患者的PRL水平越高,越容易出现胰岛素抵抗、肥胖、动脉粥样硬化及骨质疏松等代谢问题;但是当血清PRL处于正常生理范围之内时,它和代谢风险的关系则会变得相反,PRL水平越低,发展成代谢综合征和2型糖尿病等不良代谢结局的可能性反而越大。也就是说血清PRL水平过高或过低都会引起代谢紊乱,但是处于正常生理范围内的低水平血清PRL和代谢紊乱的关系往往容易被忽视。多囊卵巢综合征（polycystic ovary syndrome,PCOS）是育龄期妇女最常见的内分泌代谢紊乱性疾病,与胰岛素抵抗、糖耐量异常、高血脂、高血压和心血管疾病等的发生密切相关,发病机制至今还不清楚。由于血清PRL在机体代谢中起重要的调控作用,PRL和PCOS患者代谢紊乱的相关性值得进一步研究和探讨。PCOS患者常常伴发高PRL血症,高PRL血症与PCOS代谢紊乱的相关研究已经很多,在临床上也已经备受关注,但是血清PRL处于正常生理范围内的那部分PCOS患者的PRL水平与代谢的关系却从未被关注。当处于正常生理范围之内时,PCOS患者的血清PRL水平与正常人群相比究竟如何及其与代谢紊乱究竟存在怎样的关系不得而知,至今也未见报道。本研究首次对这些问题进行探讨,以血清PRL水平处于正常生理范围内的大样本的PCOS不孕患者作为研究对象来分析这些患者的血清PRL水平和正常人群的差异及其与代谢紊乱的相关性,从而为今后研究PRL的代谢调控机制和PCOS的发病机制提供理论依据。研究目的:回顾性分析PCOS不孕患者的血清PRL水平及其与代谢紊乱的相关性。研究方法:以2007年1月至2018年8月在温州医科大学附属第一医院生殖医学中心第一次行体外受精-胚胎移植（in vitro fertilization and embryo transfer,IVF-ET）治疗并且血清PRL水平在正常生理范围内的2052例PCOS不孕患者作为研究对象,以同期9696例血清PRL水平也在正常生理范围内的输卵管性不孕患者作为对照,回顾性分析这11748例不孕患者的血清PRL、血压、体重指数（body mass index,BMI）、基础内分泌激素、空腹血脂、空腹血糖（fasting plasma glucose,FPG）、肝功能及甲状腺激素等指标的水平;再对其中792例有完整腰围、臀围、空腹胰岛素（fasting insulin,FINS）资料的PCOS不孕患者的腰围、臀围、FINS、稳态模式评估法测定胰岛素抵抗指数（homeostasis model assessment of insulin resistance,HOMA-IR）及HOMA-β细胞功能指数（HOMA-β）等指标进行回顾性分析。研究结果:1、对2052例PCOS不孕患者的回顾性分析发现,控制BMI的影响后,不同年龄段的PCOS不孕患者的血清PRL水平均明显低于对照组（P<0.05）。再以血清PRL四分位数为标准分组后比较各项指标发现,PCOS不孕患者的血清PRL水平越低,促黄体生成素（luteinizing hormone,LH）、LH/卵泡刺激素（follicle stimulating hormone,FSH）、血清总胆固醇（total cholesterol,TC）、甘油三酯（triglyceride,TG）、低密度脂蛋白胆固醇（low density lipoprotein cholesterol,LDL-C）、天冬氨酸氨基转移酶（aspartate transaminase,AST）、丙氨酸氨基转移酶（alanine ainotransferase,ALT）、γ-谷氨酰转移酶（glutamyltransferase,γ-GGT）、血清游离三碘甲腺原氨酸（free triiodothyronine,FT3）及 FT3/血清游离甲状腺素（free thyroxine,FT4）越高,FPG、血清促甲状腺激素（thyroid stimulating hormone,TSH）及FT4越低（P<0.05）。纠正年龄和BMI影响后的多元线性回归分析发现血清PRL与FPG、TSH及FT4正相关,与LH及LH/FSH负相关（P<0.05）。2、对792例PCOS不孕患者的回顾性分析则发现,血清PRL水平越低,PCOS不孕患者的腰围、臀围、FINS、HOMA-IR及HOMA-β则越高（P<0.05）。纠正年龄和BMI影响后的多元线性回归分析发现血清PRL与FINS、HOMA-IR及HOMA-β 负相关（P<0.05）。结论:当处于正常生理范围之内时,PCOS不孕患者的血清PRL水平要明显低于正常人群。而低水平血清PRL可能是增加PCOS不孕患者代谢风险的一个重要因素,也是预测胰岛素抵抗和β细胞功能障碍的良好指标。第二章 低水平血清泌乳素与多囊卵巢综合征不孕患者体外受精-胚胎移植治疗结局的相关性研究研究背景:内分泌及代谢紊乱与流产、死胎等不良孕产史密切相关。研究表明糖、脂等代谢的异常不仅能改变血清生化组分,还会在卵泡液这一微环境层面产生负面影响,最终降低临床妊娠率。泌乳素（PRL）在机体代谢调控中起重要作用,超出正常生理范围的高PRL血症以及正常生理范围内低水平血清PRL都会对代谢产生不良影响,那么过高或过低的血清PRL是否也可能因此对妊娠结局产生不良影响?是否也可能因此影响体外受精-胚胎移植（IVF-ET）的治疗结局?到目前为止这些问题从未被关注,也未见相关研究报道。高PRL血症可通过下丘脑-垂体-卵巢轴影响卵泡发育和黄体功能从而对妊娠结局产生不良影响,已在临床上受到足够的重视和有效的治疗,而正常生理范围内低水平血清PRL与妊娠及IVF-ET治疗结局的相关性往往容易被忽视,更值得关注和进一步的研究探讨。我们的前期临床研究已经证实多囊卵巢综合征（PCOS）不孕患者的血清PRL水平低于正常人群,并与代谢紊乱密切相关。本研究首次对正常生理范围内低水平血清PRL和PCOS不孕患者及输卵管性不孕患者这两类比较有代表性的不孕人群的IVF-ET治疗结局的可能关系做初步探讨,希望为今后探索有效的改善妊娠结局的治疗方案提供理论依据。研究目的:回顾性分析正常生理范围内低水平血清PRL对PCOS不孕患者及输卵管性不孕患者IVF-ET治疗结局的影响。研究方法:以2007年1月至2018年8月在温州医科大学附属第一医院生殖医学中心第一次行IVF-ET治疗并均行新鲜胚胎移植、血清PRL水平均在正常生理范围内的1414例PCOS不孕患者和7430例输卵管性不孕患者作为研究对象,回顾性分析血清PRL水平与这些不孕患者IVF-ET治疗结局的关系。研究结果:1、以血清PRL中位数为标准对1414例PCOS不孕患者分组后比较各项指标发现,血清PRL水平越低的患者血清LH、促性腺激素（gonadotropin,Gn）使用总量和使用天数越大,人绒毛膜促性腺激素（human chorionic gonadotropin,hCG）注射日血E2水平越低,差异均有显着性（P<0.05）。而获卵数、卵子成熟率、临床妊娠率、胚胎种植率及活产率随着血清PRL水平的降低呈现出下降的趋势,流产率则呈现出升高的趋势,但是差异均没有达到显着性。当以活产率作为最终的观察指标,在纠正年龄和BMI等多个影响因素后发现PCOS不孕患者的活产率与T负相关,与优质胚胎数正相关,获卵数在7-15个之间的不孕患者活产率最为理想（P<0.05）。而血清PRL水平虽然与活产率呈现出负相关的趋势,但是差异没有达到显着性。2、以血清PRL中位数为标准对7430例输卵管性不孕患者分组后比较各项指标发现,血清PRL水平越低的患者血清睾酮（testosterone,T）、窦卵泡计数（antral follicle count,AFC）、hCG 注射日血雌二醇（estradiol,E2）、获卵数、卵子成熟率、优质胚胎数、临床妊娠率、胚胎种植率及活产率越低,血清LH、Gn使用总量及流产率则越高,差异均有显着性（P<0.05）。当以活产率作为最终的观察指标,在纠正年龄和BMI等多个影响因素后发现,输卵管性不孕患者的活产率与年龄及T负相关,与AFC及优质胚胎数正相关（P<0.05）。而血清PRL水平虽然与活产率呈现出负相关的趋势,但是差异没有达到显着性。结论:正常生理范围内低水平血清PRL在一定程度上影响了 PCOS不孕患者和输卵管性不孕患者的超促排卵反应性和实验室结果,并和活产率呈现出负相关趋势,但是还没有足够的证据表明低血清PRL是活产率的独立影响因素。低血清PRL与IVF-ET治疗结局的关系还需要进一步研究证实。第三章泌乳素及其受体介导JAK2/STAT5通路对脂肪代谢的影响及机制研究研究背景:泌乳素（PRL）通过和受体结合启动相应的细胞内信号传导通路对目标基因产生作用,从而实现它众多的生物学功能。研究表明PRL与代谢密切相关,但是由于PRL受体的的多样性以及不同类型的受体具有不同的调控机制等原因导致PRL和受体结合后启动的信号通路及调控方式极其复杂。PRL及其受体具体通过什么途径来调控代谢到目前为止都还不清楚。酪氨酸激酶（Janus kinase,JAK）/转录激活因子（signal transducer and activators of transcription,STAT）通路是PRL第一个确定的信号转导通路,也是其他众多细胞因子和生长因子信号传导的共同途径,广泛参与细胞增殖、分化及凋亡等重要生物学过程,并在能量代谢中起重要调控作用。PRL的代谢调控机制至今还不清楚,JAK/STAT通路又和代谢密切相关,所以PRL及其受体介导的JAK/STAT信号通路对代谢的调控作用成为我们关注的重点。既往研究发现PRL能够激活JAK2/STAT5通路调节乳腺上皮细胞乳糖、乳脂和乳蛋白的合成及分泌,但是相关研究比较零星,并主要集中在乳腺发育和乳腺癌研究方面。此外,关于PRL调控乳脂等相关基因转录作用的研究一直集中在乳腺上皮细胞上,对脂肪细胞代谢的研究却几乎未被关注。脂肪组织在机体内分泌和代谢中起重要作用,选择脂肪细胞进行PRL及其受体介导JAK2/STAT5信号通路调节代谢相关机制的研究可能更有意义。另外,在PRL/PRLR介导的JAK2/STAT5信号传导通路中会产生一种剂-效关系特性,而在不同的物种、组织和细胞中PRL通过JAK2/STAT5通路产生正常效应所需要的浓度都不一样,但是具体什么物种、什么组织和什么细胞产生正常效应需要多少PRL浓度都还不清楚,仅有的几项零星的研究也均在摸索过程中,值得进一步研究探讨。此外,JAK/STAT信号通路的异常激活在某些疾病的发生过程中可能存在关键的调控作用,比如肿瘤和白血病。过高或过低的血清PRL都会引起PCOS患者代谢紊乱,它们是否有可能通过JAK2/STAT5通路的异常激活在PCOS的发生发展中起作用也还不清楚,相关研究未见报道。胰岛素抵抗（insulin resistance,IR）是PCOS代谢异常的基本特征和病理生理过程的中心环节,本研究利用成熟脂肪细胞建立IR模型,首次尝试用不同浓度RPL及PRLR过表达处理IR模型细胞来观察JAK2/STAT5信号通路的变化以及对脂代谢的影响,仅希望能对RPL与脂代谢的关系及相关机制做一个简单粗略的探讨,为将来更好的探索PRL的代谢调控机制和PCOS的发病机制以及代谢相关性疾病的有效临床治疗方案指明一个研究的方向。研究目的:探讨PRL及其受体介导JAK2/STAT5通路对脂肪代谢的影响及作用机制。研究方法:通过油酸诱导分化,将SW872前脂肪细胞诱导成成熟脂肪细胞,并利用油红0进行鉴定,然后通过油酸孵育建立IR模型。分别用高、中、低浓度的PRL干预IR模型细胞,Western blot检测干预24h和48h后PRLR、JAK2、p-JAK2、STAT5及p-STAT5蛋白的表达情况,甘油三酯（troglyceride,TG）试剂盒检测细胞内TG的含量。再构建PRLR过表达载体,将载体及空载转染至成熟脂肪细胞中,Western blot验证转染效率。随后油酸孵育 24 小时进入 IR 状态。Western blot 检测 PRLR、JAK2、p-JAK2、STAT5 及p-STAT5蛋白的表达,TG试剂盒检测细胞内TG的含量。研究结果:油红0染色结果显示高浓度和中浓度PRL干预组的脂质含量明显高于IR模型组（P<0.05）。PRL干预24h和48h后细胞中的TG含量与模型组相比显着增加,且随着PRL浓度的增加,TG含量也随之增加（P<0.05）。Western blot结果显示,在PRL干预24h和48h时,与对照组相比,IR模型组中PRLR、p-JAK2和p-STAT5表达量显着降低;与模型组相比,高浓度PRL干预组中PRLR、p-JAK2和p-STAT5表达量显着增加（P<0.05）。过表达PRLR显着增加IR模型中TG含量（P<0.05）。Western blot结果显示,与对照组相比,IR模型组中PRLR、JAK2、p-JAK2、STAT5和p-STAT5表达水平显着降低;与模型组相比,PRLR过表达组中PRLR、JAK2、p-JAK2、STAT5和p-STAT5表达水平显着增加（P<0.05）。研究结论:PRL及其受体与脂肪代谢有关。JAK2/STAT5信号通路在脂肪代谢中起重要的调控作用。PRL干预及PRLR过表达可以通过JAK2/STAT5通路的异常激活增加脂肪细胞中TG的沉积,影响脂肪代谢。但是PRL在脂肪细胞中产生正常效应所需要的浓度以及PRL及其受体介导的JAK2/STAT5通路的异常激活与PCOS发生发展的相关性都还需要更深入的研究来探讨。
刘洁[3]（2020）在《促黄体素与雌激素在小鼠和山羊卵丘扩展中的作用及其机制研究》文中研究表明哺乳动物的卵母细胞在个体出生前后,就进入第一次减数分裂,并被阻滞在第一次减数分裂前期的双线期,这种阻滞可能长达数月、数年甚至数十年之久,直到在排卵前促黄体素（LH）峰的刺激下,成熟卵泡中的卵母细胞才会恢复并完成减数分裂,成为具备受精和后续发育能力的成熟卵母细胞。在雌性哺乳动物的每个发情周期中,雌激素分泌波总是伴随着LH峰的出现,并在雌激素分泌波和LH峰出现之后发生成熟卵母细胞的排卵。而关于雌激素分泌波和LH峰调控卵母细胞减数分裂的具体机制及其二者之间的调控关系尚不十分明确。雌激素通过激活其核受体（ERs）和其膜受体（GPR30）,进而通过受体发挥不同的生物学效应。不同的雌激素受体与雌激素的亲和力不同,ERs与雌激素的亲和力较高,较低浓度雌激素即可激活ERs;而GPR30与雌激素亲和力较低,激活GPR30需要更高的雌激素浓度。本论文作者所在研究团队的前期研究显示,低浓度雌激素能够通过激活ERs信号通路增强CNP维持卵母细胞减数分裂的作用,而高浓度雌激素却能通过激活GPR30信号通路促进减数分裂恢复。因此,本研究主要聚焦于排卵前雌激素分泌波和LH峰调控卵丘-卵母细胞复合体卵丘细胞扩展的具体机制及雌激素分泌波与LH峰之间的调控关系。主要研究内容及其取得的研究结果如下:（1）LH信号提高了卵丘-卵母细胞复合体中的GPR30蛋白水平以小鼠和山羊卵丘-卵母细胞复合体（COCs）为研究对象,利用RT-q PCR、Western blot和免疫荧光技术检测了小鼠和山羊COCs在接收到LH/EGF（表皮生长因子）或EGF-like factors（类表皮样生长因子）信号刺激后GPR30的m RNA和蛋白水平变化,利用EGF受体（EGFR）抑制剂验证了LH/EGF（或EGF-like factors）调控GPR30表达的信号通路,并分别分析了卵丘细胞和卵母细胞中GPR30蛋白水平的变化情况。结果显示,LH和EGF或EGF-like factors长因子通过激活卵丘细胞上的EGFR信号通路,通过非基因组调控途径上调了卵丘细胞中的GPR30蛋白水平,但没有引起卵母细胞中GPR30蛋白水平的变化。（2）LH信号通过激活EGFR信号通路抑制颗粒细胞中GPR30蛋白的降解以小鼠卵泡颗粒细胞为研究对象,利用RT-q PCR、Western blot、溶酶体探针和免疫荧光技术检测了EGFR信号通路激活后GPR30蛋白半衰期的变化,利用蛋白酶体活性抑制剂MG132和溶酶体活性抑制剂bafilomycin A1探索了颗粒细胞中GPR30蛋白的降解途径,并对颗粒细胞内溶酶体进行细胞定位并检测其活力。结果显示,在颗粒细胞内GPR30蛋白主要通过自噬-溶酶体途径降解,在EGFR信号通路激活时通过非基因组调控途径降低了溶酶体的数量与活性,使GPR30降解受阻、半衰期延长,最终导致GPR30蛋白在细胞中累积。（3）雌激素通过激活GPR30信号通路提高卵丘细胞中的EGFR蛋白水平利用Western blot技术分别检测了体内成熟的小鼠COCs和山羊卵泡内的COCs中EGFR的蛋白水平,并将其变化趋势与体外培养的COCs进行比较;使用17β-雌二醇（17β-E2）、GPR30特异性激活剂G1、GPR30特异性抑制剂G15和雌激素核受体抑制剂ICI 182780处理体外培养的COCs,检测各处理组COCs中EGFR蛋白水平变化规律。结果发现,小鼠体内发育的COCs和体外培养山羊卵泡中的COCs,在成熟发育过程中EGFR蛋白水平升高,并维持在较高水平的激活状态;而体外培养的小鼠和山羊COCs,在成熟过程中EGFR蛋白水平降低,而且活化水平较低,激活后的维持时间也较短。在体外成熟培养液中加入17β-E2或G1能够提高EGFR蛋白水平,并发现G15能逆转17β-E2的作用,而ICI 182780则不能逆转17β-E2的作用。这些研究结果说明,雌激素能通过激活GPR30信号通路提高卵丘细胞中的EGFR蛋白水平。（4）雌激素-GPR30信号通路增强COCs对EGF的响应能力促进卵丘扩展分别使用添加17β-E2、G1、EGF、EGF+17β-E2、EGF+G1、EGF+17β-E2+G15和EGF+17β-E2+ICI 182780的培养液对小鼠和山羊COCs进行体外成熟培养,统计成熟后COCs的卵丘扩展指数和处于不同扩展等级的COCs比例;对各处理组小鼠和山羊卵丘扩展相关基因的表达水平进行检测,探讨雌激素促进卵丘扩展的作用及机制。结果显示,在EGF存在的情况下,17β-E2和G1能显着促进COCs的卵丘扩展,并提高扩展相关基因的表达水平;G15能逆转17β-E2的作用,而ICI 182780则不能逆转17β-E2促进卵丘扩展的作用。在无EGF的情况下,17β-E2和G1均无法单独促进卵丘扩展的发生。提示17β-E2无法直接促进卵丘扩展,但能通过激活GPR30信号通路提高COCs对EGF信号的响应能力,进而发挥促进卵丘扩展的作用。以上研究结果证明,卵母细胞成熟过程中LH和雌激素协同促进卵丘扩展。LH信号通过激活EGFR信号通路,抑制了卵丘细胞中的溶酶体途径,导致GPR30蛋白在细胞中累积;同时雌激素通过激活GPR30信号通路上调了卵丘细胞中EGFR的蛋白水平,从而通过提高COCs对EGF信号的响应能力,进而发挥促进卵丘扩展的作用。研究工作拓展了人们对哺乳动物卵母细胞成熟机制的认知,为进一步改良卵母细胞体外成熟培养体系、助推相关动物胚胎工程技术的研究与应用提供了理论基础。
姜美佳[4]（2020）在《着床汤治疗肾虚型反复种植失败的临床研究》文中进行了进一步梳理目的:观察李克勤教授经验方着床汤治疗肾虚型反复种植失败的临床疗效,探讨着床汤对肾虚型反复种植失败妊娠结局的影响,总结李克勤教授治疗反复种植失败的经验。方法:将62例肾虚型反复种植失败患者随机分为观察组和对照组,对照组采用西医常规移植周期治疗,治疗组在对照组的基础上服用着床汤,于胚胎移植前一天开始服用,共14付。观察两组治疗前后肾虚证候变化、胚胎种植率、临床妊娠率及持续妊娠率。并分别将治疗组和对照组根据患者年龄（<35岁和≥35岁）、移植胚胎类型（鲜胚移植和冻胚移植）分为两个亚组,分别比较两组的妊娠结局。结果:1.着床汤治疗肾虚型RIF患者的胚胎种植率为46.8%,对照组种植率为27.4%。治疗组临床妊娠率为58.1%,对照组临床妊娠率为32.3%。治疗组持续妊娠率为54.8%,对照组持续妊娠率为22.6%,两组患者妊娠结局的比较,差异均有统计学意义（P<0.05）。在改善患者肾虚证候方面,治疗组治疗前后差异有统计学意义（P<0.05）。治疗后治疗组与对照组比较,差异有统计学意义（P<0.05）。2.在年龄亚组中,<35岁的患者治疗组胚胎种植率、临床妊娠率及持续妊娠率均优于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）,≥35岁的患者两组之间比较,差异均无统计学意义（P>0.05）。在治疗组中,<35岁和≥35岁患者的妊娠结局比较,胚胎种植率差异无统计学意义（P>0.05）,但临床妊娠率和持续妊娠率均有统计学意义（P<0.05）,在对照组中的比较中妊娠结局的差异均无统计学意义（P>0.05）。3.在移植胚胎类型亚组中,治疗组和对照组在移植鲜胚和冻胚方面,在胚胎种植率、临床妊娠率及持续妊娠率的差异均无统计学意义（P>0.05）。在鲜胚移植中,治疗组和对照组在妊娠结局方面的比较,差异均无统计学意义（P>0.05）。在冻胚移植中,治疗组和对照组临床妊娠率的比较,差异无统计学意义（P>0.05）,但治疗组在胚胎种植率和持续妊娠率方面均优于对照组,差异均有统计学意义（P<0.05）。结论:1.着床汤治疗肾虚型RIF,其疗效优于单纯西医移植周期治疗,并且可以改善患者的肾虚证候,提高胚胎种植率、临床妊娠率及持续妊娠率。2.着床汤对<35岁患者的治疗效果优于≥35岁患者,并且年龄可以独立影响不孕症的发生,影响辅助生殖技术的成功与否。3.着床汤对移植鲜胚和冻胚患者的治疗效果无显着性差异,说明其治疗作用与移植胚胎的类型无关。
张仙玉[5]（2020）在《内源性精子消融的动物模型制备及精原干细胞移植研究》文中研究表明猪肉是我国居民肉类消费的主要来源。在现代养猪生产中,顶级种公猪通过人工授精技术可繁殖大量后代,对于提高养殖效益和经济效益发挥着重大作用。如何能大量复制顶级种公猪或其遗传物质?体细胞克隆是当前的主要技术手段,但由于克隆动物的效率低,限制了这一技术的规模化应用。将外源精原干细胞（SSCs）移植到自身无SSCs生精能力的受体睾丸中产生精子,这是一个类似于动物克隆技术,实现外源遗传物质完全复制的新途径。本文的目的是,研究制备自身SSCs消融但能利用外源SSCs生产精子的受体模型动物,为下一步建立替代克隆技术复制供体动物遗传物质的新体系打下坚实基础。全文主要研究内容包括:采用CRISPR/Cas9系统敲除小鼠的ETV5基因,制备小鼠模型,将体外培养的正常SSCs移植到小鼠模型睾丸中,观察精子的发生,评估该技术的可行性,进一步制备ETV5基因敲除猪动物模型。全文主要结果如下:1、ETV5基因敲除小鼠的制备:（1）通过CRISPR/Cas9系统敲除了小鼠ETV5基因后,纯合敲除的公鼠(ETV5-/-),从3周龄开始,其睾丸明显比野生型（WT）要小,睾丸重也显着低于WT（P<0.01）。（2）ETV5-/-小鼠睾丸生殖细胞渐行性丢失,到12周龄生殖细胞丢失殆尽,出现唯支持细胞综合症。（3）性成熟后ETV5-/-小鼠睾酮含量显着低于WT（P<0.01）,附睾中精子在12周龄丢失殆尽,且丧失了繁殖后代的能力。（4）ETV5基因杂合敲除的小鼠,其睾丸形态和发育均与WT小鼠无差别,生育能力正常。2、小鼠SSCs体外培养体系的建立:（1）通过两步酶消化法能得到活力99%以上的睾丸单细胞悬液,通过差速贴壁法获得纯度79%以上的SSCs。（2）丝裂霉素C处理之后的小鼠胎儿成纤维细胞作为饲养层,Stem Pro-34（含SFM）作为基础培养基,添加GDNF、LIF、b FGF、IGF1生长因子的复合培养体系,能支持SSCs的体外增殖与长期培养。（3）小鼠SSCs能正常冻存与复苏,在体外培养与富集后用AKP免疫染色和PLZF免疫荧光均可观察到大量阳性克隆集落。用RT-PCR和Q-PCR检测SSCs中标志基因的表达水平,均显示SSCs可在体外稳定培养增殖并维持干性。3、小鼠SSCs移植:（1）幼鼠(3周龄的ETV5-/-小鼠)作为移植受体比成鼠(7周龄的ETV5-/-小鼠)易于重启外源精子的发生。移植后2个月,幼鼠睾丸中全部恢复了精子的发生,精子统计数约为9.58±5.05×104,而成鼠受体睾丸中无精子发生的恢复。（2）荧光显微镜下,幼鼠受体附睾中产生的精子头部发出绿光,说明精子来源于外源供体的SSCs（移植前用慢病毒感染使其带有EGFP报告基因）。精液中外源基因EGFP和ETV5的表达,进一步说明恢复的精子来源于外源供体的SSCs,而非内源产生。4、ETV5基因敲除猪动物模型探讨:（1）用构建成功的p X330-g RNA质粒转染莱芜猪胎儿成纤维细胞,敲除效率约为41.92%。（2）通过体细胞核移植得到8头新生克隆猪,基因型检测显示ETV5基因在靶位点被敲除,Western blot结果证实了ETV5蛋白的丢失。（3）睾丸组织切片的H.E.染色和UCHL-1蛋白的表达显示,1月龄的ETV5-/-公猪曲细精管的形态和生殖细胞与WT公猪几乎无差异。但2.5月龄的ETV5-/-公猪曲细精管管腔中央的生殖细胞有消融的趋势。另外,UCHL-1蛋白标记的阳性SSCs细胞比WT睾丸中要少。这些结果说明ETV5基因的敲除影响猪生殖细胞的发育。综上所述,本研究制备了ETV5基因纯合敲除后生殖细胞消融且无生育能力的受体小鼠;随后进行外源正常的精原干细胞移植,受体小鼠的生精能力得以恢复;最后将小鼠上构建的方法体系借鉴应用于猪受体模型的制备。目的为家畜优质个体遗传物质大量复制,物种的保种和精原干细胞研究等提供科学依据。
严莉[6]（2020）在《基于Ang/Tie-2信号通路研究补肾活血方导法孕前给药调控大鼠种植窗期子宫组织血管生成的分子机制》文中指出研究目的:补肾活血方导法（保留灌肠）治疗肾虚血瘀型不孕症及体外受精-胚胎移植（in vitro fertilization and embryo transfer,IVF-ET）失败患者的临床疗效确切。在前期工作基础上,本实验研究基于Ang/Tie-2信号通路,观察补肾活血方导法孕前给药治疗对肾虚血瘀-胚胎着床障碍病证结合模型大鼠种植窗期子宫组织血管生成的影响,以揭示补肾活血方导法改善子宫内膜容受性的助孕机制。研究方法:选取SPF级动情周期规律的雌性SD大鼠60只,随机分成5组,动情前期时入组。模型组和给药组上午9:00左右给予羟基脲450mg/（kg·d）,灌胃10天,于第4天开始皮下注射肾上腺素0.3mg/（kg·d）7天造成肾虚血瘀模型;空白组则予等量生理盐水灌胃和皮下注射。造模的同时,每日下午2:00左右各给药予相应药物治疗,空白组、模型组予等量生理盐水灌胃或灌肠。造模第11天起,阴道涂片筛选出各组动情期大鼠,每晚18:00按雌雄2:1合笼,第二天早上7:00观察阴栓或行阴道涂片观察精子,发现阴栓或精虫者为妊娠第1天。除空白组外,各组于妊娠第4日皮下注射米非司酮5.5mg/kg 1次,造成肾虚血瘀-胚胎着床障碍病证结合模型;空白组予等量芝麻油溶剂皮下注射。于妊娠第5天称重后,注射1%戊巴比妥钠麻醉后固定,剖腹行腹主动脉采血,然后迅速剖取子宫,电子天平称重并分类保存。测定种植窗期大鼠全血粘度及血浆粘度、血浆D-二聚体（D-dimer,D2）、血清孕激素（progesterone,P）、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）、胎肝激酶-1（fetal liver kinase 1,FLK-1）,子宫湿重、子宫脏器指数、子宫内膜组织形态和螺旋动脉数量,子宫组织促血管生成素1（angiopoietin 1,Ang-1）、促血管生成素2（Angiopoietin 2,Ang-2）、酪氨酸激酶-2（tyrosine kinase-2,Tie-2）蛋白表达水平以及Ang-1、Ang-2、Tie-2、孕激素受体（Progesterone receptor,PR）m RNA表达水平。采用方差分析的方法比较各指标的组间变化。研究结果:1. 复制出符合肾虚血瘀-胚胎着床障碍特征的病证结合大鼠模型与空白组比较,模型组大鼠出现精神萎靡,拱背,倦卧少动,反应迟钝,皮毛稀疏甚至脱毛,耳朵、舌头、爪甲、尾部呈暗紫色等中医肾虚血瘀表现。模型组大鼠种植窗期全血粘度和血浆粘度均增高（P<0.05）,D2水平明显增高（P<0.01）,血清P含量明显降低（P<0.01）,血清VEGF、FLK-1表达降低（P<0.05）;模型组大鼠子宫内膜发育较差,被覆上皮薄,上皮细胞数量少,内膜腺体小而直,腺腔隙缩窄,部分间质致密,部分间质疏松,紧凑不一,间质发育不同步,螺旋动脉数量显着降低（P<0.01）;模型组大鼠子宫组织Tie-2蛋白表达量显着降低（P<0.01）,模型组大鼠子宫组织Ang-1、Tie-2 m RNA表达水平均显着降低（p<0.01）,Ang-2 m RNA表达水平增高（p<0.05）,PR m RNA表达显着降低,体现胚胎着床障碍特征。从整体到组织到分子,这些生理和生化指标均符合肾虚血瘀-胚胎着床障碍特征。2. 补肾活血方导法孕前给药对模型大鼠血液流变学和子宫血管生成的影响与模型组比较,补肾活血方低剂量组与阿司匹林组全血粘度5.s-1降低（P<0.05）,补肾活血方高剂量组全血粘度显着降低（P<0.01）,血浆粘度有降低趋势;补肾活血方低剂量组螺旋动脉数量显着升高（P<0.01）,高剂量组和阿司匹林组血清VEGF、FLK-1及螺旋动脉数量显着升高（P<0.01）;补肾活血方低剂量组子宫组织Tie-2蛋白及m RNA表达增高（P<0.05）,Ang-1 m RNA表达显着升高（P<0.01）,高剂量组和阿司匹林组Ang-1、Tie-2蛋白表达量及Ang-1、Tie-2 mRNA表达水平均显着升高（P<0.01）,且高剂量组血清VEGF、血清FLK-1、螺旋动脉数量、Ang-1、Tie-2蛋白表达量及m RNA表达水平与空白组无统计学差异（P>0.05）。表明补肾活血方导法治疗能改善上述指标,改善模型大鼠组织血瘀状态,促进子宫组织血管生成。3. 补肾活血方导法治疗对模型大鼠子宫内膜容受性的影响与模型组比较,补肾活血方低剂量组、高剂量组和阿司匹林组大鼠子宫湿重及子宫脏器指数均高于模型组（P<0.05）,且补肾活血方高剂量组与空白组之间无统计学差异（P>0.05）。补肾活血方低剂量组、高剂量组、阿司匹林组大鼠子宫内膜发育较好,子宫内膜被覆上皮有增长趋势,血管丰富,腺体数量多,分布均匀,腺上皮多呈单层高柱状上皮细胞,间质疏松水肿,且高剂量组更为明显,表明补肾活血方可改善模型大鼠子宫内膜组织形态。补肾活血方低剂量组、阿司匹林组子宫组织PR m RNA增高（P<0.05）;补肾活血方高剂量组血清P增高（P<0.05）,子宫组织PR m RNA明显增高（P<0.01）。以上均表明补肾活血方导法治疗可改善模型大鼠子宫内膜容受性。结论:1.肾虚血瘀-胚胎着床障碍病证结合模型大鼠具有精神萎靡,拱背,倦卧少动,反应迟钝,皮毛稀疏甚至脱毛,耳朵、舌头、爪甲、尾部呈暗紫色等中医肾虚血瘀表现,同时具备子宫湿重及子宫脏器指数降低,子宫内膜发育较差,孕激素水平降低等子宫内膜容受性不良表现,表明大鼠肾虚血瘀-胚胎着床障碍病证结合模型造模成功。2.补肾活血方导法治疗改善子宫内膜血流状态,提高子宫组织VEGF、FLK-1、Ang-1、Tie-2表达水平,维持Ang-2正常表达水平,促进子宫组织血管新生,增加子宫组织血液灌注及能量供给,可能是其助孕机制之一。3. 补肾活血方导法治疗可增加子宫湿重及子宫脏器指数,增加子宫组织血液灌注,改善种植窗期子宫内膜组织形态,并提高P、PR表达,从而改善子宫内膜容受性,促进胚胎着床。
宫慧君[7]（2020）在《滋阴助阳解郁法联合维生素E对肾虚肝郁型RIF患者子宫内膜容受性及焦虑抑郁情绪的影响》文中研究指明目的:观察滋阴助阳解郁法联合维生素E对肾虚肝郁型RIF患者子宫内膜容受性及焦虑抑郁情绪的影响,为临床改善RIF患者子宫内膜容受性及相关不良情绪提供新的思路和方法。方法:将符合纳入标准的48例研究对象按随机数表法随机划为观察组和对照组各24例,对照组服用维生素E软胶囊,100mg/次,一天两次,经期不停服,连用3个月经周期;观察组在对照组基础上予滋阴助阳解郁中药序贯调治3个月经周期,比较两组患者治疗前后中医症候积分、黄体中期血清激素（E2、P）、黄体中期子宫内膜阴道超声指标（厚度、体积、分型、VI、FI、VFI）、SAS评分和SDS评分的变化情况。结果:①观察组最终入组23例,对照组最终入组22例。②观察组治疗后中医症候积分较前降低（P<0.05）,组间比较,观察组低于对照组（P<0.05）;观察组中医症候疗效为91.3%,对照组中医症候疗效为18.1%,差异有统计学意义（P<0.01）。③观察组治疗后黄体中期血清E2、P值较前均升高（P<0.05）,组间对比,观察组高于对照组（P<0.05）。④观察组治疗后黄体中期子宫内膜厚度、A+B型内膜例数、VI、FI、VFI较治疗前均有改善（P<0.05）,组间对比,观察组治疗后指标均高于对照组（P<0.05）;观察组治疗后子宫内膜体积较前有上升趋势,但差异无统计学意义（P>0.05）,与对照组相比,差异无统计学意义（P>0.05）。⑤观察组治疗后SAS评分较前下降（P<0.01）,组间对比,观察组低于对照组（P<0.05）;SDS评分较前有下降趋势,但差异无统计学意义（P>0.05）,与对照组相比,差异无统计学意义（P>0.05）。结论:滋阴助阳解郁法联合维生素E可改善肾虚肝郁型RIF患者的肾虚肝郁症状,提高黄体中期血清E2及P水平,改善黄体中期子宫内膜容受性,改善焦虑情绪,对抑郁情绪也有一定的改善作用。
周川[8]（2019）在《牛早期克隆胚胎H3K27me3修饰和转录异常的研究》文中研究说明通过体细胞核移植（somatic cell nuclear transfer,SCNT）技术,终末分化的体细胞能够被重编程至全能性状态,并最终发育成为动物个体。这一优势使得SCNT技术在动物育种、濒危动物保护、疾病模型构建、生物医药和人类治疗性克隆等方面拥有广泛的应用前景。但是,克隆胚胎往往表现出不同阶段的发育阻滞,这导致克隆动物的出生率很低;即使发育至最后,出生克隆动物也经常表现出多种发育缺陷,这些因素成为SCNT技术广泛应用的主要障碍。去分化不彻底和重编程不完全被认为是核移植重编程效率低下的主要原因之一。本课题分别针对牛早期克隆胚胎中抑制性组蛋白修饰-H3K27me3和合子基因组激活时期的转录异常展开研究,鉴定出H3K27me3是牛核移植重编程的障碍,揭示了牛克隆胚胎中存在来源于供体细胞的转录记忆,主要研究内容和结果如下:（1）通过免疫荧光染色试验,确定了牛早期SCNT胚胎中存在异常高比例的H3K27me3修饰。之后,我们试图通过抑制H3K27me3甲基转移酶-EZH2的活性、抑制EZH2的表达水平或者过表达H3K27me3去甲基化酶-KDM6A等三种方法来修正SCNT胚胎中H3K27me3的异常修饰。应用EZH2的抑制剂-GSK343处理核移植供体细胞,能够显着降低供体细胞中H3K27me3的表达水平,但由于GSK343能够诱导细胞自噬并降低细胞存活力,最终影响了牛克隆胚胎发育能力。抑制EZH2的表达会干扰早期胚胎中基因组稳定性,诱导细胞凋亡,引起克隆胚胎早期发育阻滞,最终导致囊胚率降低。这两种方法都不能有效改善牛核移植重编程效率。而在重构胚胎中过表达KDM6A能够显着降低克隆胚胎中H3K27me3表达水平,促进克隆胚胎的囊胚形成,改善核移植重编程效率。（2）为进一步揭示KDM6A过表达改善牛核移植重编程的分子机制,我们进行了转录组测序分析。研究结果表明,KDM6A过表达能够促进克隆胚胎中细胞粘附、细胞代谢和X染色体连锁基因等多个功能类群基因的转录水平。其中,MBD3L2（methyl-CpG-binding domain protein 3-like 2）基因作为胚胎基因组激活相关因子,在小鼠、人和牛早期克隆胚胎中都表现出转录不足,而KDM6A过表达能够拯救克隆胚胎中MBD3L2的转录缺陷,研究结果也证实MBD3L2基因是牛克隆胚胎附植前发育所必需的。（3）针对牛克隆胚胎合子基因组激活时期的转录异常,RNA-seq分析结果证实,与体外受精胚胎相比,克隆胚胎中存在5169个上调基因和8653个下调基因。基因本体（Gene Ontology,GO）分析结果显示,5169个上调基因主要富集在“RNA加工”、“翻译”、“核糖体生物合成”、“翻译起始”和“RNA甲基化”等多个生物学进程;而8653个下调基因主要富集于“胞内信号转导”、“细胞发育”、“细胞增殖”、“胚胎发育”和“生殖进程”等多个生物学过程。简而言之,牛克隆胚胎中既存在“细胞信号转导”和“胚胎发育”相关基因的转录不足,又存在“翻译”等相关基因的过度转录。（4）通过供体细胞、核移植胚胎和体外受精胚胎转录组数据的联合分析,我们确定了牛早期克隆胚胎中存在来源于供体细胞的转录记忆。这些异常的转录记忆被称为体细胞记忆,其中包括2108个活化记忆基因和5609个沉默记忆基因。GO分析结果显示,活化记忆基因主要涉及“翻译”、“转录”和“RNA加工”等生物学进程,而沉默记忆基因主要富集于“细胞信号转导”、“有性生殖”、“生殖进程”和“胚胎发育”等多个生物学过程。该结果表明,供体细胞中存在的、“转录”与“翻译”相关基因的高度活化状态遗留给了核移植胚胎;同时,核移植胚胎中涉及“信号转导”、“有性生殖”和“胚胎发育”的基因转录没有得到有效激活,其表达水平显着低于体外受精胚胎。活化记忆可能是不完全去分化的结果,而沉默记忆则可能是不完全重编程的表现,这可能是牛核移植重编程效率低下的重要原因之一。（5）最后,我们评估了KDM5B过表达对牛克隆胚胎合子激活时期转录模式的影响。RNA-seq分析结果表明,KDM5B过表达能够有效修正牛核移植重编程中来自于供体细胞的异常转录模式,不仅能够降低活化记忆基因的表达水平,还能够提高沉默记忆基因的转录水平,特别是能够拯救牛克隆胚胎中涉及“细胞信号转导”和“胚胎发育”相关基因的转录缺陷,最终明显改善了牛核移植重编程效率。
宁云[9]（2019）在《体外人类胚胎法律属性及处置规则研究》文中研究表明科技的发展带给人们的不仅是物质条件的丰富,对传统的立法来说也意味着必将面临重大的冲击。人工辅助生殖技术的发展迅速以及立法的空白导致这一类纠纷处理的复杂性、不确定性。体外人类胚胎法律属性的准确界定便是解决这一问题的根源。从主体说、客体说及中间说的论证中,我国各学者也提出了各自的观点,各执己见,现阶段仍然处于争论阶段。本文主要通过发现问题、出现这些问题的原因是什么、如何解决这些问题的思路来展开论证,通过比较分析目前的主流观点,主体说、客体说及中介说,进行利弊权衡,比较分析国外人工辅助生殖技术先进国家的立法,论证客体说下体外人类胚胎属于“人格物”的可行性,借鉴国外经验,设想对体外人类胚胎进行特别立法,肯定其受到一般物之上的“人格物”之保护,并建立专门的监督机构,监管人工辅助生殖技术实施的全过程。首先,通过引发人们巨大争议的2014年江苏宜兴冷冻胚胎案及2017年湖北省单方处置胚胎纠纷案,提出本文所要解决的问题,总结归纳关于体外人类胚胎的争议,即体外人类胚胎的法律属性是什么以及不同情况下这些胚胎的处置规则。其次,对国内外学者提出的主体说、客体说及中间说的观点进行利弊权衡,比较法国、日本、美国及英国关于体外人类胚胎特殊法律属性研究,通过主体说保护过度、中间说导致法律框架的冲击及客体说下“人格物”的开放空间,在“人-物”二分格局下,通过论证体外人类胚胎不是法律意义上的“人”,实质上属于“物”,且“人格物”的提出可保护其具有的特殊人格利益,确定将体外人类胚胎界定为“人格物”的可行性。再次,对人工辅助生殖技术水平领先的法国、日本、美国及英国的优秀立法进行分析,对比分析各国体外人类胚胎的法律属性界定及处置规则,法国给予了体外人类胚胎是“生物人”的特殊保护;日本虽未明确规定,也给予了体外人类胚胎“软法化”保护;美国各个州的观点不一致,存在合同模式、同时合意模式及利益衡量模式下不同的保护方式;英国赋予了体外人类胚胎特殊的保护地位,建立了体外人类胚胎及研究管理体制。在“人格物”学说的基础上,探讨我国关于体外人类胚胎在不同情况下的处置规则。“人格物”的提出旨在将体外人类胚胎融入现有的法律体系中,在一般客体之上对其进行特殊保护,允许辅助生殖夫妇占有和使用的意思自治,但禁止收益。在婚姻关系存续期间、受术夫妇离婚时、受术夫妇一方死亡或夫妇双方都死亡时,遵循不同的处置规则。最后,通过前面的论证分析,对我国体外人类胚胎将来的监管规则提出构想,借鉴英国的体外人类胚胎及研究管理体制,对体外人类胚胎进行特别立法,明确其“人格物”的特殊属性及处置规则,完善辅助生殖技术中违规操作的惩治规则,建立专门的体外人类胚胎监督部门。
易满[10]（2019）在《中医药多途径介入257例多中心拟再次IVF-ET前患者自然妊娠的疗效研究》文中研究指明目的观察中医药多途径介入多中心拟再次IVF-ET前患者成功获自然妊娠的疗效,为中医药介入IVF-ET可改善其肾虚肝郁血瘀证候,辅助其进入辅助生殖周期;提高成功获自然妊娠率提供临床依据,为辅助生殖技术助孕失败后的中医药治疗提供临床支撑。方法选取成都市四家生殖中心医院（01中心-四川省华西第二医院,02中心-成都中医药大学第二附属医院,03中心-四川省人民医院,04中心-成都西囡妇科医院）,纳入行IVF-ET长方案助孕失败后拟再次行IVF-ET助孕的门诊患者,按纳入、排除、剔除标准筛选病例,随机分配到治疗组和对照组,治疗组予中医药多途径（中药口服+耳穴贴压+保留灌肠）介入3个月;对照组不予任何干预,自然期待3个月。采集两组治疗前后的中医症状、证候积分,再次IVF前自然妊娠情况,将所收集的数据录入EpiData软件建立数据库,双人背对录入、核对,答疑后锁定数据库,再采用SPSS 22.0统计软件对数据库进行统计分析。结果本研究初步显示:1.自然妊娠情况:（1）成功获孕率:在全分析集中,治疗组128例中成功获孕14例,成功获孕率10.94%,对照组129例中成功获孕1例,成功获孕率0.78%,两组组间比较,差异有统计学意义（P<0.05）;（2）不同时间段成功获孕例数分布,两组间比较,差异有统计学意义（P<0.05）;中心来源分布、早期妊娠结局分布、不孕相关因素分布、年龄分布、不孕类型分布、既往IVF-ET次数分布,两组组间比较,差异均无统计意义（P>0.05）。2.中医症状、证候疗效:（1）单项主要症状、次要症状及中医证候积分,治疗组治疗前后比较,差异有统计学差异（P<0.05）;对照组治疗前后比较,差异无统计学差异（P>0.05）;治疗后两组组间比较,差异有统计学意义（P<0.05）;（2）中医证候疗效:在全分析集中,治疗组愈显率为40.62%,总有效率为90.62%;对照组愈显率为4.65%,总有效率为6.20%;两组组间愈显率与总有效率比较,差异均有统计学意义（P<0.05）。结论中医药多途径介入治疗拟再次IVF-ET患者,可改善肾虚肝郁血瘀证候;单纯输卵管因素、单纯排卵障碍性因素、子宫内膜异位症性不孕、不明原因性不孕的患者有可能在再次IVF-ET前成功获得自然妊娠。
二、体外受精-胚胎移植技术中精卵培养成功280枚的体会（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、体外受精-胚胎移植技术中精卵培养成功280枚的体会（论文提纲范文）
（1）生育利益的私法实践样态与保护（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 绪论 |
| 一、研究的目的和意义 |
| 二、研究现状和文献综述 |
| 三、研究方法 |
| 四、研究创新点 |
| 第一章 生育利益的涵义厘定 |
| 第一节 生育概述 |
| 一、生育的内涵分析 |
| 二、生育的发展沿革 |
| 第二节 生育利益的私法定位 |
| 一、生育权与生育利益的关系 |
| 二、生育利益公法保护与私法保护的差异 |
| 本章小结 |
| 第二章 生育利益的私法实践样态 |
| 第一节 生育利益案件的综合梳理 |
| 一、生育利益案件的收集 |
| 二、生育利益案件的选取 |
| 第二节 生育利益案件的类型分析 |
| 一、个人与个人之间的生育利益案件 |
| 二、个人与组织之间的生育利益案件 |
| 第三节 生育利益案件的问题整理 |
| 一、生育利益的民事权利规制阙如 |
| 二、生育利益案件特殊规制的疏漏 |
| 本章小结 |
| 第三章 生育利益私法保护的路径探寻 |
| 第一节 国际文件对生育利益的保护指引 |
| 一、国际文件对生育利益的保护内容 |
| 二、国际文件对生育利益的保护趋势 |
| 第二节 国外生育利益私法保护的形态梳理 |
| 一、英美法系国家对生育利益的私法保护 |
| 二、大陆法系国家对生育利益的私法保护 |
| 第三节 我国生育利益私法保护的观念呈现 |
| 一、生育利益民法保护的观念差异 |
| 二、民法典建议稿对生育利益的私法保护 |
| 第四节 生育利益私法保护的理性选择 |
| 一、法律的民事权利确认 |
| 二、其他规范的综合性调整 |
| 本章小结 |
| 第四章 生育利益私权保护的规范设计 |
| 第一节 生育利益私权地位的民法确认 |
| 一、生育权的性质 |
| 二、生育权的主体 |
| 三、生育权的内容 |
| 四、生育权的实现 |
| 第二节 生育利益案件特殊规制的补充立法 |
| 一、补充婚姻家庭领域的生育立法 |
| 二、补充劳动用工领域的生育立法 |
| 三、补充医疗卫生领域的生育立法 |
| 本章小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表论文 |
（2）低水平血清泌乳素与PCOS患者代谢紊乱和IVF-ET结局的关系及相关机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 符号说明 |
| 第一章 低水平血清泌乳素与多囊卵巢综合征不孕患者代谢紊乱的相关性研究 |
| 1.1 研究背景 |
| 1.2 材料与方法 |
| 1.3 结果 |
| 1.4 讨论 |
| 1.5 结论 |
| 第二章 低水平血清泌乳素与多囊卵巢综合征不孕患者体外受精-胚胎移植治疗结局的相关性研究 |
| 2.1 研究背景 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 结论 |
| 第三章 泌乳素及其受体介导的JAK2/STAT5通路对脂肪代谢的影响及机制研究 |
| 3.1 研究背景 |
| 3.2 实验材料和方法 |
| 3.3 结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 结论 |
| 综述 泌乳素及其与代谢的关系 |
| 附录、附图表 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文目录 |
| 学位论文评阅及答辩情况 |
| English Paper 1 |
| English Paper 2 |
（3）促黄体素与雌激素在小鼠和山羊卵丘扩展中的作用及其机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 文献综述 |
| 第一章 哺乳动物卵母细胞生长发育与成熟研究进展 |
| 1.1 卵子发生与卵泡发育 |
| 1.1.1 卵子发生 |
| 1.1.2 卵泡发育 |
| 1.2 减数分裂阻滞的维持与相关分子机制 |
| 1.2.1 哺乳动物第一次减数分裂阻滞 |
| 1.2.2 维持卵母细胞减数分裂阻滞的分子机制 |
| 1.3 卵母细胞减数分裂恢复与后续发育潜能的获得 |
| 1.3.1 卵母细胞减数分裂恢复 |
| 1.3.2 卵母细胞的后续发育潜能 |
| 1.4 卵丘扩展 |
| 1.4.1 卵丘细胞 |
| 1.4.2 卵丘细胞与卵母细胞的互作调控 |
| 1.4.3 卵丘细胞扩展 |
| 1.5 小结 |
| 第二章 雌激素及其受体在卵巢中的功能研究进展 |
| 2.1 雌激素 |
| 2.1.1 雌激素的定义、生物合成与代谢 |
| 2.1.2 雌激素的生理功能 |
| 2.2 雌激素核受体与雌激素的基因组效应 |
| 2.2.1 雌激素核受体的分子结构 |
| 2.2.2 雌激素核受体信号的调控机制 |
| 2.3 雌激素膜受体与雌激素的非基因组效应 |
| 2.3.1 雌激素膜受体的分子结构 |
| 2.3.2 雌激素膜受体的定位与表达 |
| 2.3.3 雌激素膜受体功能预测 |
| 2.4 雌激素对卵丘扩展的调控作用 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 表皮生长因子信号通路参与调控卵母细胞成熟过程的机制研究进展 |
| 3.1 表皮生长因子与受体概述 |
| 3.1.1 表皮生长因子与受体 |
| 3.1.2 表皮生长因子信号通路的功能 |
| 3.2 表皮因子受体信号通路在卵母细胞成熟过程中的作用 |
| 3.2.1 LH上调颗粒细胞中类表皮样生长因子表达 |
| 3.2.2 EGFR信号通路在卵母细胞成熟过程中的作用 |
| 3.3 小结 |
| 3.4 本研究的目的和意义 |
| 试验研究 |
| 第四章 促黄体素对卵丘卵母细胞复合体中GPR30水平的调控作用及其作用机制研究 |
| 4.1 材料和方法 |
| 4.1.1 研究对象 |
| 4.1.2 试验材料 |
| 4.1.3 液体配制 |
| 4.1.4 小鼠COCs的回收与体外培养 |
| 4.1.5 表皮生长因子受体抑制小鼠模型的制备与超数排卵处理 |
| 4.1.6 山羊卵泡与COCs的回收与体外培养 |
| 4.1.7 实时荧光定量聚合酶链式反应 |
| 4.1.8 蛋白免疫印迹试验(Western blot) |
| 4.1.9 免疫荧光染色 |
| 4.1.10 数据统计 |
| 4.2 试验结果 |
| 4.2.1 LH/h CG对小鼠COC中 GPR30 基因表达的调控作用 |
| 4.2.2 LH/h CG对小鼠COC中 GPR30 蛋白水平的调控作用 |
| 4.2.3 LH/h CG诱导类表皮样生长因子表达调控小鼠COCs中 GPR30 水平 |
| 4.2.4 EGF下调体外培养的小鼠COCs中 GPR30 基因表达水平 |
| 4.2.5 EGF上调体外培养的小鼠COCs中 GPR30 蛋白水平 |
| 4.2.6 EGF通过激活小鼠卵丘细胞上的EGF受体上调GPR30 蛋白水平 |
| 4.2.7 LH对山羊卵泡COC中GPR30基因表达的调控作用 |
| 4.2.8 LH对山羊卵泡COC中GPR30蛋白水平的调控作用研究 |
| 4.2.9 LH诱导山羊卵泡壁颗粒细胞表达类表皮样生长因子,进而上调山羊COCs中 GPR30 的水平 |
| 4.2.10 山羊COCs体外成熟培养过程中GPR30 基因表达变化趋势检测 |
| 4.2.11 EGF上调体外培养的山羊COCs中 GPR30 蛋白水平 |
| 4.2.12 EGF通过激活山羊COCs的 EGF受体上调GPR30 蛋白水平 |
| 4.2.13 EGF通过非基因组途径调控山羊COCs中的GPR30 蛋白水平变化 |
| 4.2.14 EGF激活EGFR上调GPR30 蛋白水平的作用发生在卵丘细胞上 |
| 4.3 讨论 |
| 4.3.1 EGFR信号通路介导了LH上调COCs中 GPR30 蛋白水平的作用 |
| 4.3.2 LH/EGF通过非基因组途径调控COCs中 GPR30 的蛋白水平 |
| 4.3.3 LH信号上调COCs中 GPR30 蛋白水平的作用发生在卵丘细胞上 |
| 4.4 小结 |
| 第五章 表皮生长因子受体信号通路调控颗粒细胞中GPR30蛋白降解的机制研究 |
| 5.1 材料和方法 |
| 5.1.1 研究对象 |
| 5.1.2 试验材料 |
| 5.1.3 液体配制 |
| 5.1.4 小鼠原代卵泡颗粒细胞的收集与培养 |
| 5.1.5 实时荧光定量聚合酶链式反应 |
| 5.1.6 蛋白免疫印迹试验(Western blot) |
| 5.1.7 免疫荧光染色 |
| 5.1.8 细胞溶酶体活性检测 |
| 5.1.9 数据统计 |
| 5.2 试验结果 |
| 5.2.1 EGF通过激活EGFR上调原代卵泡颗粒细胞中GPR30 蛋白水平 |
| 5.2.2 EGFR激活延长了卵泡颗粒细胞中GPR30 蛋白的半衰期 |
| 5.2.3 卵泡颗粒细胞中GPR30蛋白降解途径检测 |
| 5.2.4 EGFR激活降低了卵泡颗粒细胞中的溶酶体活性 |
| 5.2.5 EGFR激活减少了卵泡颗粒细胞中溶酶体的数量 |
| 5.3 讨论 |
| 5.4 小结 |
| 第六章 雌激素通过GPR30信号通路调节卵丘细胞中表皮生长因子受体水平的机制研究 |
| 6.1 材料和方法 |
| 6.1.1 研究对象 |
| 6.1.2 试验材料 |
| 6.1.3 液体配制 |
| 6.1.4 小鼠COCs的回收与体外培养 |
| 6.1.5 山羊卵泡与COCs的回收与体外培养 |
| 6.1.6 蛋白免疫印迹试验 |
| 6.1.7 数据统计 |
| 6.2 试验结果 |
| 6.2.1 体内成熟过程中小鼠COCs中 EGFR蛋白水平检测 |
| 6.2.2 体外成熟培养过程中小鼠COCs中 EGFR蛋白水平检测 |
| 6.2.3 17β-E_2 激活GPR30 信号通路上调小鼠COCs中 EGFR蛋白水平 |
| 6.2.4 在卵泡中成熟的山羊COCs中 EGFR蛋白水平检测 |
| 6.2.5 体外成熟培养的山羊COCs中 EGFR蛋白水平检测 |
| 6.2.6 17β-E_2 激活GPR30 信号通路上调山羊COCs中 EGFR蛋白水平 |
| 6.3 讨论 |
| 6.3.1 17β-E_2 激活GPR30 信号通路上调COCs中 EGFR蛋白水平 |
| 6.3.2 较高的EGFR蛋白水平有助于维持EGFR的持续激活 |
| 6.4 小结 |
| 第七章 雌激素通过激活GPR30 通路增强LH/EGF信号促进卵丘扩展的研究 |
| 7.1 材料和方法 |
| 7.1.1 研究对象 |
| 7.1.2 试验材料 |
| 7.1.3 液体配制 |
| 7.1.4 小鼠COCs的回收与体外培养 |
| 7.1.5 山羊COCs的回收与体外培养 |
| 7.1.6 实时荧光定量聚合酶链式反应 |
| 7.1.7 卵丘扩展分级与扩展指数统计 |
| 7.1.8 数据统计 |
| 7.2 试验结果 |
| 7.2.1 GPR30信号通路激活加强了EGF促进小鼠卵丘扩展的作用 |
| 7.2.2 17β-E_2通过GPR30信号通路促进小鼠卵丘扩展相关基因表达 |
| 7.2.3 GPR30信号通路激活加强了EGF促进山羊卵丘扩展的作用 |
| 7.2.4 17β-E_2通过GPR30信号通路促进山羊卵丘扩展相关基因表达 |
| 7.3 讨论 |
| 7.3.1 E_2/GPR30信号通路激活加强了EGF促进卵丘扩展的作用 |
| 7.3.2 E_2/GPR30信号通路激活加强了EGF上调卵丘扩展相关基因的作用 |
| 7.4 小结 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 缩略词 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（4）着床汤治疗肾虚型反复种植失败的临床研究（论文提纲范文）
| 提要 |
| abstract |
| 引言 |
| 临床研究 |
| 1. 研究资料 |
| 1.1 病例来源 |
| 1.2 诊断标准 |
| 1.3 选择标准 |
| 2 研究方法 |
| 2.1 使用药物 |
| 2.2 分组及治疗措施 |
| 2.3 胚胎的类型及移植 |
| 2.4 子宫内膜准备方案 |
| 2.5 妊娠结局 |
| 2.6 观察指标 |
| 2.7 妊娠结局指标 |
| 2.8 子宫内膜容受性指标 |
| 2.9 中医证候疗效判定标准 |
| 3. 统计方法 |
| 4. 研究结果 |
| 4.1 治疗组与对照组一般情况的比较 |
| 4.2 治疗组与对照组治疗前后肾虚证候情况的比较 |
| 4.3 治疗组与对照组妊娠情况的比较 |
| 4.4 亚组间妊娠结局比较 |
| 4.5 安全性指标 |
| 5. 结论 |
| 讨论 |
| 1. 西医对RIF的认识 |
| 2. 中医对RIF的认识 |
| 3. 立题依据 |
| 4. 理论依据 |
| 4.1 李克勤治疗肾虚型RIF的思路 |
| 4.2 确立治法 |
| 5. 方药分析 |
| 5.1 着床汤组成 |
| 5.2 方药分析及现代药理作用 |
| 6. 本研究临床结果分析 |
| 7. 本研究创新与不足 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 综述 反复种植失败的中西医研究进展 |
| 1 西医学研究进展 |
| 2. 中医学研究进展 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 着床汤治疗肾虚型反复种植失败的临床观察表 |
| 肾虚症状积分表 |
| 肾虚证证候疗效判定标准 |
| 中英文缩略词 |
| 致谢 |
| 发表论文 |
（5）内源性精子消融的动物模型制备及精原干细胞移植研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 研究背景 |
| 1.2 国内外研究进展 |
| 1.2.1 精原干细胞的起源与精子发生 |
| 1.2.2 精原干细胞的应用 |
| 1.2.3 精原干细胞的移植 |
| 1.2.4 受体的制备 |
| 1.2.5 CRSPR/Cas9 技术的应用 |
| 1.3 研究目的及意义 |
| 第二章 内源性精子发生消融的小鼠模型制备 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 实验设备与耗材 |
| 2.1.3 主要试剂与配置 |
| 2.1.4 方法 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.2.1 F_0代小鼠获得及基因型鉴定 |
| 2.2.2 F_1代新生小鼠基因型鉴定 |
| 2.2.3 Western blot鉴定ETV5 蛋白的缺失 |
| 2.2.4 不同基因型小鼠体重的检测 |
| 2.2.5 不同基因型小鼠睾丸重的检测 |
| 2.2.6 睾丸组织形态学比较 |
| 2.2.7 附睾中精子的检测 |
| 2.2.8 精子发生相关基因的表达 |
| 2.2.9 睾酮水平检测 |
| 2.2.10 繁殖能力 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 第三章 小鼠精原干细胞的分离培养与检测 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 实验动物 |
| 3.1.2 实验设备与耗材 |
| 3.1.3 主要试剂与配置 |
| 3.1.4 方法 |
| 3.2 实验结果与分析 |
| 3.2.1 用小鼠胎儿成纤维细胞制备饲养层细胞 |
| 3.2.2 两种饲养层培养SSCs细胞体外增殖的比较 |
| 3.2.3 精原干细胞的分离与纯化 |
| 3.2.4 添加不同生长因子对精原干细胞体外增殖的影响 |
| 3.2.5 精原干细胞体外增殖的碱性磷酸酶染色 |
| 3.2.6 精原干细胞体外增殖的免疫荧光染色 |
| 3.2.7 精原干细胞的标志基因表达检测 |
| 3.2.8 精原干细胞标志基因表达水平的实时定量检测 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 第四章 精原干细胞移植与精子来源的检测 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 实验动物 |
| 4.1.2 实验设备与耗材 |
| 4.1.3 主要试剂与配制 |
| 4.1.4 方法 |
| 4.2 结果与分析 |
| 4.2.1 SSCs的移植 |
| 4.2.2 移植后睾丸重量的检测 |
| 4.2.3 睾丸的组织形态观察(H.E.染色) |
| 4.2.4 睾丸切片的免疫组织化学分析 |
| 4.2.5 附睾精子的检测 |
| 4.2.6 精子来源的检测 |
| 4.2.7 精子发生相关基因的表达 |
| 4.2.8 繁殖能力评估 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 小结 |
| 第五章 基因敲除猪受体模型的制备 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.1.1 实验动物 |
| 5.1.2 实验设备与耗材 |
| 5.1.3 主要试剂与配制 |
| 5.1.4 方法 |
| 5.2 结果与分析 |
| 5.2.1 pX330-gRNA质粒的构建 |
| 5.2.2 质粒电转猪胎儿成纤维细胞 |
| 5.2.3 电转后单克隆细胞团的收取 |
| 5.2.4 单克隆细胞团敲除方式的鉴定 |
| 5.2.5 ETV5 基因纯合敲除细胞系的获得 |
| 5.2.6 SCNT制备ETV5 基因敲除克隆猪 |
| 5.2.7 新生克隆猪的基因型鉴定 |
| 5.2.8 新生克隆猪ETV5 蛋白Western blot鉴定 |
| 5.2.9 睾丸发育的组织形态检测 |
| 5.3 讨论 |
| 5.4 小结 |
| 第六章 全文总结 |
| 6.1 全文总结与主要结论 |
| 6.2 主要创新点与后续工作 |
| 参考文献 |
| 附录1 主要英文对照缩略表 |
| 附录2 全文 RT-PCR(Q-PCR)引物序列 |
| 附录3 细胞系测序结果 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（6）基于Ang/Tie-2信号通路研究补肾活血方导法孕前给药调控大鼠种植窗期子宫组织血管生成的分子机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略词中英文对照 |
| 1.引言 |
| 2.实验材料 |
| 2.1 实验动物 |
| 2.2 实验药物 |
| 2.3 主要仪器和设备 |
| 3.实验方法 |
| 3.1 动物分组 |
| 3.2 动物模型建立 |
| 3.3 阴道涂片及动情周期判断 |
| 3.4 干预用药及方法 |
| 3.5 检测指标及方法 |
| 3.6 统计学方法 |
| 4.实验结果 |
| 4.1 各组大鼠一般情况观察 |
| 4.2 各组大鼠血液流变学指标比较 |
| 4.3 各组大鼠血浆D2水平 |
| 4.4 各组大鼠子宫内膜形态学变化 |
| 4.5 各组大鼠子宫湿重及子宫脏器指数 |
| 4.6 各组大鼠血清孕激素水平、子宫组织PR m RNA水平 |
| 4.7 补肾活血方导法对模型大鼠种植窗期子宫组织VEGF、螺旋动脉数量及血清VEGF、FLK-1 的影响 |
| 4.8 补肾活血导法对各组大鼠子宫组织Ang-1、Ang-2、Tie-2 的蛋白表达影响 |
| 4.9 补肾活血导法对各组大鼠子宫组织Ang-1、Ang-2、Tie-2m RNA的表达影响 |
| 4.10 Ang/Tie-2 通路与VEGF、螺旋动脉数量、P相关性分析 |
| 5.讨论 |
| 5.1 肾虚血瘀-胚胎着床障碍病证结合模型的建立 |
| 5.2 关于阳性对照药物阿司匹林 |
| 5.3 导法的机理及有效性、安全性分析 |
| 5.4 补肾活血方组方机理及方解 |
| 5.5 补肾活血方导法给药可调控Ang/Tie-2 信号通路相关因子,促进模型大鼠种植窗期子宫组织血管生成 |
| 5.6 补肾活血方导法给药可改善种植窗期肾虚血瘀-胚胎着床障碍模型大鼠子宫内膜容受性 |
| 结论 |
| 创新性 |
| 存在的问题与展望 |
| 参考文献 |
| 文献综述 女性不孕症的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在读期间公开发表的学术论文、专着及科研成果 |
（7）滋阴助阳解郁法联合维生素E对肾虚肝郁型RIF患者子宫内膜容受性及焦虑抑郁情绪的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分 理论研究 |
| 1. RIF的定义及常见病因 |
| 2. 现代医学对子宫内膜容受性的研究 |
| 2.1 ER的相关评估指标 |
| 2.2 现代医学改善子宫内膜容受性的治疗进展 |
| 3. 中医药对子宫内膜容受性的研究 |
| 3.1 中医药对子宫内膜容受性的认识 |
| 3.2 中医药改善子宫内膜容受性的治疗进展 |
| 4. RIF患者心理状况的研究 |
| 4.1 概述 |
| 4.2 焦虑抑郁情绪与不孕症的相关性研究 |
| 4.3 中医对不孕症患者焦虑抑郁情绪的认识及改善 |
| 第二部分 临床研究 |
| 1. 临床资料 |
| 1.1 病例来源 |
| 1.2 诊断标准 |
| 1.3 纳入标准 |
| 1.4 排除标准 |
| 1.5 剔除及脱落标准 |
| 2. 研究方法 |
| 2.1 病例分组 |
| 2.2 治疗方法 |
| 2.3 观察指标及方法 |
| 2.4 中医证候积分疗效判定标准 |
| 2.5 统计方法 |
| 3. 研究结果 |
| 3.1 一般资料的比较 |
| 3.2 不孕类型的比较 |
| 3.3 治疗前中医症候积分的比较 |
| 3.4 治疗前黄体中期血清E2、P的比较 |
| 3.5 治疗前黄体中期子宫内膜阴道超声指标的比较 |
| 3.6 治疗前SAS评分、SDS评分的比较 |
| 3.7 治疗前后中医积分的比较 |
| 3.8 治疗后中医证候积分疗效的比较 |
| 3.9 治疗前后黄体中期血清E2、P的比较 |
| 3.10 治疗前后黄体中期子宫内膜阴道超声指标的比较 |
| 3.11 治疗前后SAS评分、SDS评分的比较 |
| 第三部分 讨论 |
| 1. 立项依据 |
| 2. 方药解析及现代药理研究 |
| 3. 维生素E在本研究中作用依据 |
| 4. 本研究临床结果分析 |
| 4.1 中医症候积分及中医证候积分疗效 |
| 4.2 黄体中期血清E2及P水平 |
| 4.3 黄体中期子宫内膜阴道超声指标 |
| 4.4 SAS及SDS评分 |
| 5. 不足与展望 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 附录1 中英文缩略词表 |
| 附录2 肾虚肝郁症状评分表 |
| 附录3 焦虑自评量表(SAS) |
| 附录4 抑郁自评量表(SDS) |
| 攻读硕士学位期间取得的学术成果 |
| 致谢 |
（8）牛早期克隆胚胎H3K27me3修饰和转录异常的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 动物早期胚胎发育 |
| 1.1 脊椎动物早期卵裂 |
| 1.1.1 快速卵裂的胚胎 |
| 1.1.2 缓慢卵裂的胚胎 |
| 1.2 母源-合子转换 |
| 1.2.1 卵源性物质的降解 |
| 1.2.2 合子基因组激活 |
| 1.2.3 MZT的调控机制 |
| 第二章 体细胞核移植重编程 |
| 2.1 动物体细胞核移植的研究 |
| 2.2 核移植重编程中的分子事件 |
| 2.2.1 供体细胞核膜破裂 |
| 2.2.2 激活 |
| 2.2.3 染色质重构 |
| 2.2.4 表观修饰的擦除与重建 |
| 2.3 重编程效率的影响因素与改进方法 |
| 2.3.1 核移植供体细胞的选择 |
| 2.3.2 卵母细胞的选择与去核 |
| 2.3.3 克隆胚胎的体外培养 |
| 2.3.4 异常组蛋白标记的修正 |
| 2.3.5 异常DNA甲基化的修正 |
| 2.3.6 Xist基因异常表达的修正 |
| 第三章 牛克隆胚胎中H3K27me3 的异常表达及修正 |
| 3.1 材料和试剂 |
| 3.2 方法 |
| 3.2.1 原代细胞分离与培养 |
| 3.2.2 卵母细胞的准备 |
| 3.2.3 体外受精 |
| 3.2.4 体细胞核移植 |
| 3.2.5 孤雌激活 |
| 3.2.6 显微注射 |
| 3.2.7 细胞转染 |
| 3.2.8 RNA提取、反转录PCR和实时荧光定量PCR |
| 3.2.9 免疫荧光染色 |
| 3.2.10 蛋白免疫印迹 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 牛附植前IVF和 SCNT胚胎中H3K27me3 表达水平的检测 |
| 3.3.2 GSK343 处理导致牛克隆胚胎发育阻滞 |
| 3.3.3 EZH2 基因敲降抑制牛核移植胚胎发育能力 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 KDM6A过表达促进牛核移植重编程效率 |
| 4.1 材料和试剂 |
| 4.2 方法 |
| 4.2.1 动物组织RNA的提取 |
| 4.2.2 反转录PCR和实时定量PCR |
| 4.2.3 真核表达载体的构建 |
| 4.2.4 体外转录 |
| 4.2.5 显微注射 |
| 4.2.6 亚硫酸氢盐测序 |
| 4.2.7 RNA-seq |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 牛KDM6A基因过表达载体的构建 |
| 4.3.2 KDM6A促进牛核移植桑葚胚至囊胚转换 |
| 4.3.3 转录组测序数据的质量控制 |
| 4.3.4 转录组测序数据比对牛基因组数据 |
| 4.3.5 组间差异表达基因的生物学进程分析 |
| 4.3.6 KDM6A参与调节细胞粘附相关基因的表达 |
| 4.3.7 KDM6A参与调节X染色体连锁基因和印迹基因的表达 |
| 4.3.8 MBD3L2 敲降导致牛核移植重编程效率降低 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 第五章 牛核移植重编程中体细胞记忆的研究 |
| 5.1 材料和试剂 |
| 5.2 方法 |
| 5.2.1 核移植供体细胞的准备 |
| 5.2.2 体细胞核移植 |
| 5.2.3 孤雌激活 |
| 5.2.4 体外受精 |
| 5.2.5 RNA-seq |
| 5.3 结果 |
| 5.3.1 转录组测序数据原始读值的分布状态 |
| 5.3.2 转录组测序数据的比对结果 |
| 5.3.3 BFF和 IVF8C差异表达基因的生物学进程分析 |
| 5.3.4 IVF8C和 NT8C差异表达基因的生物学进程分析 |
| 5.3.5 活化记忆基因与沉默记忆基因的鉴定 |
| 5.3.6 BFF、IVF8C和 NT8C差异表达基因的生物学进程分析 |
| 5.3.7 供体细胞、体外受精胚胎和核移植胚胎整体转录水平的分析 |
| 5.3.8 牛核移植重编程中待选体细胞记忆基因的展示 |
| 5.4 讨论 |
| 5.5 小结 |
| 第六章 KDM5B通过对体细胞记忆基因的双向调控改善牛核移植重编程 |
| 6.1 材料和试剂 |
| 6.2 方法 |
| 6.2.1 动物组织RNA的提取 |
| 6.2.2 反转录PCR和实时定量PCR |
| 6.2.3 牛KDM5B基因过表达载体的构建 |
| 6.2.4 体细胞核移植 |
| 6.2.5 孤雌激活 |
| 6.2.6 体外转录 |
| 6.2.7 显微注射 |
| 6.2.8 RNA-seq |
| 6.3 结果 |
| 6.3.1 KDM5B真核表达载体的构建 |
| 6.3.2 KDM5B过表达改善牛核移植重编程效率 |
| 6.3.3 转录组测序数据的质量控制 |
| 6.3.4 转录组测序数据的比对结果 |
| 6.3.5 KDM5B改善牛克隆胚胎合子激活时期的转录重编程 |
| 6.3.6 KDM5B修正牛SCNT重编程中异常的体细胞记忆 |
| 6.3.7 特定体细胞记忆基因表达模式的展示 |
| 6.4 讨论 |
| 6.5 小结 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（9）体外人类胚胎法律属性及处置规则研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 一、引言 |
| 二、体外人类胚胎概述 |
| (一) 体外人类胚胎的概念 |
| (二) 关于体外人类胚胎法律属性及处置规则的争议 |
| 1. 体外人类胚胎法律属性的争议 |
| 2. 体外人类胚胎处置规则的争议 |
| 三、体外人类胚胎的法律属性分析 |
| (一) 体外人类胚胎法律属性的主要学说及各学说存在的缺陷 |
| 1. 主体说 |
| 2. 客体说 |
| 3. 中介说 |
| 4. 各学说存在的缺陷 |
| (二) 国外典型国家对体外人类胚胎法律属性的研究 |
| 1. 法国“生物人”概念的提出 |
| 2. 日本关于体外人类胚胎法律属性的探讨 |
| 3. 美国关于体外人类胚胎法律属性的讨论 |
| 4. 英国关于体外人类胚胎特殊法律属性的探讨 |
| 四、“人-物”二分格局下体外人类胚胎属于“人格物”的论证分析 |
| (一) 客体说下“人格物”学说的提出 |
| (二) 体外人类胚胎属于“人格物”的合理性分析 |
| 1. “人-物”二分法律框架的限制 |
| 2. 体外人类胚胎非法律意义上的“人” |
| 3. 体外人类胚胎属于“物” |
| 4. “人格物”学说可对体外人类胚胎进行人格尊严的特殊保护 |
| 五、对体外人类胚胎处置规则的探索 |
| (一) 国外典型国家体外人类胚胎处置规则研究 |
| 1. 法国:禁止体外人类胚胎交易 |
| 2. 日本:对体外人类胚胎的“软法化”保护 |
| 3. 美国:合同、同时合意及利益衡量处置模式 |
| 4. 英国:人类胚胎研究管理体制的建立 |
| (二) “人格物”学说下体外人类胚胎的处置规则 |
| 1. 婚姻关系存续期间对体外人类胚胎的处置 |
| 2. 离婚后对体外人类胚胎的处置 |
| 3. 受术夫妇一方死亡或双方死亡后对体外人类胚胎的处置 |
| 六、“人格物”学说下我国关于体外人类胚胎监管规则的构想 |
| (一) 体外人类胚胎的特别立法 |
| 1. 明确体外人类胚胎的法律属性及处置规则 |
| 2. 完善立法对辅助生殖技术违规操作的规制 |
| 3. 规范人工辅助生殖技术合同 |
| (二) 设立专门的监督部门 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（10）中医药多途径介入257例多中心拟再次IVF-ET前患者自然妊娠的疗效研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略词中英文对照表 |
| 引言 |
| 临床研究 |
| 1.病例来源 |
| 2.诊断标准 |
| 2.1 西医诊断标准 |
| 2.2 中医辨证标准 |
| 2.3 中医证候评分标准 |
| 3.病例选择标准 |
| 3.1 纳入标准 |
| 3.2 排除标准 |
| 3.3 剔除标准 |
| 3.4 脱落标准 |
| 3.5 终止试验条件 |
| 4.研究方法 |
| 4.1 研究流程图 |
| 4.2 治疗方案及方法 |
| 4.3 不良反应记录及处理 |
| 4.4 成功获孕患者的妊娠结局判定 |
| 4.5 临床观察指标 |
| 4.6 观察方法 |
| 4.7 疗效评定标准 |
| 4.8 安全性评价 |
| 5.统计分析 |
| 5.1 多中心统计分析数据集的选择 |
| 5.2 统计分析内容 |
| 5.3 统计分析方法 |
| 6.质量控制 |
| 7.研究结果 |
| 7.1 病例分布情况 |
| 7.2 一般资料比较 |
| 7.3 治疗结果 |
| 8.安全性分析 |
| 讨论 |
| 1.中医药多途径介入可提高拟再次IVF-ET前患者成功获孕率 |
| 1.1 中医药多途径介入对排卵障碍因素的影响 |
| 1.2 中医药多途径介入对盆腔因素的影响 |
| 1.3 中医药多途径介入对不明原因性不孕的影响 |
| 1.4 中医药多途径介入对免疫因素的影响 |
| 2.补肾疏肝活瘀法可以改善患者的临床症状 |
| 3.中医药多途径疗法分析 |
| 3.1 内治法 |
| 3.2 外治法 |
| 4.导师助孕治疗经验 |
| 4.1 异病同治,育肾疏肝 |
| 4.2 内外合治,多管齐下 |
| 4.3 身心同调,交接合时 |
| 结论 |
| 创新性 |
| 不足与展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 附录 |
四、体外受精-胚胎移植技术中精卵培养成功280枚的体会（论文参考文献）
- [1]生育利益的私法实践样态与保护[D]. 张小余. 黑龙江大学, 2021(09)
- [2]低水平血清泌乳素与PCOS患者代谢紊乱和IVF-ET结局的关系及相关机制研究[D]. 杨海燕. 山东大学, 2020(04)
- [3]促黄体素与雌激素在小鼠和山羊卵丘扩展中的作用及其机制研究[D]. 刘洁. 西北农林科技大学, 2020
- [4]着床汤治疗肾虚型反复种植失败的临床研究[D]. 姜美佳. 山东中医药大学, 2020(01)
- [5]内源性精子消融的动物模型制备及精原干细胞移植研究[D]. 张仙玉. 湖南农业大学, 2020
- [6]基于Ang/Tie-2信号通路研究补肾活血方导法孕前给药调控大鼠种植窗期子宫组织血管生成的分子机制[D]. 严莉. 成都中医药大学, 2020(02)
- [7]滋阴助阳解郁法联合维生素E对肾虚肝郁型RIF患者子宫内膜容受性及焦虑抑郁情绪的影响[D]. 宫慧君. 南京中医药大学, 2020(08)
- [8]牛早期克隆胚胎H3K27me3修饰和转录异常的研究[D]. 周川. 西北农林科技大学, 2019(08)
- [9]体外人类胚胎法律属性及处置规则研究[D]. 宁云. 云南大学, 2019(03)
- [10]中医药多途径介入257例多中心拟再次IVF-ET前患者自然妊娠的疗效研究[D]. 易满. 成都中医药大学, 2019