一、血管生成在肺纤维化发病机制中的意义（论文文献综述）
杨斓[1]（2021）在《基于生物信息学和网络药理学整合策略的人参平肺散干预特发性肺纤维化的机制研究》文中研究指明目的:特发性肺纤维化是一种慢性的致命性肺部疾病,主要影响老年群体,至今为止,其发病机制尚不完全明确,药物治疗手段有限。本研究应用生物信息学方法,通过特发性肺纤维化病人的转录组学数据探索疾病机制,比较与联系不同病人群体的疾病机制特征;从网络药理学的研究角度阐释古方人参平肺散对特发性肺纤维化的网络调控机制特点,比较与联系不同病人群体的作用机制;通过计算机模拟分子对接研究和体外实验研究,验证人参平肺散及其拆方干预特发肺纤维化的作用机制。方法:1.从美国国立生物技术信息中心GEO数据库下载GSE150910临床试验中肺移植手术病例的RNA测序原始数据,使用基因集富集分析（GSEA）挖掘特发性肺纤维化潜在的调控基因集,使用Reactome通路数据库富集分析关键通路与反应,使用R语言差异基因分析特发性肺纤维化与正常健康人的差异表达基因,分析关键基因的表达状态。2.使用加权基因共表达网络（WGCNA）分析挖掘特发性肺纤维化不同病人群体关联的基因模块,使用Reactome通路数据库富集分析不同病人群体的关键通路与反应,比较分析其共性与不同,使用文氏图分析分布在不同特征关联基因模块中的差异表达基因。3.基于网络药理学的研究策略,使用已发表研究、TCMSP、SwissTargetPrediction和Pharmapper等资源平台预测古方人参平肺散的潜在靶点,以GSEA分析得到的基因集作为疾病靶点,通过蛋白质相互作用网络和Reactome通路数据库预测人参平肺散干预特发性肺纤维化疾病的网络调控机制;以WGCNA分析得到的高、中年特征关联基因模块为疾病靶点,通过蛋白质相互作用网络和Reactome通路数据库分别预测人参平肺散对高、中年特征的网络调控机制。4.选择前述人参平肺散的网络调控机制中较为突出的TGF-β信号通路为研究对象。选择人参平肺散中的代表成分如 Ginsenoyne D、Ginsenoside 20-Glc-Rf、Notoginsenoside R1、Ginsenoside Rg1、6-Acetylacetonide、Caffeic acid、Timosaponin A1、Timosaponin B Ⅱ、Resveratrol、Rosmarinic acid、Xuelianlactone、Tectorigenin、sarsasapogenin、isomeranzin、glycyrol和Liquiritigenin作为配体,以TGF-β信号通路相关的靶点蛋白HDAC1、XPO1、HS90B、HS90A、A4、1433G、FYN、SRC、EGFR、LRRK2、ESR1、TGFB1、SMAD2、SMAD3和COL1A1为靶点,使用AutoDock进行拟分子虚对接,验证人参平肺散主要成分与靶点蛋白的结合能力。5.采用体外实验方法探讨人参平肺散全方及各拆方组（补益组、清肺组、化痰组）对TGF-β1诱导的人胚肺成纤维细胞MRC-5表型转化的影响。使用PCR和Western Blot方法检测TGF-β通路的成分Smad2/3、上皮间质转化标志α-SMA、细胞外基质1型胶原COL1A1和NADPH 4型氧化酶NOX4的基因、蛋白表达水平的变化。结果:1.GSEA分析得到9个基因集,分别为HALLMARK上皮间质转化、Kras下游信号、糖酵解、血管生成、G2/M检查点、凝血、Myc靶点V2版、E2F靶点和细胞连接基因集,以及对应的485个领先基因;疾病机制主要富集于细胞外基质、细胞衰老、细胞有丝分裂周期异常、凝血、DNA修复缺陷、细胞连接、糖类代谢和程序性死亡缺陷等;信号通路集中于Ras下游的PIK3/AKT、MAPK6/MAPK4通路,Ras家族通路Rho GTPase,酪氨酸激酶受体通路,TGF β家族和TP53转录调控通路等;衰老相关性分泌表型（SASP）因子主要为白介素4和白介素13家族。差异基因分析显示衰老表型相关基因CCND2、CDKN2A、TERT、GDF15、E2F8等均在疾病组显着上调。2.WGCNA分析富集得到疾病机制主要有细胞外基质、细胞应激、免疫、有丝分裂异常、凝血、细胞连接、肌肉收缩和糖脂蛋白代谢等机制,与GSEA分析的富集结果大部分吻合。WGCNA分析得到高龄特征（65岁以上）相关基因1076个,中年特征（55-65岁）相关基因422个,两组的机制都富集在细胞外基质、免疫系统、Ras下游信号系统、TP53细胞周期调控和TGF-β信号通路等。不同的是细胞周期异常、固有免疫和获得性免疫等反应在中年特征中更为显着;细胞衰老、未折叠蛋白质反应和内质网应激等在高龄特征中更显着富集。与高、中年特征关联的差异基因分别有203个和39个,其中有4组差异基因具有高度相关性,且与高龄特征相关,分别是（1）CDH2、SFRP1、SERPINE2、CXCL12、SFRP4和GEM,与上皮间质转化活动密切相关。（2）GREM1、VCAM1、PTHLH和RGS4,与上皮间质转化活动密切相关;（3）SLC7A5和HIF1A,与G2/M检查点活动有关;（4）UGT2B17和SLC12A3,与Kras下游信号密切相关。3.靶点整理共获取人参平肺散的药理靶点608个,与GSEA分析得到的基因集进行蛋白质相互作用网络分析得到核心靶点152个,机制主要涉及蛋白质翻译后修饰、细胞周期、DNA修复、TP53和FOXO为代表的转录调控活动、氧化应激和致癌基因诱导的衰老、SASP、固有凋亡途径、分子伴侣介导的自噬、细胞因子、固有免疫系统、雌激素受体介导的信号系统、Ras下游信号和TGF-β1信号通路等。人参平肺散成分与中、高年特征相关基因的核心干预靶点各有83个和90个,分别富集后,机制都主要涉及蛋白质翻译后修饰、细胞周期、TP53为主的转录调控活动、DNA修复、分子伴侣介导的自噬、氧化应激诱导的细胞衰老、SASP、免疫反应、Ras下游信号通路和TGF-β信号通路等。不同之处在于高龄组中金属蛋白酶的泛素化反应,SKP2介导的p27/p21的降解反应,获得性免疫反应尤为显着,此外致癌基因诱导的衰老、SASP和固有凋亡等也显着富集。中年组中FOXO、E2F6为主的转录调控活动和Toll样受体3层级反应为主的固有免疫反应尤为突出,此外囊泡运输、血小板聚集、焦亡和坏死也富集明显。4.经过计算机模拟对接验证,除了人参成分Ginsenoyne D的结合分数略低以外,其它成分与TGF-β通路成分HDAC1、XPO1、TGFB1、SMAD2和SMAD3蛋白的结合分数都达到了-5 kcal mol-1 以下。除知母成分Timosaponin AI、Timosaponin BⅡ对HS90A蛋白,人参成分Ginsenoyne D对HS90B和EGFR蛋白,桑白皮成分Xuelianlactone对LRRK2蛋白的结合分数较低,其它成分对TGF-β通路的间接作用靶点HS90B、HS90A、A4、1433G、FYN、SRC、EGFR、LRRK2和ESR1蛋白结合能力都达到了-5 kcal mol-1以下。所有成分与COL1A1蛋白结合能力都达到了-5 kcal mol-1以下。5.体外实验发现与模型组相比,全方组和各拆方组可明显降低α-SMA和COL1A1的mRNA和蛋白表达水平,提示全方组和各拆方组可以影响α-SMA和COL1A1基因的转录水平和转录后调控;全方组和清肺组可显着降低p-SMAD2的mRNA和蛋白表达水平,提示全方组和清肺组对该基因的转录水平和转录后调控都有明显疗效,补益组和化痰组对该基因的转录无明显调控作用;全方组和清肺组可显着降低p-SMAD3的mRNA和蛋白表达水平,补益组可显着降低mRNA水平,但蛋白表达无差异,说明全方组和清肺组对该基因的转录水平和转录后调控都有明显疗效,补益组对该基因的转录水平有明显调控作用,化痰组对该基因的转录无明显调控作用;全方组及各拆方组均可显着降低NOX4的mRNA和蛋白表达水平,说明全方组和各拆方组可以影响该基因的转录水平和转录后调控。结论:1.研究发现特发性肺纤维化病人的疾病机制与上皮间质转化、凝血、血管生成和糖酵解有关,并存在p16、TERT、CCND2和GDF15等细胞衰老表型,推测可能与Kras、Myc致癌基因诱导的衰老机制有关。研究既肯定了以往特发性肺纤维化异常基因与机制的研究,也发现了新的疾病机制特点和分子标志,如细胞周期异常、固有免疫和获得性免疫反应在55-65岁人群更为显着,细胞衰老、线粒体应激和未折叠蛋白质反应在65岁以上人群更为显着,得到了具有高度关联性,且与65岁以上特征相关的差异基因如GREM1、VCAM1、PTHLH和RGS4等。这些结果可能成为疾病的潜在靶点。2.人参平肺散可能通过蛋白质翻译后修饰、细胞周期、DNA修复、基因转录调控、氧化应激和致癌基因诱导的细胞衰老和免疫反应等机制干预特发性肺纤维化;可能通过金属蛋白酶降解,SKP2介导的p27/p21的降解反应和获得性免疫反应等机制干预65岁以上的病人;可能通过FOXO、E2F6的转录调控活动和固有免疫反应等机制干预55-65岁的病人。这些结果可能为进一步的实证研究提供理论依据。3.人参平肺散的代表成分与TGF-β信号通路中的成分蛋白和间接反应蛋白结合能力良好,为实证研究提供了理论基础。本章体外实验显示,人参平肺散全方和各拆方组可下调TGF-β1诱导的成纤维细胞间质标志α-SMA的升高,从而抑制成纤维细胞的表型转化。人参平肺散全方及拆方组均可减少TGF-β1诱导的成纤维细胞Ⅰ型胶原蛋白COL1A1的表达,从而抑制细胞外基质的沉积。人参平肺散全方和各拆方组均可下调TGF-β1诱导的成纤维细胞的促ROS生成酶NOX4的升高,从而抑制氧化应激压力。此外,人参平肺散全方和清肺组均可以抑制TGFβ的通路成分SMAD2/3的磷酸化。综上所述,人参平肺散可改善TGF-β1诱导后肺成纤维细胞的表型转化,可能是通过下调TGF-β通路中的SMAD2/3的磷酸化从而抑制了间质转化、细胞外基质沉积和氧化应激而作用。这些结果为进一步的实证研究提供了一定的依据。
王志超[2]（2021）在《陈皮碱性提取物调控内质网应激治疗肺纤维化的机制研究》文中进行了进一步梳理目的:肺纤维化是一种少见的间质性肺疾病,预后较差,治疗有限。团队前期研究发现,陈皮碱性提取物（Citrus Alkaline Extracts,CAE）能够发挥抗肺纤维化的作用,对肺成纤维细胞有明显抑制作用,但其抗肺纤维化的分子机制仍不完全明确,尤其对肺泡上皮细胞（Alveolar Epithelial Cell,AEC）的作用还有待探索。本研究首先进一步完成对CAE主要成分的鉴定,随后验证CAE对博来霉素（Bleomycin,BLM/Bleo）诱导的小鼠肺纤维化模型的治疗作用,之后利用组织样本及AECⅡ,体内体外探讨CAE对内质网应激（Endoplasmic Reticulum Stress,ERS）、ATF3/PINK1信号通路以及线粒体稳态的调节作用,最后探索AEC Ⅱ和肺成纤维细胞间的交互作用及可能参与这个过程的细胞介质。方法:1.CAE的制备、鉴定和质控:利用95%乙醇反复煎煮陈皮饮片,通过过滤、浓缩、分散、调酸、调减、萃取等步骤从陈皮乙醇煎液中提取黄色粉末CAE;通过UPLC-ESI-MS/MS对CAE进行检测并完成质量控制,获得CAE总离子流图,提取保留时间、母离子分子量、子离子分子量、相对分子质量、峰强度等信息,利用植物次生代谢物数据库Metware对CAE二级谱进行智能匹配完成物质定性分析,采用多反应监测模式检测物质相对含量完成相对定量分析;2.BLM诱导小鼠肺纤维化模型:将120只小鼠分为空白组、腰穿针气管插管模型组、留置针气管插管模型组和气管切开模型组,分别利用腰穿针气管插管造模法、留置针气管插管造模法和气管切开造模法注射BLM诱导肺纤维化模型,观察小鼠一般情况,通过H&E和Masson染色观察肺组织病理学改变,并通过ELISA检测肺组织羟脯氨酸水平;3.CAE对小鼠肺纤维化的抑制作用:将50只小鼠分为空白组、模型组、CAE低剂量组（32 mg/kg/d）、CAE中剂量组（64 mg/kg/d）和CAE高剂量组（96 mg/kg/d）,利用腰穿针气管插管法气管注射BLM诱导肺纤维化模型,并分别以不同浓度CAE的CMC-Na溶液灌胃21天,通过H&E、Masson以及天狼星红染色观察小鼠肺组织病理学改变,并通过Western Blot检测肺组织胶原沉积水平;4.CAE缓解AEC Ⅱ中ERS调控ATF3/PINK1通路:通过Western Blot检测ERS相关蛋白以及ATF3、PINK1在肺组织中的表达情况,通过免疫荧光观察肺组织中ERS标志物BiP以及ATF3、PINK1的变化及重叠情况,再通过免疫荧光观察肺组织中AEC Ⅱ标志物SPC以及ATF3、PINK1的变化及重叠情况;之后将A549细胞分为空白组,模型组,CAE低剂量组（50 μg/mL）,CAE中剂量组（100μg/mL）、CAE高剂量组（200 μg/mL）和阳性对照组（TUDCA,5 μg/mL）,利用衣霉素（Tunicamycin,TM,2μg/ml）干预 12 h 建立 ERS模型,分别用含不同浓度CAE的培养基干预48 h,通过Western Blot检测ERS相关蛋白以及ATF3、PINK1在A549细胞中的表达情况,再通过免疫荧光观察A549细胞中BiP以及ATF3、PINK1的变化及重叠情况;5.CAE通过ATF3/PINK1通路调控AEC Ⅱ线粒体稳态:首先通过JC-10检测A549细胞的线粒体膜电位水平,再通过ROS检测试剂盒检测A549细胞的ROS水平,从而观察A549细胞线粒体功能;之后通过shRNA质粒对A549细胞的ATF3及PINK1进行基因沉默,并再次通过JC-10和ROS检测试剂盒检测A549细胞的线粒体膜电位及ROS水平,从而观察A549细胞线粒体功能;6.CAE通过调控AEC Ⅱ影响肺成纤维细胞:A549细胞经TM和CAE干预后,更换不含CAE的低血清培养基继续培养72 h,收集细胞上清干预MRC5细胞,通过Western Blot检测MRC5细胞的胶原水平,并通过ELISA检测细胞上清中TGF-β1、IL-6及IL-10的水平。结果:1.CAE的制备、鉴定和质控:CAE为黄色粉末,平均产量约1.56 mg/kg;通过UPLC-ESI-MS/MS鉴定出315种物质,包括143黄酮类物质和32种生物碱类物质,其中80种物质的一级结构和二级结构完全匹配,可以确定为CAE的活性成分,包括47黄酮类物质和5种生物碱类物质,其中具有代表性的黄酮类物质有桔皮素、川陈皮素、芸香柚皮苷、新橙皮苷、甜橙素、橙皮苷,具有代表性的生物碱类物质有辛弗林、枸橼苦素Ⅰ、扁平桔碱Ⅰ、芽子碱;不同批次CAE样本间无明显差异;2.BLM诱导小鼠肺纤维化模型:在腰穿针气管插管模型组、留置针气管插管模型组和气管切开模型组三组中,气管切开模型组体重下降最为明显,存活率也最低（60%）,相比而言,留置针气管插管模型组存活率是最高的（90%）;腰穿针气管插管模型组和气管切开模型组肺泡炎及肺纤维化程度较高,且第21天最明显,而留置针气管插管模型组较低;腰穿针气管插管模型组和气管切开模型组羟脯氨酸含量显着高于空白组（P<0.001）;3.CAE对小鼠肺纤维化的抑制作用:CAE干预组肺泡结构改善,炎症浸润减少,胶原沉积减轻,尤以CAE高剂量组最为明显;和模型组相比,CAE高剂量组的肺泡炎评分显着降低（P<0.05）,肺纤维化评分及胶原半定量分析也显着降低（P<0.001）,同时COLlα1和COL3蛋白表达均显着降低（P<0.05）;4.CAE缓解AEC Ⅱ中ERS调控ATF3/PINK1通路:在肺组织中,CAE干预组和模型组相比,BiP、PERK、p-eIF2α、ATF4和ATF3表达均明显降低,PINK1则明显升高,且呈浓度依赖性,其中CAE高剂量组差异最显着（P<0.05;P<0.001;P<0.01;P<0.001;P<0.01;P<0.01）,且BiP和ATF3的免疫荧光变化有较大重叠,ATF3和PINK1的免疫荧光变化均与SPC有较大重叠。在A549细胞中,BiP、PERK、p-eIF2α、ATF4和ATF3表达均明显降低,PINK1则明显升高,且呈浓度依赖性,其中CAE高剂量组差异最显着（P<0.05;P<0.001;P<0.01;P<0.001;P<0.01;P<0.01）,且 BiP 和 ATF3 的免疫荧光变化有较大重叠;5.CAE通过ATF3/PINK1通路调控AEC Ⅱ线粒体稳态:在A549细胞中,CAE干预组和模型组相比,线粒体膜电位明显降低,呈浓度依赖性,其中CAE高剂量组差异最显着（P<0.001）,ROS浓度也明显降低,呈浓度依赖性,其中CAE高剂量组差异最显着（P<0.01）;ATF3沉默后,和模型组相比,CAE干预组和阳性对照组PINK1表达未见显着升高,线粒体膜电位虽略有升高,但没有显着性差异;PINK1沉默后,线粒体膜电位虽略有升高,但同样没有显着性差异;6.CAE通过调控AEC Ⅱ影响肺成纤维细胞:在MRC5细胞中,CAE干预组和模型组相比,COLlαl和COL3表达均有明显降低,且呈浓度依赖性,其中CAE高剂量组有显着差异（P<0.05;P<0.05）;在细胞上清中,CAE干预组和模型组相比,TGF-β1、IL-6和IL-10表达均有明显降低,且呈浓度依赖性,其中CAE高剂量组有显着差异（P<0.001;P<0.05;P<0.05）。结论:1.CAE的活性成分主要为黄酮类物质和生物碱类物质;2.CAE可以缓解AEC Ⅱ的ERS,并通过ATF3/PINK1信号通路调节AEC Ⅱ线粒体稳态;3.CAE通过减少AEC Ⅱ中TGF-β1等细胞因子的分泌,间接降低肺成纤维细胞的胶原表达,最终缓解肺纤维化。
赵凤莲[3]（2021）在《MiR-21通过调控PDCD4/JNK/c-Jun信号通路促进糖尿病肺损伤的机制研究》文中提出研究背景:间质性肺疾病（ILD）是一大类进行性恶化性疾病,严重的威胁着全球人类的健康。由于其病因和发病机制尚不完全明确,目前尚无特效药物,死亡率甚至高于许多恶性肿瘤,造成了严重的社会负担和经济负担。ILD的临床分类主要包括已知原因的ILD、特发性间质性肺炎、肉芽肿性ILD和罕见ILD。其中,已知原因ILD的病因多而复杂,包括遗传、肿瘤、药物、治疗和疾病相关因素,可能达到200余种,糖代谢异常就是重要的病因之一。糖尿病是一种慢性进展性的代谢紊乱性疾病,其发病率逐年持续上升,根据国际糖尿病联盟的估计,2035年全球糖尿病患者将达到6亿。糖尿病并发症一直是学者们关注的研究热点和诊疗重点。糖尿病可以引起全身性的改变,增加了糖尿病患者的死亡率和致残率,已广泛引起临床医生和患者的关注。但是人们很少关注糖尿病肺病,尤其是糖尿病并发肺损伤的实质。由于肺脏毛细血管网储备丰富,糖尿病相关的ILD发病初期呼吸系统症状并不明显,同时易与心脑血管并发症的表现混淆,极易被临床医生和患者忽视,因此,糖尿病相关ILD一旦发病,症状一般较重,进展迅速,严重威胁着糖尿病患者的生存期。近十年来,我们课题组一直致力于研究糖尿病肺部并发症,证实了糖尿病相关肺损伤主要表现为肺间质性病变,包括炎性细胞浸润、胶原含量增加、肺泡间隔增宽和组织纤维化表现等,与博来霉素诱导的大鼠肺纤维化模型相似,首次阐述了糖尿病与肺部炎症和纤维化的关系,提出了肺脏是糖尿病重要靶器官的实验室证据。有关糖尿病相关肺损伤的发病机制尚未完全明确,涉及到炎症、氧化应激和纤维化等多个方面。随着基因组学和蛋白质组学的发展,我们对于miRNAs有了深入的认识。miRNAs是一类小单链的非编码RNA（nc RNA）,长度约为21-25个核苷酸,不能直接参与蛋白质的合成,对于基因的表达具有转录后调节功能,同时也可以调节细胞的增殖、分化和凋亡。有研究发现在糖尿病动物模型中miR-21的表达是增高的,抑制miR-21的水平可减轻糖尿病心脏和肾脏的并发症,这提示miR-21在糖代谢异常相关疾病的发病过程中发挥着重要的作用,有报道称miR-21可靶向结合并调节PDCD4的表达,而PDCD4可通过JNK信号通路参与多种疾病的发生和发展,但是在糖尿病相关肺损伤中,miR-21对于PDCD4/JNK信号通路的调节尚无相关报道。本研究旨在通过糖尿病动物模型,应用Jnk1敲除技术和JNK抑制剂,研究PDCD4/JNK信号通路在糖尿病肺损伤形成中的作用,同时应用miR-21抑制剂,观察抑制miR-21对于糖尿病肺部炎症和纤维化的影响,并探索miR-21在促进糖尿病肺损伤形成中的调控作用,为未来糖尿病相关ILD的治疗提供理论依据。研究方法:1.通过应用JNK抑制剂,观察抑制JNK表达及活化对糖尿病小鼠肺损伤以及miR-21表达水平的影响:选择野生型C57BL/6J小鼠,应用小剂量连续多次腹腔注射链脲霉素的方法建立糖尿病模型,待小鼠成模后给予JNK抑制剂（SP600125）进行干预,应用RT-PCR和Western Blot方法检测小鼠肺组织的炎症因子、促纤维化因子、氧化应激因子、抗氧化因子、miR-21、PDCD4、JNK、p-JNK的表达情况,探讨JNK抑制对糖尿病小鼠肺组织炎症和纤维化程度以及miR-21的表达水平的影响。2.通过JNK基因敲除技术,观察下调JNK表达对糖尿病小鼠肺损伤以及miR-21表达水平的影响:选择Jnk1敲除小鼠和野生型C57BL/6J小鼠制作糖尿病模型,应用RT-PCR和Western Blot方法检测小鼠肺组织的炎症因子、促纤维化因子、氧化应激因子、抗氧化因子、miR-21、PDCD4、JNK、p-JNK的表达情况,观察糖尿病小鼠肺组织炎症和纤维化程度,以及miR-21的表达水平。3.通过抑制miR-21,探讨miR-21对糖尿病小鼠肺损伤影响以及对PDCD4/JNK信号通路的调控:选择野生型C57BL/6J小鼠制作糖尿病模型,使用miR-21 antagomir抑制miR-21的表达,通过RT-PCR和Western Blot方法检测小鼠肺组织miR-21、PDCD4、JNK、p-JNK的表达情况,观察糖尿病小鼠肺组织炎症和纤维化程度,以及miR-21下游蛋白PDCD4和JNK的表达情况。研究结果:1.SP600125可明显下调糖尿病小鼠肺组织的炎症和纤维化指标,同时,糖尿病小鼠肺组织miR-21的表达水平明显增高,而应用SP600125干预后可进一步提高miR-21的表达水平。2.Jnk1敲除小鼠糖尿病组的肺组织炎症因子（TNFα和IL-6）和促纤维化因子（TGFβ1和PAI1）较野生型小鼠明显减低,同时JNK和p-JNK表达减低,与PDCD4表达趋势相反,进一步提示降低JNK的表达可减轻糖尿病肺部炎症和纤维化的程度,而PDCD4可能对JNK的活化具有负向调节作用。3.DM组小鼠肺组织的TNFα和TGFβ1较对照组明显增高,给予miR-21antagomir干预后降低;同时DM组小鼠肺组织的miR-21表达水平增高,PDCD4表达水平减低,应用miR-21 antagomir进行干预后PDCD4的表达升高,说明在糖尿病小鼠肺组织中miR-21也可能对PDCD4具有负向调节作用。结论:1.糖尿病诱发的小鼠肺损伤主要病理表现为炎症和纤维化,而抑制JNK或敲除Jnk1可在一定程度上改善糖尿病小鼠肺组织的炎症反应和纤维化程度。2.miR-21的表达与糖尿病小鼠肺组织炎症和纤维化程度呈正相关,抑制miR-21可减轻糖尿病小鼠肺部炎症和纤维化程度。3.miR-21过表达可能通过抑制PDCD4的表达,进一步加强JNK信号通路的活化,促进糖尿病肺组织炎症和纤维化的发生（相关信号通路需要细胞实验进一步验证）,抑制miR-21的表达可减轻糖尿病小鼠肺组织损伤,这可能成为糖尿病相关ILD的潜在治疗靶点。创新点:1.通过应用信号通路相关基因（Jnk1）敲除小鼠结合JNK抑制剂（SP600125）两种方法相互印证,证明了JNK信号通路在糖尿病肺损伤中的作用,使结果更可靠。2.应用miR-21靶向模拟抑制剂,证明了miR-21与PDCD4/JNK信号通路之间的相关性,进一步阐明了miR-21促进糖尿病肺损伤的可能发生机制,为糖尿病相关ILD的治疗提供了新的思路。
皮娜[4]（2021）在《黄藤素对小鼠急性肺损伤和肺纤维化的防治作用研究》文中认为[目的]研究黄藤素（Palmatine Hydrochloride,Pal）对脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）诱导小鼠急性肺损伤（Acute lung injury,ALI）和博莱霉素（Bleomycin,BLM）诱导小鼠肺纤维化（Pulmonary fibrosis,PF）的防治作用,初步探讨其作用机制。[方法]1.采用一次性气管内滴入LPS诱导小鼠ALI模型及滴入BLM诱导小鼠PF模型。2.称量小鼠肺组织重量,计算肺系数大小;肺组织常规HE染色、Masson染色,NF-κB p65免疫组织化学染色,显微镜下观察小鼠肺组织病理形态学变化,评估肺组织炎症、纤维化程度,NF-κBp65蛋白表达情况。3.BCA（bicinchoninic acid）试剂盒测定肺泡灌洗液（BALF）总蛋白含量,ELISA（Enzyme Linked Immunosorbent Assay）检测 BALF 中肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白细胞介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）、白细胞介素-8（interleukin-8,IL-8）、转化生长因子-β1（TGF-β1）含量。4.计数BALF中总细胞数,进行细胞涂片,HE染色观察炎症细胞情况。5.采用试剂盒测定小鼠肺组织羟脯氨酸（Hydroxyproline,Hyp）、超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase,SOD）、丙二醛（Malondialdehyde,MDA）的含量。6.蛋白质印迹法（Western blot）检测小鼠肺组织中NF-κB p65、TGF-β1、Smad2/3、JNK、Erk1/2、p38、E-cadherin、Collagen Ⅰ、α-SMA、CTGF 蛋白表达情况。[结果]1.LPS诱导的ALI小鼠肺组织出现明显的炎症反应,肺泡结构破坏、大量炎性细胞浸润,组织学炎症评分明显升高,黄藤素能够明显减轻ALI小鼠肺组织炎症反应,肺组织炎症评分降低。2.LPS诱导的ALI小鼠肺系数明显升高,黄藤素能够明显降低ALI小鼠肺系数。3.LPS诱导的ALI小鼠BALF中总蛋白浓度、细胞数量和炎症细胞因子TNF-α、IL-8、IL-Iβ含量明显升高,黄藤素能够明显降低ALI小鼠BALF中总蛋白浓度、细胞数量和炎症细胞因子TNF-α、IL-8、IL-Iβ含量。4.LPS诱导的ALI小鼠肺组织NF-κB p65蛋白表达明显上调,并被激活向细胞核移位,黄藤素能够明显下调ALI小鼠肺组织NF-κB的表达,抑制NF-κB激活。5.BLM诱导的PF小鼠造模后14天肺组织可见明显的炎症反应,胶原纤维沉积不明显,造模后28天肺组织炎症反应减轻,但有大量胶原纤维沉积,肺组织羟脯氨酸含量明显升高。组织学评分显示BLM诱导的PF小鼠肺泡炎和纤维化评分明显升高,黄藤素能明显减轻PF小鼠早期肺部炎症反应和后期胶原纤维沉积,降低羟脯氨酸含量和肺泡炎和纤维化评分。6.BLM诱导的PF小鼠肺系数明显升高,肺组织NF-κB p65蛋白表达明显上调,BALF中总蛋白浓度、总细胞数以及炎症细胞因子TNF-α、TGF-β1、IL-Iβ含量明显升高,黄藤素能够明显降低PF小鼠肺系数,下调NF-κB p65蛋白表达,降低BALF中总蛋白浓度、总细胞数以及炎症细胞因子含量。7.BLM诱导的PF小鼠肺组织内源性抗氧化剂SOD活力明显降低,脂质过氧化产物MDA含量明显升高,黄藤素能够明显升高PF小鼠肺组织SOD活力,降低MDA含量。8.BLM诱导的PF小鼠肺组织TGF-β 1/Smad信号通路TGF-β1、smad2/3和MAPK信号通路p38、JNK、Erk1/2及其下游CTGF、Collagen I蛋白表达明显上调,黄藤素能够明显下调PF小鼠肺组织这些蛋白的表达。9.BLM诱导的PF小鼠肺组织上皮标志物E-Cadherin蛋白表达明显下调,间质细胞标志物α-SMA蛋白表达明显上调,黄藤素能够明显上调PF小鼠肺组织E-Cadherin蛋白表达,下调α-SMA蛋白表达。[结论]1.黄藤素能明显改善LPS致小鼠ALI病变,抑制ALI小鼠肺部炎症反应,有一定的剂量依赖关系。2.黄藤素能降低LPS致ALI小鼠BALF中蛋白渗出、总细胞数、TNF-α、IL-8及IL-1β含量,下调肺组织中NF-κB蛋白表达,抑制NF-κB激活。3.黄藤素抗ALI的作用机制与抑制NF-κB信号通路有关。4.黄藤素能显着抑制BLM诱导的PF小鼠肺部炎症、抑制氧化应激,减轻肺组织纤维化病变,有一定剂量依赖关系。5.黄藤素抗PF的作用机制为:（1）通过下调NF-κB蛋白表达,抑制NF-κB信号通路下游炎症细胞因子TNF-α、IL-1β释放而抑制炎症反应;（2）通过降低肺组织中MDA含量,提高肺组织中SOD活性而抑制氧化应激;（3）通过下调肺组织中 TGF-β1、Smad2/3、p38、Erk1/2、JNK、CTGF 和Collagen Ⅰ蛋白表达,抑制TGF-β1/Smad通路和TGF-β1/MAPK信号通路;（4）通过下调肺组织上皮细胞标志物E-Cadherin和上调间质细胞标志物α-SMA抑制肺上皮-间质转化,干预纤维化形成。
满君[5]（2021）在《从三焦“膜性四通管道”论治肺结节病的理论及临床研究》文中认为背景与目的肺结节病是以非干酪样坏死性上皮细胞肉芽肿为病理特征的系统性疾病,西医治疗以糖皮质激素为主,但激素治疗停药后极易复发,且副作用明显,中医药治疗肺结节病具有一定优势,通化方是在姜良铎教授三焦“膜性四通管道”理论基础上创立的治疗肺结节病的基本方。本研究第一部分从循证学证据确定糖皮质激素治疗肺结节病的确切疗效和对其预后及复发的影响,第二部分梳理总结姜良铎教授三焦“膜性四通管道”理论和在肺结节病临床诊治中的重要指导价值。第三部分为临床研究观察通化方加减治疗肺结节病的疗效和对其远期预后的影响。第四部分通过网络药理学分析通化方的作用机制和有效性。方法1糖皮质激素治疗肺结节病的Meta分析:通过检索国内外文献数据库,筛选符合纳入标准的糖皮质激素治疗肺结节病的临床随机对照试验（randomized controlled trials,RCTs）,采用Meta分析方法,主要观察指标为治疗有效率、随访有效率、复发率、肺功能及血清血管紧张素转化酶（serum angiotensin converting enzyme,SACE）。2从三焦“膜性四通管道”论治肺结节病的理论研究:结合古文献研究及近现代医家对三焦的论述,系统梳理三焦形质、功能及辨证相关内容。其次重点论述姜良铎教授三焦“膜性四通管道”理论。最后阐述该理论在肺结节病诊治中的重要指导价值,根据此理论创立“通化方”为治疗肺结节病的基本方。3通化方加减治疗肺结节病的临床研究:采用适用于少见病的前瞻性病例系列研究,纳入病情进展或复发的Ⅱ期肺结节病患者,予以通化方加减治疗,疗程6个月,随访期为6个月。治疗前记录患者一般资料和临床资料,根据SACE水平将其分为SACE升高组和正常组,比较两组中胸部HRCT、理化检查指标、中医证候积分的差异,及SACE与上述临床资料的相关性。疗效评价方面,比较患者治疗和随访前后的综合疗效、胸部HRCT、理化检查指标、中医证候积分和中医有效率,同时监测通化方的安全性。4通化方治疗肺结节病的网络药理学研究:提取“通化方”及肺结节病的作用靶点,构建通化方-肺结节病-靶点调控网络并对发挥核心作用的靶基因蛋白进行数据挖掘,最后通过对核心靶点基因蛋白进行基因本体（gene ontology,GO）功能和京都基因与基因组百科全书（kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG）信号通路富集分析得出通化方作用于肺结节病的疗效机制。与目前公认的肺结节病发病机制进行对比,探讨其有效性。结果1 Meta分析:本研究最终纳入8个RCTs,均以英文形式发表。结果显示:治疗后,糖皮质激素治疗组有效率高于对照组（P<0.05）,随访期间,治疗组有效率及复发率与对照组相比均未见明显差异（P>0.05）;治疗后治疗组患者肺功能FVC、DLCO高于对照组（P<0.05）,FEV1和SACE在两组间未见显着差异（P>0.05）。2理论研究:三焦形质是争论焦点,三焦功能论述主要集中在三焦主气化和主水液方面。三焦辨证在湿热病及其他复杂疾病治疗方面均有深远影响。姜良铎教授从三焦“膜性四通管道”理论认识肺结节病,提出三焦为人体器官的被膜、包膜、淋巴、间质组织等脏腑间联系的四通管道,三焦郁滞不通则气机气化不利、不能化生护卫精微,津液和血液运行障碍,形成痰瘀、痰瘀互结形成结节,并以膜性四通管道为途径流窜全身,治疗当疏利三焦。导师在此理论基础上创立通化方作为治疗肺结节病基本方。3临床研究:3.1一般资料:治疗前共入组31例患者,男性7例,女性24例,31例患者平均年龄56.97±1.07岁,平均病程为1.91±0.06年;肺外系统病变包括皮下结节、眼部侵润、双侧腮腺肿大;肺浸润HRCT评分上肺区和中肺区肺浸润HRCT评分高于下肺区（P<0.05）。3.2临床资料比较:治疗前完成SACE检测的共26人,其中SACE升高者有12例,正常者有14例,SACE升高组与正常组相比肺浸润HRCT评分与胸部HRCT总分升高,理化检查中淋巴细胞减低（P<0.05）。相关性分析发现SACE水平与肺浸润HRCT评分、胸部HRCT总分、淋巴细胞存在相关性（P<0.05）。3.3临床疗效比较:①综合疗效分析:通化方加减治疗6个月综合疗效有效率为66.7%,随访6个月综合疗效有效率为63.6%,随访期间有效率与治疗后有效率比较未见明显降低（P>0.05）。②胸部HRCT 比较:治疗6个月和随访6个月与治疗前比较,肺浸润HRCT评分、淋巴结肿大HRCT评分、胸部HRCT总分均有明显降低（P<0.01）;随访6个月与治疗6个月比较,肺浸润HRCT评分、淋巴结肿大HRCT评分、胸部HRCT总分未见统计学差异（P>0.05）。治疗6个月淋巴结肿大有效率高于肺浸润有效率（P<0.05）。③肺浸润类型及程度分级比较:肺浸润类型包括肺结节影、磨玻璃影与实变影,治疗与随访前后,三种类型所占比例无统计学差异（P>0.05）。治疗6个月与治疗前比较,结节影与磨玻璃影的HRCT评分降低（P<0.05或P<0.01）;随访6个月与治疗前比较,结节影HRCT评分降低（P<0.01）;随访6个月与治疗6个月比较,三者HRCT评分差异均无统计学意义（P>0.05）。治疗与随访前后患者肺浸润HRCT评分均分为轻度组和中度组,两组所占比例在治疗与随访前后无统计学差异（P>0.05）。④理化检查比较:治疗6个月、随访6个月与治疗前比较,SACE、血沉降低,淋巴细胞升高（P<0.05）;随访6个月与治疗6个月比较,淋巴细胞降低、单核细胞升高（P<0.05）;治疗6个月、随访6个月与治疗前三个阶段比较,SACE、血沉、淋巴细胞所占异常比例具有统计学差异（P<0.05）。⑤肺功能比较:治疗前共16例完成肺功能检测,肺功能通气类型以弥散伴小气道功能减低所占比例最高,未进行治疗和随访后疗效比较。⑥中医证候比较:全组与三焦郁滞、痰瘀痹阻、气阴亏虚组患者治疗6个月和随访6个月与治疗前和治疗1个月比较证候总积分显着降低（P<0.01）;三焦郁滞、痰瘀痹阻、湿热蕴肺组治疗6个月和随访6个月与治疗前比较证候总积分降低（P<0.05或P<0.01）;三焦郁滞、痰瘀痹阻、阳气亏虚组随访6个月与治疗前比较证候总积分降低（P<0.05）。⑦中医疗效比较:治疗1个月、治疗6个月与随访6个月3个阶段比较,中医有效率具有显着差异（P<0.01）;治疗6个月和随访6个月与治疗1个月比较有效率升高（P<0.01）;随访6个月与治疗6个月比较有效率未见差异（P>0.05）。⑧中医各症状比较:治疗1个月与治疗前比较,脘腹胀闷症状积分降低（P<0.05）;治疗6个月和随访6个月与治疗前比较胸闷、皮下结节、乏力、咳痰、口干咽燥、畏寒肢冷、潮热盗汗、大便溏泄症状积分均见降低（P<0.05）。⑨不良反应:在治疗和随访过程中,入组患者均未出现严重不良反应。4网络药理学研究:通过构建通化方-肺结节病-靶点调控网络发现白介素-6（interleukin 6,IL-6）、基质金属蛋白酶 9（matrixmetalloproteinase 9,MMP9）、半胱氨酸蛋白酶 3（caspase 3,CASP3）、趋化因子配体2（chemokine ligand 2,CCL2）为关键作用靶点蛋白,通过GO功能和KEGG信号通路富集分析发现通化方主要干预Hepatitis B信号通路、辅助性T细胞17（T helper cell,Th17）细胞分化、肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor,TNF）信号通路、白介素-17（interleukin 17,IL-17）信号通路。IL-6、MMP9、CASP3、CCL2 基因,Th17 细胞分化、TNF信号通路、IL-17信号通路是目前公认的肺结节病发病相关靶点蛋白与机制,故证实了通化方治疗肺结节病的有效性。结论糖皮质激素治疗肺结节病有一定的疗效,但对远期预后及复发未见益处,通化方是在姜良铎教授三焦“膜性四通管道”理论基础上创立的治疗肺结节病基本方,临床疗效确切,可改善肺部浸润、淋巴结肿大和皮下结节、降低疾病活动性与严重性相关理化指标、改善中医证候积分,通过随访发现对远期预后较好,降低复发率,进一步采用网络药理学分析同样证实了通化方的有效性。
田丽[6]（2020）在《基于血管新生机制探讨miR-126对肺纤维化大鼠VEGF调控及加味补阳还五汤的干预作用》文中研究指明目的:肺纤维化是许多不同病因肺间质性疾病的常见结局,其典型特征是细胞外基质蛋白过度沉积、血管生成和重构、肺实质不可逆瘢痕形成,导致气体交换减少和肺功能受损。本研究旨在观察博来霉素诱导的大鼠肺纤维化病程中血管新生情况,探讨加味补阳还五汤通过miR-126和VEGF在体内和体外对肺纤维化大鼠的保护作用及其机制,拟为肺纤维化的治疗提供新思路新方法。方法:1.体内实验:健康雄性清洁级SD大鼠,年龄7周,体重180±20g。随机分为对照组,模型组,强的松组,补阳还五汤组和加味补阳还五汤组。利用博来霉素气管滴入法建立肺纤维化模型。造模后24小时,对照组给予生理盐水灌胃,强的松组给予强的松混悬液（4.2mg/kg?d）灌胃,补阳还五汤组给予补阳还五汤液（4.9g/kg?d）灌胃,加味补阳还五汤组予加味补阳还五汤液（7.3g/kg?d）灌胃。各组动物均在14天、28天随机分批处死,取大鼠肺组织,HE染色观察肺组织病理变化,Masson染色观察肺组织中胶原含量、分布和形态学变化,免疫组化Ⅷ因子染色标记肺血管,显微镜下计算微血管数目,测定微血管密度（MVD）,RT-PCR法检测肺组织中miR-126及VEGF m RNA的水平,Western blot法及免疫组化法检测肺组织VEGF蛋白表达,免疫组化法比较各组肺组织中HIF-lα蛋白表达情况。2.体外实验一:在TGF-β1刺激的MRC-5中转染miR-126模拟物或抑制剂及其阴性对照物,探究miR-126与VEGF的关系。MRC-5随机分为6组:对照组,模型组,miR-126 mimics组,miR-126 mimics NC组,miR-126 inhibitor组,miR-126 inhibitor NC组。48h后收集细胞,采用MTT法检测细胞增殖。对照组、模型组应用RT-PCR法检测α-SMA和fibronectin基因表达,验证造模效果。6组均用RT-PCR法检测miR-126、VEGF m RNA水平,Western blot法比较各组VEGF、collagen I、collagen III蛋白水平,免疫荧光法观察collagen I、collagen III表达。二:探究加味补阳还五汤含药血清对TGF-β1诱导的MRC-5 miR-126、HIF-lαm RNA及VEGF的影响。MRC-5随机分为4组:对照组,模型组,正常血清组,加味补阳还五汤含药血清组。RT-PCR法检测MRC-5中miR-126、HIF-lαm RNA及VEGF m RNA的水平,Western blot法比较各组中VEGF和collagen I表达情况。结果:1.体内实验:（1）HE及Masson染色结果显示,加味补阳还五汤可以显着减轻纤维化大鼠肺组织炎症及纤维化改变,且疗效优于补阳还五汤;（2）Ⅷ因子染色结果显示,博来霉素诱导大鼠肺纤维化病程中存在病理性血管新生亢进,微血管密度增加;加味补阳还五汤可以显着抑制纤维化大鼠肺组织病理性血管新生;（3）加味补阳还五汤可以降低纤维化大鼠肺组织中miR-126、VEGF及HIF-1α蛋白的表达。2.体外实验:（1）纤维化细胞模型中,miR-126、VEGF m RNA及蛋白表达显着增加;（2）miR-126 mimics可升高miR-126、VEGF m RNA及蛋白表达水平,并促进胶原蛋白合成;miR-126 inhibitor可抑制miR-126、VEGF m RNA及蛋白表达,并降低胶原蛋白合成;（3）加味补阳还五汤含药血清可降低TGF-β1所致MRC-5胶原蛋白I合成;（4）加味补阳还五汤含药血清可降低TGF-β1所致MRC-5中miR-126、HIF-1αm RNA、VEGF m RNA及蛋白表达。结论:加味补阳还五汤对博来霉素所致肺纤维化大鼠具有明显的保护作用,且疗效优于补阳还五汤,其作用机制可能与抑制miR-126/VEGF表达从而抑制肺组织中病理性血管新生相关。
刘学[7]（2020）在《肺纤维化大鼠全转录组测序分析及加味补阳还五汤调控Notch/Jagged通路抗纤维化的机制研究》文中研究表明[目的]肺纤维化,也称之为肺间质纤维化（fibrosispulmonary,PF）,是一种弥漫性肺部炎性疾病,由多种原因引起,病变部位主要累及肺间质以及肺泡上皮细胞和肺血管。主要病理改变有肺泡结构紊乱、弥漫性肺泡炎和肺纤维化,临床表现为进行性加重的呼吸困难,刺激性干咳,其发病特点主要包括限制性的通气功能障碍、低氧血症以及慢性、进行性、弥漫性肺间质的纤维化。临床发病率、死亡率高,高度影响到人们的生命健康安全,当下研究人员并未开发出十分有针对性的治疗药物。肺纤维化大鼠全基因组高通量测序分析发现,Notch1/Jagged1信号通路在肺纤维化中广泛存在。研究发现一些中药复方或单药能通过激活Notch1/Jagged1通路调节肺纤维化的发生发展。本实验基于国家自然科学基金“基于miRNA探讨加味补阳还五汤干预肺纤维化大鼠微血管新生的分子机制及物质基础研究（编号:81874442）”的研究结果,通过实验验证加味补阳还五汤对Notch这一通路的干预作用,进而在人胚肺成纤维细胞（MRC-5）通过TGF-β刺激造模前后分别给予加味补阳还五汤干预,应用si-RNA技术干预Notch/Jagged1通路表达,探讨加味补阳还五汤抗肺纤维化的具体作用机制及特点。[方法]1.肺纤维化大鼠全转录组高通量测序分析。选取12只7周SD大鼠随机分成两组,对照组和实验组各6只,模型组进行纤维化造模,空白组不予处理,处理28天后,断椎处理大鼠,取肺部组织分别保存于液氮和4%多聚甲醛固定液中,用于后续RNA测序和病理切片观察。切片HE染色证实肺纤维化造模成功与否。通过高通量测序对实验组和对照组进行测序和分析,分别对lnc RNAs,mRNAs,circ RNAs和miRNAs的表达模式进行了分析,同时对差异表到的ce RAN进行了筛选,同时进行GO和KEGG富集分析挖掘与纤维化相关的通路及基因。2.加味补阳还五汤对肺纤维化大鼠肺组织病理形态的实验观察。分为空白组,模型组,中药（加味补阳还五汤）组,强的松组。利用博来霉素复制肺纤维化大鼠模型。于第14天、28天分别观察各组大鼠的一般情况,肺组织大体形态改变,HE染色、masson染色情况,Westen blot、RT-PCR法检测大鼠肺组织中Notch1、Jagged1、Hes-1蛋白及mRNA的表达。3.加味补阳还五汤干预Notch信号通路对MRC-5细胞的调节机制。应用RNA干扰技术（siRNA）筛选出干扰效果最好的靶位点,分为正常细胞组、siRNA沉默Notch1组、单纯TGF-β刺激组、siRNA沉默后TGF-β刺激组以及加味补阳还五汤干预1h后给予TGF-β处理组、Notch1siRNA转染48小时后加入加味补阳还五汤1小时后给予TGF-β刺激组。细胞生化检测siRNA沉默Notch后细胞内Jagged1、Hes-1蛋白的表达;Western blot、RT-PCR法检测各分组细胞内Notch1蛋白及mRNA的表达水平。[结果]1.肺纤维化大鼠全转录组高通量测序分析。在本研究中,通过高通量测序对实验组和对照组进行测序和分析,对lnc RNAs,mRNAs,circ RNAs和miRNAs的表达模式进行了测序分析,同时对差异表达的非编码RNA进行了筛选,并进行GO和KEGG富集分析挖掘相关信号通路及基因。全转录组测序分析发现在肺纤维化大鼠中,Notch signaling pathway信号通路被显着富集到（图2-6B）,其相关基因表达发生了明显的变化,猜测在肺纤维化的发生中,Notch信号通路具有重要的调节作用,抗纤维化药物发挥作用可能与干预这一通路密切相关,具体的调控机制需进一步进行验证,为后续实验提供了有利证据。2.加味补阳还五汤对肺纤维化大鼠肺组织病理形态的实验观察。2.1 HE染色示:与空白组相比较,各给药组第14d时肺组织依然保持相对完整,组织内部表现出轻微的水肿,相关炎性细胞的浸润情况明显,病变状态加味补阳还五汤组较强的松组轻;而发展到第28d时相关细胞表现出增生,胸膜等位置出现了胶原蛋白沉积状况,并能够观察到明显的肺纤维化趋势,加味补阳还五汤组纤维化程度较强其他组明显降低。2.2 Masson染色状态:与空白组对照,实验鼠的支气管的胶原层厚度很小,可以观察到一定颜色的纤维分布状态。而对于模型组来说,在第14d时内部不同肺泡的宽度变大,而在肺间质等位置都能够观察到成纤维细胞的出现,存在一定程度的蓝色形式的沉积情况;在第28d肺泡的结构呈现出高度破坏,肺间质维持可观察到束状或者其他形式的纤维沉积情况,发展为代表性的纤维化状态。加味补阳还五汤组肺组织纤维化程度较模型组明显降低,与强的松组相比亦明显改善。2.3 Westen blot结果显示,与空白组比较,模型组大鼠肺组织内Notch1、Jagged1、Hes-1蛋白明显升高（P<0.01）,其中第28d蛋白的表达量升高最为明显;加味补阳还五汤组与强的松组各时间点Notch1、Jagged1、Hes-1蛋白的表达量较模型组显着下降,其中加味补阳还五汤组第28天下降最明显,与强的松组相比具有统计学意义（P<0.05）。药物组各时间点蛋白的表达量和模型组同期相比均降低。2.4 RT-PCR法结果可以看出,与正常组相比,模型组、强的松组、加味补阳还五汤组Notch1、Jagged1、Hes-1mRNA含量水平都显着提升,组内两两对比差异性明显,具有统计学意义（0.05<P）;和模型组进行对比,相应地通过强的松、加味补阳还五汤干预后,Notch1、Jagged1、Hes-1mRNA相对表达量有所下降,其中以加味补阳还五汤组干预28天下降最明显,组内两两比较差异性明显（P<0.05）,具有统计学意义。强的松组与加味补阳还五汤组同期组内相比,具有统计学意义。3.加味补阳还五汤干预Notch信号通路对MRC-5细胞的调节机制。3.1细胞生化检测siRNA沉默Notch后细胞内Jagged1、Hes-1蛋白的表达,结果提示:与正常细胞组相比,siRNA沉默Notch1组,细胞内Jagged1、Hes-1的表达出现明显降低,应用TGF-β造模后,细胞内Jagged1、Hes-1的表达出现明显升高,与模型组相比,应用Notch沉默后再给予TGF-β刺激后,细胞内Jagged1、Hes-1的表达有所下降,但是较正常组偏高。相比之下,较加味补阳还五汤组来说,不管有无运用siRNA沉默,和空白组方面进行比较,Jagged1、1-Hes的含量都出现了明显的升高,不过运用siRNA沉默组的数值明显低一些。3.2 Western blot、RT-PCR检测发现与正常细胞组相比,siRNA沉默Notch1组、siRNA沉默后TGF-β刺激组细胞内Notch1表达均明显降低。与TGF-β刺激组相比,siRNA沉默Notch1组、siRNA沉默后TGF-β刺激组中细胞内Notch1表达降低更明显。加味补阳还五汤干预1h后给予TGF-β处理组、Notch-siRNA转染48小时后加入加味补阳还五汤1小时后给予TGF-β处理组中细胞内Notch1表达降低,其中后者明显低于单纯TGF-β刺激组。[结论]加味补阳还五汤能抑制Notch/Jagged1信号通路,下调Notch1信号表达水平以发挥保护作用,进而改善MRC-5细胞的纤维化水平,猜测加味补阳还五汤通过干预Notch/Jagged1信号转导通路来发挥抗纤维化作用,并且有一定的预保护作用。
李斐然[8]（2020）在《温补肾阳法干预肺纤维化大鼠PEDF、bFGF表达的实验研究及临床分析》文中研究指明目的:肺纤维化是许多病因不同的间质性肺疾病的共同结局,该病目前发病机制不明,缺乏疗效确切的治疗方法及药物。导师XX教授临床上善用温补肾阳法治疗肺纤维化,目前已有诸多研究表明,温补肾阳类药物,具有对抗肺纤维化的作用,为肺纤维化诊疗提供了新的思路。本实验拟通过临床数据分析进一步验证其临床应用的合理性,并通过动物实验探讨温补肾阳法对肺纤维化大鼠血管新生的作用机制,希望能够为临床治疗肺纤维化提供依据。方法:搜集山东中医药大学附属医院肺病科XX主任专家门诊2019年9月--2019年12月诊断为肺纤维化,证型为肺肾亏虚的门诊病历搜集55例,建立数据库,基于数据库运用Excel、SPSS等软件,对XX教授温补肾阳法的临床应用进行分析研究。通过动物实验研究,喂养大鼠36只,随机分为6组:空白组（A组）、强的松组（B组）、仙灵脾组（I组）、仙茅组（H组）、“二仙组”（K组）、模型组（X组）适应性喂养2天,除空白组外其余各组大鼠采用BLM溶液气管滴入方法建立肺纤维化大鼠模型。造模后分别予相应药物进行干预,空白组不予任何处理。造模后第14天每组随机处死3只大鼠,每组取相同部位大鼠肺组织,观察其外观和病理切片,取其血液标本。造模后第28天处死剩余大鼠,每组取肺组织观察外观和切片,ELISA法测定其微血管密度（MVD）及血清中色素上皮源性因子（PEDF）、碱性成纤维细胞因子（bFGF）表达水平。结果:1.临床分析:本研究共使用药物47种,累计中药使用590频次;本次统计出现的最常用的中药为仙灵脾,对使用的47种中药进行药类分析显示补虚药应用频率最高,补气药与补阳药占补虚药的前两位。对使用的47种中药进行性味归经显示所占药味前三位为甘、苦、辛,所占药性前三位为温、寒、平,药物归经前三位为肺、肾、脾。2.动物实验数据分析:实验第28d与14d对比,激素组和仙茅组的PEDF指标在干预前后有显着差异,PEDF水平均显着下降（P<0.05）。实验第14天,与空白组、仙灵脾组比较,二仙组bFGF表达水平显着降低（P<0.05）。与仙茅组、仙灵脾组对比,激素组、模型组bFGF水平显着升高（P<0.05）。28天与14天对比,28天二仙组bFGF表达水平较14天bFGF表达水平明显升高（P<0.05）,28天仙灵脾组bFGF表达水平明显下降（P<0.05）。同时间点各组大鼠免疫组化MVD表达比较如下:与空白组比较,模型组在第14天、第28天,肺纤维化模型组肺组织MVD值表达显着且逐渐降低（P<0.01）。实验14天,与模型组比较,激素组、二仙组MVD值表达显着降低（P<0.01）,仙灵脾MVD值表达降低（P<0.05）。与仙灵脾组比较,二仙组MVD值表达显着降低（P<0.01）。实验28天,与模型组比较,仙灵脾组肺组织MVD值表达升高（P<0.05）、二仙组肺组织MVD值表达显着升高（P<0.01）。实验28天与14天相比,仙灵脾组MVD值表达升高（P<0.05）、二仙组肺组织MVD值表达显着升高（P<0.05）3.HE染色、Masson染色观察结果:空白组大鼠不同时间点肺组织形态未见明显病变。模型组:肺泡壁增厚,肺泡壁较多蓝色着染胶原纤维增生,出现明显肺间质纤维化;造模后28d肺间质纤维化程度进一步加重。与同期模型组相比,仙茅组、仙灵脾组和二仙组、激素组肺泡炎症和肺间质纤维化程度明显降低。与其它药物组相比,不同时间点二仙组肺泡炎症和肺间质纤维化程度降低。结论:温补肾阳法在肺纤维化治疗中效果显着且常用,温补肾阳法可通过调控血管生成相关因子、改善肺纤维化微循环障碍、改善受累肺组织纤维化病理表现、抗凝等方面减轻肺组织纤维化程度,仙灵脾联合仙茅作为温补肾阳法的代表药对,相较于仙灵脾单药、仙茅单药、单纯强的松效果更为显着,其温补肾阳功效更甚,更有利于肺纤维化的治疗。
李欣展[9]（2020）在《血清VEGF、Leptin水平与特发性肺纤维化的相关性研究》文中研究说明研究背景:特发性肺纤维化（idiopathic pulmonary fibrosis,IPF）是一种病因及发病机制不明的慢性进展性纤维化性肺间质疾病,以肺泡结构破坏继以纤维组织代替为主要病理特点,临床表现为渐进性呼吸困难和以弥散功能障碍为主的肺功能的破坏,寻常型间质性肺炎（Usual interstitial pneumonitis,UIP）为其主要影像学表现。该病起病隐匿,发病率逐年增加,治疗手段有限,预后较差,中位生存时间仅为3-5年。血管生成近年来已被证实为IPF形成过程的重要环节,血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）作为一种重要的血管生成因子,能够通过促进新血管的生成,增加血管通透性、调节纤维化相关细胞因子表达等过程促进IPF的进展。瘦素（leptin）是由白色脂肪细胞、肝脏星形细胞、肺泡上皮细胞等合成和分泌的一种非糖基化蛋白质,作为一种脂肪因子,除调节摄食及代谢外,也在外周器官的炎症、免疫等方面发挥作用,已有研究证实其与肝纤维化、心肌细胞纤维化、脾纤维化等多种脏器纤维化的发病过程关系密切,目前瘦素与IPF的关系在国内外缺少相关研究。研究发现瘦素可直接作用于内皮上的相应受体使其磷酸化从而激活转录因子,上调包括VEGF在内的内源性血管增生刺激因子,进而间接促进血管的新生。本研究将通过检测IPF患者血清VEGF和瘦素的表达水平,分析二者之间及与相关临床参数之间的关系,探讨其在IPF疾病发病机制中的作用及临床使用价值。方法:IPF组选取自2018年12月至2019年12月在山东大学第二医院住院治疗的IPF患者42例,同时选取20例山东大学第二医院体检中心的健康体检者作为对照组。收集并整理两组研究对象的基本临床资料,包括年龄、性别、吸烟史、身体质量指数。采集两组研究对象的空腹静脉血,并通过酶联免疫吸附法（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）测定血清瘦素与VEGF浓度水平。IPF患者于入院24小时内完成全程C-反应蛋白（C-reactive protein,CRP）、白细胞计数（white blood count,WBC）、中性粒细胞百分比（neutrophilpercent,N%）、动脉血氧分压（Pa02）及二氧化碳分压（PaC02）,完成肺功能指标如肺总量（TLC）、一氧化碳弥散量（DLco）,以及胸部高分辨CT（HRCT）等的测定;同时我们也收集健康对照组CRP、WBC、N%的指标。本研究所有计量数据均使用SPSS 26.0版本统计软件进行相关性分析。结果:1.IPF组患者血清VEGF、瘦素检测水平均高于健康对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。IPF组患者血清VEGF、瘦素水平之间呈现较弱的正相关（r=0.377,P<0.05）。2.IPF组患者血清VEGF水平与HRCT评分、PaCO2、WBC呈正相关（P<0.05）;与Pa02、TLC（%）、DLco（%）呈负相关（P<0.05）;与CRP、N%无明显相关性;IPF组患者血清瘦素水平与HRCT评分、PaCO2、WBC呈正相关（P<0.05）;与Pa02、TLC（%）、DLco（%）呈负相关（P<0.05）;与 CRP、N%无明显相关性。结论:IPF患者血清瘦素、VEGF的高表达,及表达水平之间的相关性,提示这两种细胞因子可能在IPF的发生发展中具有互相协同的促进作用,因之二者或可作为IPF治疗的新靶点进行更深入的研究;二者表达水平与HRCT、肺功能、血气分析等临床指标的相关性,提示在评估IPF疾病严重程度时或许可将其作为参考指标。
董环[10]（2020）在《肺纤方治疗IPF临床观察及基于Wnt/β-catenin通路和EMT探讨其抗大鼠肺纤维化机制》文中进行了进一步梳理特发性肺纤维化（IPF）为发生于肺脏的慢性、进行性、纤维化性、原因不明的间质性肺炎。缺乏有效的治疗手段,预后差。目前西医治疗以激素、吡非尼酮、尼达尼布等为主,均有一定效果但不能有效控制逆转病情进展,且存在不良反应,而中医药治疗IPF有一定优势。肺纤方为姜良铎教授治疗IPF经验方,本研究分别从临床观察和动物实验两部分探讨肺纤方治疗IPF临床效果和作用机制。目的临床观察部分通过观察肺纤方加减、肺纤方加减联合激素、肺纤方加减联合吡非尼酮三种方法治疗肺肾亏虚、痰瘀阻络证IPF患者的临床效果,以期探讨肺纤方的临床疗效及治疗IPF相对较优的方法。动物实验部分通过博来霉素建立大鼠肺纤维化模型,予肺纤方进行干预,通过观察其对肺组织病理、Wnt/β-catenin信号通路及上皮间质转化（EMT）影响方面,探讨肺纤方干预肺纤维化的作用机制。方法临床观察:预先制定《特发性肺纤维化肺肾亏虚、痰瘀阻络证患者治疗前后临床观察表》,将符合纳入标准的49例IPF患者按就诊时是否服用激素或吡非尼酮分为三组,进行中药肺纤方疗效观察,不再人为进行随机或盲法对照,这是中医医院真实的中医药治疗肺纤维化的方法,大部分患者是西医院诊断已经采取西药治疗的患者。已服用激素者,继续激素治疗并按疗程给予减量,同时给予口服肺纤方加减,称为肺纤方+激素组,共17例;已服用吡非尼酮者,继续吡非尼酮治疗,同时给予口服肺纤方加减,称为肺纤方+吡非尼酮组,共14例;均未服用激素或吡非尼酮者,只给予肺纤方加减治疗,称为肺纤方组,共18例。观察治疗疗程6个月。治疗前记录患者基本资料,包括姓名、性别、年龄、病程、吸烟史、基础疾病、病情程度情况。治疗前后详细记录患者主要症状、主要体征、肺功能、胸部HRCT、mMRC呼吸困难指数积分情况,观察对比三组治疗效果。动物实验:选取120只Wistar大鼠（雄性,体重200±20g）,常规饲养一周后,按随机数字表分为6组,对照组、模型组、泼尼松组、肺纤方高、中、低剂量组,每组20只。博来霉素3mg/kg气管滴注诱导肺纤维化大鼠模型,造模次日常规灌胃相应药物进行干预,每日一次。造模后第14、28天分两批处理动物,观察记录各组大鼠一般状态;HE染色、Masson染色观察肺组织肺泡炎和肺纤维化程度;Western blot检测肺组织中 wnt3a、β-catenin、WIF1、GSK-3β、p-GSK-3β、α-SMA、Collagen Ⅰ及E-cadherin蛋白表达;RT-PCR 检测肺组织中 wnt3a、β-catenin、WIF1、LRP、α-SMA 及 E-cadherin的mRNA表达。结果1 临床观察1.1患者基本资料三组共纳入49例患者,3例脱落,最终纳入分析46例。三组治疗前在性别、年龄、病程、HRCT病情程度上均无统计学差异（p>0.05）,有可比性。1.2综合疗效三组综合疗效经Kruskal-Wallis H检验,无统计学差异（p>0.05）,提示三组治疗IPF综合疗效无明显差别。其中,肺纤方组综合疗效有效率为68.75%,肺纤方+激素组为56.25%,肺纤方+吡非尼酮组为78.57%。1.3主要症状改善喘憋、咳嗽、咯痰方面,三组均可减轻其症状（p<0.05或p<0.01）;改善气短方面,肺纤方+吡非尼酮组效果较好（p<0.05）。1.4主要体征改善Velcro啰音、紫绀方面,三组均可减轻其体征（p<0.05或p<0.01）;而杵状指三组均未见明显改善（p>0.05）。1.5肺功能改善TLC%方面,肺纤方组效果较好（p<0.05）;改善DLCO%方面,肺纤方+吡非尼酮组效果较好（p<0.05）;而VC%三组均未见明显改善（p>0.05）。1.6 胸部 HRCT改善磨玻璃影方面,三组均可减轻其征象（p<0.01）;改善网格影方面,肺纤方+吡非尼酮组效果较好（p<0.05）;而蜂窝影三组均未见明显改善（p>0.05）。1.7mMRC呼吸困难指数评分改善mMRC呼吸困难指数方面,肺纤方组、肺纤方+吡非尼酮组效果较好（p<0.05或p<0.01）;而肺纤方+激素组未见明显改善（p>0.05）。2动物实验2.1大鼠肺组织病理学观察HE染色:第14、28天,与对照组相比,模型组肺泡炎评分显着升高（p<0.01）,第14天时更为明显;与模型组相比,各治疗组肺泡炎均减轻,泼尼松组、肺纤方高、中剂量组明显减轻（p<0.05或P<0.01）。Masson染色:第14、28天,与对照组相比,模型组肺纤维化评分显着升高（p<0.01）,第28天时更为明显;与模型组相比,各治疗组肺纤维化程度均减轻,肺纤方中剂量组明显减轻（p<0.05 或p<0.01）。2.2肺纤方对肺纤维化大鼠Wnt/β-catenin信号通路的影响蛋白表达:第14、28天,与对照组相比,模型组大鼠肺组织中wnt3a、β-catenin、p-GSK-3β蛋白表达增加（p<0.05或p<0.01）,GSK-3β蛋白表达降低（p<0.05）;与模型组相比,肺纤方中剂量组下调wnt3a、β-catenin蛋白表达,上调WIF1、GSK-3β蛋白表达最明显（p<0.05或p<0.01）。基因表达:第14、28天,与对照组相比,模型组大鼠肺组织中wnt3a、β-catenin、LRP的mRNA表达增加（p<0.05或p<0.01）,WIF1的mRNA表达降低（p<0.05或p<0.01）;与模型组相比,肺纤方高、中剂量组下调wnt3a、β-catenin、LRP的mRNA表达和上调WIF1的mRNA表达最明显（p<0.05或P<0.01）。2.3肺纤方对肺纤维化大鼠EMT的影响蛋白表达:第14、28天,与对照组相比,模型组大鼠肺组织中α-SMA、Collagen Ⅰ的蛋白表达增加（p<0.01）,E-cadherin蛋白表达降低（P<0.05或p<0.01）;与模型组相比,肺纤方高剂量组下调α-SMA、Collagen Ⅰ蛋白表达,肺纤方中剂量组上调E-cadherin 蛋白表达最明显（p<0.05 或p<0.01）。基因表达:第14、28天,与对照组相比,模型组大鼠肺组织中α-SMA的mRNA表达增加（p<0.01）,第14天E-cadherin的mRNA表达较对照组有下降趋势,但无统计学差异（p>0.05）,第28天E-cadherin的mRNA表达较对照组降低（p<0.05）;与模型组相比,第14、28天肺纤方高剂量组下调α-SMA和上调E-cadherin的mRNA表达最明显（p<0.05 或p<0.01）。结论1 临床观察1.1肺纤方组、肺纤方+激素组、肺纤方+吡非尼酮组均可提高IPF患者的临床疗效,以肺纤方+吡非尼酮组效果最好,但也显示肺纤方是治疗肺肾亏虚、痰瘀阻络证IPF患者的有效方剂。1.2改善主要症状、体征方面,三组疗效相当;改善患者肺功能方面,肺纤方+吡非尼酮组效果较优;改善患者胸部影像方面,肺纤方+激素组、肺纤方+吡非尼酮组效果较优;改善患者mMRC呼吸困难指数方面,肺纤方组、肺纤方+吡非尼酮组效果较优。2动物实验2.1肺纤方可改善博来霉素诱导的肺纤维化大鼠肺泡炎和肺纤维化。肺纤方高、中剂量组尤为显着,且彼此差异不明显,说明肺纤方剂量过大并不明显增强效果,故肺纤方中剂量最为理想。2.2肺纤方可通过调控Wnt/β-catenin信号通路和EMT中相关分子的蛋白及mRNA表达干预肺纤维化。抑制Wnt/β-catenin信号通路活化及EMT可能是肺纤方干预大鼠肺纤维化的作用机制之一。
二、血管生成在肺纤维化发病机制中的意义（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、血管生成在肺纤维化发病机制中的意义（论文提纲范文）
（1）基于生物信息学和网络药理学整合策略的人参平肺散干预特发性肺纤维化的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 综述 |
| 综述一 特发性肺纤维化发病机制的研究进展 |
| 综述二 生物信息学和网络药理学的主要研究方法及原理 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第一章 基于特发性肺纤维化转录组数据的生物信息学研究 |
| 第一节 特发性肺纤维化的基因集富集研究 |
| 1 特发性肺纤维化的GSEA基因集富集分析 |
| 2 特发性肺纤维化关键基因的差异表达基因分析 |
| 3 讨论 |
| 第二节 特发性肺纤维化不同临床特征的加权基因共表达网络研究 |
| 1 特发性肺纤维化的基因共表达特征 |
| 2 特发性肺纤维化不同临床特征的基因共表达特征 |
| 3 特发性肺纤维化的分子特征 |
| 4 讨论 |
| 本章小结 |
| 参考文献 |
| 第二章 人参平肺散干预特发性肺纤维化的网络药理学研究 |
| 第一节 人参平肺散干预特发性肺纤维化的网络调控机制研究 |
| 第二节 人参平肺散干预中、高年龄特发性肺纤维化的网络调控机制比较研究 |
| 1 人参平肺散成分干预特发性肺纤维化高龄特征的网络机制 |
| 2 人参平肺散成分干预特发性肺纤维化中年特征的网络机制 |
| 3 讨论 |
| 第三节 人参平肺散对特发性肺纤维化调控机制的虚拟对接研究 |
| 1 以TGF β信号通路为例的通路靶点选择 |
| 2 人参平肺散靶点的计算机模拟对接研究 |
| 3 讨论 |
| 本章小结 |
| 参考文献 |
| 第三章 人参平肺散干预TGF-β_1诱导肺成纤维细胞MRC-5细胞表型转化的机制研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 本章小结 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 1 主要内容和结果 |
| 2 创新点 |
| 3 问题与展望 |
| 附录 中英文缩略词对照表 |
| 攻读博士期间取得的学术成果 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（2）陈皮碱性提取物调控内质网应激治疗肺纤维化的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 绪论 |
| 第一章 肺纤维化中西医研究进展 |
| 第一节 中医对肺纤维化的认识 |
| 1. 中医病名 |
| 2. 病因病机 |
| 3. 辨证论治 |
| 4. 方药进展 |
| 第二节 西医对肺纤维化的认识 |
| 1. 疾病简介 |
| 2. 流行病学 |
| 3. 诊断方法 |
| 4. 治疗方法 |
| 4.1 吡非尼酮 |
| 4.2 尼达尼布 |
| 4.3 吡非尼酮和尼达尼布 |
| 5. 未来展望 |
| 5.1 精准医疗 |
| 5.2 新的靶点 |
| 第三节 ERS与肺纤维化的关系 |
| 1. 肺纤维化发病机制 |
| 2. ERS的分子机制 |
| 3. ERS与肺纤维化 |
| 3.1 上皮细胞 |
| 3.2 成纤维细胞 |
| 3.3 巨噬细胞 |
| 4. 通过ERS治疗肺纤维化 |
| 第二章 陈皮碱性提取物制备、鉴定与质控 |
| 1. 前言 |
| 2. 材料与方法 |
| 2.1 实验药材 |
| 2.2 实验试剂 |
| 2.3 实验耗材 |
| 2.4 实验仪器 |
| 2.5 实验方法 |
| 3. 结果 |
| 3.1 CAE的制备 |
| 3.2 CAE的鉴定 |
| 3.3 CAE的质控 |
| 4. 讨论 |
| 第三章 陈皮碱性提取物对小鼠肺纤维化的作用 |
| 第一节 BLM诱导小鼠肺纤维化模型 |
| 1. 前言 |
| 2. 材料与方法 |
| 2.1 实验动物 |
| 2.2 实验试剂 |
| 2.3 实验耗材 |
| 2.4 实验仪器 |
| 2.5 实验方法 |
| 3. 结果 |
| 3.1 造模后小鼠体重变化 |
| 3.2 造模后小鼠存活率 |
| 3.3 造模后肺组织病理变化 |
| 3.4 造模后肺组织羟脯氨酸水平变化 |
| 4. 讨论 |
| 第二节 CAE对小鼠肺纤维化的作用 |
| 1. 前言 |
| 2. 材料与方法 |
| 2.1 实验动物 |
| 2.2 实验试剂 |
| 2.3 实验耗材 |
| 2.4 实验仪器 |
| 2.5 实验方法 |
| 3. 结果 |
| 3.1 CAE对肺组织肺泡炎水平的影响 |
| 3.2 CAE对肺组织纤维化水平的影响 |
| 3.3 CAE对肺组织胶原沉积水平的影响 |
| 3.4 CAE对肺组织胶原蛋白水平的影响 |
| 4. 讨论 |
| 第四章 陈皮碱性提取物抗肺纤维化的分子机制 |
| 第一节 CAE对AEC Ⅱ中ERS及ATF3/PINK1的调控作用 |
| 1. 前言 |
| 2. 材料与方法 |
| 2.1 实验细胞 |
| 2.2 实验试剂 |
| 2.3 实验耗材 |
| 2.4 实验仪器 |
| 2.5 实验方法 |
| 3. 结果 |
| 3.1 CAE对肺组织ERS相关蛋白水平的影响 |
| 3.2 CAE对A549细胞ERS相关蛋白水平的影响 |
| 3.3 CAE对肺组织ATF3/PIINK1共表达的影响 |
| 3.4 CAE对A549细胞ATF3/PINK1共表达的影响 |
| 4. 讨论 |
| 第二节 CAE对AEC Ⅱ中线粒体稳态的调控作用 |
| 1. 前言 |
| 2. 材料与方法 |
| 2.1 实验细胞 |
| 2.2 实验试剂 |
| 2.3 实验耗材 |
| 2.4 实验仪器 |
| 2.5 实验方法 |
| 3. 结果 |
| 3.1 CAE对A549细胞线粒体膜电位水平的影响 |
| 3.2 CAE对A549细胞ROS水平的影响 |
| 3.3 A549细胞shRNA质粒载体构建 |
| 3.4 A549细胞ATF3 & PINK1基因沉默 |
| 3.5 CAE对ATF3-/- A549细胞中PINK1及线粒体膜电位水平的影响 |
| 3.6 CAE对PINK1-/- A549细胞中线粒体膜电位水平的影响 |
| 4. 讨论 |
| 第三节 CAE通过AEC Ⅱ对肺成纤维细胞的影响 |
| 1. 前言 |
| 2. 材料与方法 |
| 2.1 实验细胞 |
| 2.2 实验试剂 |
| 2.3 实验耗材 |
| 2.4 实验仪器 |
| 2.5 实验方法 |
| 3. 结果 |
| 3.1 CAE对MRC5细胞胶原蛋白水平的间接影响 |
| 3.2 CAE对A549细胞上清细胞因子水平的影响 |
| 4. 讨论 |
| 总结 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 附录一: 缩略词表 |
| 附录二：文献综述 内质网应激：特发性肺纤维化的潜在治疗方向 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（3）MiR-21通过调控PDCD4/JNK/c-Jun信号通路促进糖尿病肺损伤的机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 缩略词表 |
| 第1章 绪论 |
| 第2章 文献综述 |
| 2.1 间质性肺疾病概述 |
| 2.2 糖尿病相关间质性肺疾病的研究进展 |
| 2.3 糖尿病相关间质性肺疾病的可能发生机制 |
| 2.4 miRNAs/miR-21在肺纤维化发生及发展中的研究进展 |
| 2.4.1 miRNAs与肺纤维化 |
| 2.4.2 miR-21在肺纤维化发生和发展中的作用 |
| 2.5 PDCD4在疾病发生发展中的研究进展 |
| 2.5.1 PDCD4的简介 |
| 2.5.2 PDCD4的上游调控因子 |
| 2.5.3 PDCD4的下游信号转导通路 |
| 2.5.4 PDCD4与疾病 |
| 2.6 JNK在疾病发生发展中的研究进展 |
| 2.6.1 JNK简介 |
| 2.6.2 JNK活化与疾病 |
| 第3章 JNK抑制剂对糖尿病小鼠肺损伤及miR-21表达水平的影响 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 实验动物 |
| 3.1.2 实验仪器 |
| 3.1.3 实验试剂 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 动物模型的建立 |
| 3.2.2 H&E及Masson染色 |
| 3.2.3 蛋白印迹 |
| 3.2.4 实时荧光定量PCR |
| 3.3 统计学分析 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.4.1 JNK抑制剂对糖尿病小鼠体重和血糖的影响 |
| 3.4.2 JNK抑制剂对糖尿病小鼠肺组织炎症的影响 |
| 3.4.3 JNK抑制剂对糖尿病小鼠肺组织纤维化程度的影响 |
| 3.4.4 JNK抑制剂对糖尿病小鼠肺组织氧化-抗氧化平衡的影响 |
| 3.4.5 JNK抑制剂对糖尿病小鼠肺组织Nrf2、HO1和NQO1等因子的影响 |
| 3.4.6 JNK抑制剂对糖尿病小鼠肺组织JNK、p-JNK和 c-Jun表达水平的影响 |
| 3.4.7 JNK抑制剂对糖尿病小鼠肺组织miR-21表达水平的影响 |
| 3.4.8 JNK抑制剂对糖尿病小鼠肺组织PDCD4表达的影响 |
| 3.5 讨论 |
| 3.6 结论 |
| 第4章 JNK基因敲除对糖尿病小鼠肺损伤及miR-21表达水平的影响 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.1.1 实验动物 |
| 4.1.2 实验仪器 |
| 4.1.3 实验试剂 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 动物模型的建立 |
| 4.2.2 Jnk1 敲除小鼠的鉴定 |
| 4.2.3 H&E及Masson染色 |
| 4.2.4 蛋白印迹 |
| 4.2.5 实时荧光定量PCR |
| 4.3 统计学分析 |
| 4.4 实验结果 |
| 4.4.1 Jnk1敲除小鼠的鉴定 |
| 4.4.2 Jnk1敲除对糖尿病小鼠体重和血糖的影响 |
| 4.4.3 Jnk1敲除对糖尿病小鼠肺组织炎症的影响 |
| 4.4.4 Jnk1敲除对糖尿病小鼠肺组织纤维化的影响 |
| 4.4.5 Jnk1敲除对糖尿病小鼠肺组织氧化-抗氧化平衡的影响 |
| 4.4.6 Jnk1敲除对糖尿病小鼠肺组织PDCD4/JNK信号通路和miR-21的表达情况的影响 |
| 4.5 讨论 |
| 4.6 结论 |
| 第5章 抑制miR-21 对糖尿病小鼠肺损伤及PDCD4/JNK信号通路的影响 |
| 5.1 实验材料 |
| 5.1.1 实验动物 |
| 5.1.2 实验仪器与试剂 |
| 5.1.3 主要实验试剂 |
| 5.2 实验方法 |
| 5.2.1 动物模型的建立 |
| 5.2.2 H&E及Masson染色 |
| 5.2.3 蛋白印迹 |
| 5.2.4 实时荧光定量PCR |
| 5.3 统计学分析 |
| 5.4 实验结果 |
| 5.4.1 抑制miR-21对糖尿病小鼠肺组织炎症的影响 |
| 5.4.2 抑制miR-21对糖尿病小鼠肺组织纤维化的影响 |
| 5.4.3 抑制miR-21对糖尿病小鼠肺组织PDCD4的影响 |
| 5.4.4 抑制miR-21对糖尿病小鼠肺组织JNK和p-JNK的影响 |
| 5.5 讨论 |
| 5.5.1 miR-21与糖尿病肺损伤的关系 |
| 5.5.2 miR-21对PDCD4/JNK信号通路的调节作用 |
| 5.6 结论 |
| 第6章 结论及创新点 |
| 6.1 结论 |
| 6.2 创新点 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在读期间发表的科研成果 |
| 致谢 |
（4）黄藤素对小鼠急性肺损伤和肺纤维化的防治作用研究（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 第一部分 黄藤素对脂多糖诱导小鼠急性肺损伤的防治作用研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 黄藤素对博莱霉素诱导小鼠肺纤维化的防治作用研究 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 综述 肺纤维化的发病机制及药物治疗进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间获得的学术成果 |
| 致谢 |
（5）从三焦“膜性四通管道”论治肺结节病的理论及临床研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 文献综述 |
| 综述一 肺结节病的中医药研究进展 |
| 1 病名探讨 |
| 2 病因 |
| 3 病机 |
| 4 中医药治疗 |
| 5 结语 |
| 参考文献 |
| 综述二 肺结节病的西医学研究进展 |
| 1 病因 |
| 2 发病机制 |
| 3 临床表现和辅助检查 |
| 4 诊断 |
| 5 治疗 |
| 6 动物模型 |
| 参考文献 |
| 第一部分 糖皮质激素治疗肺结节病的Meta分析 |
| 前言 |
| 1 资料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 研究意义及不足 |
| 参考文献 |
| 第二部分 从三焦“膜性四通管道”论治肺结节病的理论研究 |
| 前言 |
| 研究一 三焦理论演变 |
| 1 三焦形质的演变 |
| 2 三焦功能的演变 |
| 3 三焦辨证 |
| 4 小结 |
| 研究二 姜良铎教授三焦“膜性四通管道”理论 |
| 1 三焦“膜性四通管道”的形质 |
| 2 三焦“膜性四通管道”的生理功能 |
| 3 三焦“膜性四通管道”的病因病机 |
| 4 治疗原则 |
| 5 小结 |
| 研究三 从三焦“膜性四通管道”论治肺结节病 |
| 1 从三焦理论认识肺结节病基本病机 |
| 2 姜良铎教授论治肺结节病 |
| 3 通化方的由来 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 通化方治疗肺结节病的临床研究 |
| 前言 |
| 1 临床资料 |
| 2 研究方法 |
| 3 研究结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 参考文献 |
| 第四部分 “通化方”治疗肺结节病作用机制的网络药理学研究 |
| 前言 |
| 研究一 肺结节病相关基因 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 小结 |
| 研究二 通化方有效活性成分和基因靶点 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 小结 |
| 研究三 通化方-肺结节病-靶点调控网络及PPI网络 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 小结 |
| 研究四 靶点基因生物功能注释分析 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 小结 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 1 结论 |
| 2 创新性 |
| 3 不足与展望 |
| 致谢 |
| 附录 纳入研究资料提取表 |
| 病例报告表 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 个人简历 |
（6）基于血管新生机制探讨miR-126对肺纤维化大鼠VEGF调控及加味补阳还五汤的干预作用（论文提纲范文）
| 提要 |
| abstract |
| 引言 |
| 第一部分 理论探讨 |
| 1 中医学对肺纤维化的认识 |
| 1.1 病名探究 |
| 1.2 病因病机浅析 |
| 1.3 中医辨证论治 |
| 2 现代医学对特发性肺纤维化的认识 |
| 2.1 特发性肺纤维化的病因及发病机制 |
| 2.2 血管新生在特发性肺纤维发病中的作用 |
| 2.3 特发性肺纤维化的西医治疗现状 |
| 第二部分 实验研究 |
| 1 加味补阳还五汤对肺纤维化大鼠肺组织形态学、mi R-126、VEGF及 HIF-1α的影响 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.3 结果 |
| 1.4 结论 |
| 2 TGF-β1 诱导的MRC-5中mi R-126 转染对VEGF的影响 |
| 2.1 材料 |
| 2.2 方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.4 结论 |
| 3 加味补阳还五汤含药血清对TGF-β1 诱导的MRC-5 mi R-126、VEGF及 HIF-1α的影响 |
| 3.1 材料 |
| 3.2 方法 |
| 3.3 结果 |
| 3.4 结论 |
| 讨论 |
| 1 导师治疗肺纤维化学术思想浅析 |
| 1.1 气运失常 |
| 1.2 血运失常 |
| 1.3 肺络痹阻 |
| 2 加味补阳还五汤组方配伍及研究 |
| 3 疗效分析 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 综述 VEGF 在肺纤维化中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 附录 中英文缩略词 |
| 致谢 |
| 科技查新 |
| 发表论文 |
| 附件 |
（7）肺纤维化大鼠全转录组测序分析及加味补阳还五汤调控Notch/Jagged通路抗纤维化的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 第一部分 理论研究 |
| (一)“益气温阳活血”探讨加味补阳还五汤治疗肺纤维化 |
| 1.病因病机 |
| 2.治疗方法 |
| 3.方药解析 |
| 4.研究进展 |
| 5.小结 |
| 参考文献 |
| (二)益气温阳活血中药基于Notch/jagged信号通路调节肺纤维化 |
| 1.Notch信号通路 |
| 2.Notch/jagged1 信号通路与肺纤维化 |
| 3.气虚血瘀型肺纤维化的中医治疗 |
| 4.补阳还五汤通过Notch/jagged1 信号通路改善肺纤维化 |
| 参考文献 |
| (三)活血化瘀药联合西医治疗间质性肺疾病临床研究文献的Meta分析 |
| 1.资料与方法 |
| 2.结果 |
| 3.讨论 |
| 4.总结 |
| 参考文献 |
| (四)非编码RNA在肺纤维化中的研究进展 |
| 1.lncRNA与肺纤维化 |
| 2.miRNA与肺纤维化 |
| 3.circRNA与肺纤维化 |
| 参考文献 |
| 第二部分 实验研究 |
| 主要材料与试剂 |
| 研究对象 |
| 实验主要试剂与耗材 |
| 实验仪器与设备 |
| 实验药物 |
| (一)肺纤维化大鼠全转录组高通量测序分析 |
| 1.实验材料 |
| 2.实验方法 |
| 3.实验结果 |
| 4.讨论 |
| 5.小结 |
| 参考文献 |
| (二)加味补阳还五汤对肺纤维化大鼠肺组织病理形态的实验观察 |
| 1.实验材料 |
| 2.实验方法 |
| 3.实验结果及分析 |
| 4.结论 |
| (三)加味补阳还五汤干预Notch信号通路对MRC-5 细胞的调节机制 |
| 1.实验材料 |
| 2.实验方法 |
| 3.统计学分析 |
| 4.实验结果 |
| 5.实验结论 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 附件 |
（8）温补肾阳法干预肺纤维化大鼠PEDF、bFGF表达的实验研究及临床分析（论文提纲范文）
| 提要 |
| abstract |
| 引言 |
| 第一部分 临床分析 |
| 一、病例选择 |
| 二、诊断标准 |
| (一)西医诊断标准 |
| (二)中医证候诊断标准 |
| 三、纳入标准 |
| 四、排除标准 |
| 五、病例选择结果 |
| 六、数据处理 |
| (一)建立原始资料库 |
| (二)统计分析 |
| (三)结果 |
| 讨论 |
| 一、祖国医学对肺纤维化的认识 |
| 二、温补肾阳法相关研究 |
| (一)肺肾相关理论 |
| (二)相关临床研究 |
| 三、临床数据分析 |
| (一)年龄分布规律 |
| (二)药物频次分析 |
| (三)药物分类频率频数分析 |
| (四)药物性味归经频率频数分析 |
| 第二部分 动物实验研究 |
| 一、实验思路 |
| 二、动物实验 |
| (一)实验材料 |
| (二)实验方法 |
| (三)标本采集与指标检测 |
| (四)统计处理 |
| (五)实验结果 |
| 讨论 |
| 一、仙茅、仙灵脾的相关研究 |
| (一)仙灵脾 |
| (二)仙茅 |
| (三)仙灵脾与仙茅药对 |
| 二、仙茅、仙灵脾对本实验相关细胞因子的影响及探讨 |
| (一)肺纤维化血管新生 |
| (二)色素上皮衍生因子(PEDF) |
| (三)碱性成纤维细胞生长因子(bFGF) |
| (四)微血管密度(microvessel density,MVD) |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 综述 温补肾阳类中药治疗肺纤维化的相关研究 |
| 参考文献 |
| 附录 |
（9）血清VEGF、Leptin水平与特发性肺纤维化的相关性研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 创新性和局限性 |
| 附表和附图 |
| 参考文献 |
| 综述 特发性肺纤维化的治疗进展 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
（10）肺纤方治疗IPF临床观察及基于Wnt/β-catenin通路和EMT探讨其抗大鼠肺纤维化机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 特发性肺纤维化的中医药研究进展 |
| 1 病名探讨 |
| 2 病因病机 |
| 3 中医药治疗 |
| 4 中医药干预肺纤维化的作用机制研究 |
| 5 结语 |
| 参考文献 |
| 综述二 特发性肺纤维化的西医学研究进展 |
| 1 IPF的发病机制 |
| 2 IPF的西医治疗 |
| 3 结语 |
| 参考文献 |
| 第二部分 肺纤方治疗特发性肺纤维化肺肾亏虚痰瘀阻络证的临床疗效观察 |
| 前言 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 基于Wnt/β-catenin通路和EMT探讨肺纤方抗大鼠肺纤维化的作用机制研究 |
| 前言 |
| 实验一 肺纤方对博来霉素诱导的肺纤维化大鼠肺组织病理学影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 参考文献 |
| 实验二 肺纤方对博来霉素诱导的肺纤维化大鼠Wnt/β-catenin信号通路的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 参考文献 |
| 实验三 肺纤方对博来霉素诱导的肺纤维化大鼠上皮间质转化的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 致谢 |
| 附录 特发性肺纤维化肺肾亏虚、痰瘀阻络证患者治疗前后临床观察表 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 个人简历 |
四、血管生成在肺纤维化发病机制中的意义（论文参考文献）
- [1]基于生物信息学和网络药理学整合策略的人参平肺散干预特发性肺纤维化的机制研究[D]. 杨斓. 南京中医药大学, 2021
- [2]陈皮碱性提取物调控内质网应激治疗肺纤维化的机制研究[D]. 王志超. 南京中医药大学, 2021(01)
- [3]MiR-21通过调控PDCD4/JNK/c-Jun信号通路促进糖尿病肺损伤的机制研究[D]. 赵凤莲. 吉林大学, 2021(01)
- [4]黄藤素对小鼠急性肺损伤和肺纤维化的防治作用研究[D]. 皮娜. 昆明医科大学, 2021
- [5]从三焦“膜性四通管道”论治肺结节病的理论及临床研究[D]. 满君. 北京中医药大学, 2021(01)
- [6]基于血管新生机制探讨miR-126对肺纤维化大鼠VEGF调控及加味补阳还五汤的干预作用[D]. 田丽. 山东中医药大学, 2020(01)
- [7]肺纤维化大鼠全转录组测序分析及加味补阳还五汤调控Notch/Jagged通路抗纤维化的机制研究[D]. 刘学. 山东中医药大学, 2020(01)
- [8]温补肾阳法干预肺纤维化大鼠PEDF、bFGF表达的实验研究及临床分析[D]. 李斐然. 山东中医药大学, 2020(01)
- [9]血清VEGF、Leptin水平与特发性肺纤维化的相关性研究[D]. 李欣展. 山东大学, 2020(02)
- [10]肺纤方治疗IPF临床观察及基于Wnt/β-catenin通路和EMT探讨其抗大鼠肺纤维化机制[D]. 董环. 北京中医药大学, 2020(04)