一、柔嫩艾美耳球虫GZ株λMzp5-7重组抗原的免疫保护性实验（论文文献综述）
樊明明,吕玉金,吴玉臣[1]（2020）在《鸡球虫抗原及疫苗的研究进展》文中进行了进一步梳理随着鸡球虫耐药性以及禽产品药物残留等问题的出现,鸡球虫疫苗的研究已成为热点问题,但球虫生活史复杂导致其在不同阶段有不同的抗原成分,其免疫原性也有较大的差别,这也为球虫疫苗的研究开发造成了一定的阻碍。本文就鸡球虫不同阶段抗原的免疫原性、鸡球虫活疫苗和鸡球虫基因工程苗的最新研究进展进行综合阐述,以期为相关研究工作提供可参考的资料。
康桂英[2]（2015）在《鸡球虫病的免疫预防研究进展》文中认为鸡球虫病是由一种或多种球虫引起,对养鸡业危害比较严重的肠道寄生虫病。该病多发于1550日龄的雏鸡,发病率与死亡率都极高。成年鸡多为带虫者,对其生产能力有一定的影响。据报道,英国每年由于鸡球虫病造成的损失约为4 200万英镑;美国每年由于鸡球虫病造成的直接或间接经济损失高达2030亿美元。目前,该病已被美国列为对禽类危害最严重的五大传染病之一。随着球虫病的药物防治成本不断提高、药物残留问题和耐
许李丽[3]（2013）在《鸡柔嫩艾美耳球虫RC株表面抗原SAG17、SAG18和未知蛋白HP基因的克隆与原核表达》文中研究表明鸡球虫病是由属于顶复门、孢子虫纲、球虫亚纲、真球虫目、艾美耳亚目、艾美耳科、艾美耳属的原虫一种或几种寄生于鸡的肠道引起的疾病,其中柔嫩艾美耳球虫为最常见和重要的虫种。球虫病是现代养鸡业中常见的重要疾病,尤其是在现代化的集约化养鸡场,具有传播快、不容易根除的特点。柔嫩艾美耳球虫主要感染雏鸡,引起雏鸡大量死亡,而耐过的鸡只出现发育缓慢、增重率降低,母鸡产蛋量减少等影响生产效率的问题。该病的预防目前主要是靠化学药物和活疫苗。由于抗球虫药物的长期使用,造成了耐药性的产生,加之药物残留问题,使得抗球虫药物的使用受到较大的限制。但是活疫苗存在安全问题,会发生毒力返强而爆发球虫病,从而影响活疫苗的使用。基因工程疫苗是最有前途的、安全的疫苗,但是要研发艾美耳球虫基因工程疫苗,首先必须找到切实有效的保护性抗原。表面抗原在原生寄生虫的致病性发挥重要作用,其中一些具有潜在的候选疫苗或药物靶位点,很多研究表明具有免疫保护作用的基因主要是艾美耳球虫子孢子和裂殖子表面抗原和细胞器抗原。鸡柔嫩艾美耳球虫第二代裂殖子是球虫内生性抗原最多的阶段,对裂殖子阶段表面抗原的详细研究有助于球虫在宿主内主要生物进程蛋白识别,包括宿主入侵、复制、致病性以及宿主免疫的激发。E. Tab ares研究发现E.tenella裂殖子表面抗原是GPI锚定表面蛋白,在N-端有疏水信号肽,C-端是疏水的GPI信号锚肽,该信号肽是大约有6个半胱氨酸残基的保守的跨膜区域。但裂殖子阶段表达的各种的表面抗原在致病性和激发宿主免疫反应方面的详细作用还不清楚。因此本研究对第二代裂殖子表面抗原SAG17、SAG18和一个未知抗原蛋白HP进行基因克隆生物信息学分析以及原核表达,为其免疫原性及其他生物学功能奠定基础,也为以后柔嫩艾美耳球虫的基因工程疫苗研究提供理论依据。主要研究内容包括：表达载体是蛋白质表达研究的重要工具,本课题研究首先在PCDNA3.1的基础上,通过去除BglⅡ、SV40、Neomycin序列,添加KOZAK序列、起始密码子ATG、多克隆位点和6-His标签,构建了原、真核双表达载体pELI3.3,该载体不但可以用于本研究的原核表达,还可以在后续研究中用于柔嫩艾美耳球虫的抗原组分析和表达文库免疫（ELI）筛选。根据E.tenella豪顿株的SAG17、SAG18、HP基因序列设计引物,纯化E.tenella荣昌株第二代裂殖子,提取总RNA,然后RT-PCR扩增出SAG17、SAG18和HP基因,进行TA克隆、测序。序列分析结果表明,SAG17、SAG18和HP基因与豪顿株相应基因的核苷酸序列同源性均为99%以上,推导的氨基酸序列同源性也在94以上%,说明SAG17、SAG18、HP基因在不同地理株之间保守性很高。分别将SAG17.SAG18和HP基因的TA克隆重组质粒,经过BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切,然后与同样经过BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切的表达载体pELI3.3连接转化到BL21感受态细胞内,用IPTG诱导表达,使其在BL21细菌中表达。SDS-PAGE电泳结果表明,SAG17、SAG18和HP基因表达的蛋白条带分别在29.0kDa、29.0kDa、20.1kDa附近,与理论值27.76kDa、27.09kDa、19.3kDa相符,说明这三个基因在大肠杆菌中成功表达。用Glyko Bandcan软件对凝胶扫描分析三个基因表达量分别为28%、21%、27%,最佳表达时间分别为10h、11h、11h；最佳IPTG浓度均为1mM。蛋白可溶性鉴定均为不可溶的包涵体蛋白。
王秋悦,郑梅竹,杨鹏,任铁燕,倪静,师清博[4]（2013）在《鸡球虫病免疫预防研究现状》文中进行了进一步梳理鸡球虫病是严重危害养禽业的一种细胞内寄生虫病。鸡抗球虫药的长期使用,使得球虫抗药性问题日益严重,药物在球虫病控制中的作用越来越受到限制。近年来用免疫预防的方法控制鸡球虫病逐渐受到重视,并有望成为主要的技术手段。笔者就鸡球虫病的免疫预防,从活苗、亚单位苗和基因工程苗这几个研究阶段进行概述。
高云路[5]（2012）在《鸡四种艾美耳球虫重组蛋白免疫保护性研究》文中研究指明鸡球虫病是由艾美耳属（Eimeria）球虫寄生于鸡肠道上皮细胞内而引起的寄生性原虫病。该病呈世界性分布,对养鸡业危害巨大。目前防治该病仍以抗球虫药为主,但由于耐药虫株的不断增多和化学药物残留问题的日益严重,使动物源性食品安全问题逐渐成为国际性的问题。重组亚单位疫苗是利用DNA重组技术,将编码保护性抗原的基因导入受体菌或细胞,使其在受体中高效表达,分泌保护性抗原肽链。提取保护性抗原肽链,加入佐剂即可制成重组亚单位疫苗。本实验室已经从E.tenella、E.necatrix和E.acervulina中分别克隆得到多种免疫保护性抗原基因,并成功构建了原核表达重组质粒。同时也已从E. maxima孢子化卵囊中克隆得到免疫保护性抗原基因EmTFP250的全长8个片段。本研究在此基础上展开,主要包括以下几个方面：1鸡巨型艾美耳球虫Em6和Em8基因的原核表达与纯化应用DNA重组技术,将Em6和Em8基因克隆到原核表达载体pET32a（+）中,转化大肠杆菌BL21（DE3）,通过IPTG诱导表达重组Em6和Em8蛋白。SDS-PAGE电泳显示,pET32a（+）-Em6和pET32a（+）-Em8在大肠杆菌中得到成功表达,其分子量分别在68和71kDa左右。菌体经超声破碎后的沉淀与上清的SDS-PAGE分析结果表明,2种重组蛋白均存在于上清,为可溶性蛋白。经Western blot检测,上述2种重组蛋白均可被人工感染E. maxima的鸡血清所识别。2鸡艾美耳球虫的不同重组蛋白免疫效果比较将柔嫩艾美耳球虫（E.tenella）重组蛋白pET28b（+）-TA4和pET32a（+）-SO7;毒害艾美耳球虫（E.necatrix）重组蛋白pET28a（+）-NA4和pET32a（+）-NPmz19;堆型艾美耳球虫（E.acervulina）重组蛋白pET28a（+）-LDH. pET28a（+）-3-1E和pET28a（+）-MIF;巨型艾美耳球虫（E.maxima）重组蛋白pET32a（+）-Em6和pET32a（+）-Em8单独或混合免疫,14日龄经腿部肌肉注射相应的重组蛋白200μg,21日龄加强免疫,对照组注射PBS。28日龄,除白对照组外,其余各组分别经口感染新鲜的E. tenella、E. necatrixx、 E.acervulina、E.maxima孢子化卵囊5×104个/羽、5×104个/羽、10×104个/羽和10×104个/羽。各组于首免,攻虫和剖杀时逐只称重。攻虫后7d（35日龄）剖杀并逐只进行肠道病变记分和卵囊计数,并计算抗球虫指数（ACI）,检测各重组蛋白的免疫效果。结果显示：各重组蛋白对同源鸡球虫均具有免疫保护效果,并且混合蛋白的免疫效果均优于各重组蛋白单独免疫的保护效果；E. tenella、E. necatrix、E.acervulina、 E.maxima各组分别以TA4、NA4、LDH和Em8重组蛋白的免疫保护效果最佳。3鸡四种艾美耳-球虫重组蛋白交叉免疫保护性研究本实验对之前筛选出的E. tenella、E. necatrix、E.acervulina、E.maxima各组免疫保护效果最佳的重组蛋白TA4、NA4、LDH和Em8的交叉免疫保护性进行了研究。14日龄经腿部肌肉注射相应的重组蛋白200μg,21日龄加强免疫,对照组注射PBS。28日龄,除白对照组外,其余各组分别经口感染新鲜的E. tenella、E. necatrix、 E.acervulina、E.maxima孢子化卵囊5×104个/羽、5×104个/羽、10×104个/羽和10×104个/羽。各组于首免,攻虫和剖杀时逐只称重。攻虫后7d（35日龄）剖杀并逐只进行肠道病变记分和卵囊计数,并计算抗球虫指数（ACI）,检测各重组蛋白的交叉免疫效果。结果显示：TA4重组蛋白除对E. necatrix具有部分交叉免疫保护效果外（ACI=176.12）,对E.acervulina和E.maxima没有交叉免疫保护作用；NA4重组蛋白对E. tenella和E.acervulina感染具有部分交叉免疫保护作用,对E.maxima不具有交叉免疫保护作用；LDH重组蛋白对E. tenella和E. necatrix具有部分交叉免疫保护作用,而对E.maxima没有交叉免疫保护作用；Em8重组蛋白对E. tenella和E.acervulina具有部分交叉免疫保护作用对E. necatrix没有交叉免疫保护作用。4鸡四种艾美耳球虫重组蛋白混合免疫的免疫保护性研究将上述4种重组蛋白TA4、NA4、LDH和Em8等比混合后,14日龄经腿部肌肉注射相应的重组蛋白200μg,21日龄加强免疫,对照组注射PBS。28日龄,除白对照组外,其余各组分别经口感染新鲜的E.tenella、E.necatrix、E.acervulina、E.maxima孢子化卵囊5×104个/羽、5×104个/羽、10×104个/羽和10×104个/羽。各组于首免,攻虫和剖杀时逐只称重。攻虫后7d（35日龄）剖杀并逐只进行肠道病变记分和卵囊计数,并计算抗球虫指数（ACI）,检测该混合重组蛋白的免疫效果。结果显示：该混合蛋白对E.tenella、E.necatrix、E.acervulina和E. maxima均具有部分免疫保护作用,其180<ACI<170,分别为ACI=174.69、173.10、171.10和177.90。
赵胜杰[6]（2012）在《鸡四种艾美耳球虫免疫调节型DNA疫苗混合免疫程序及其稳定性试验》文中研究指明鸡球虫病是严重危害养禽业发展的重要疾病之一,危害比较严重的主要有柔嫩艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫、堆型艾美耳球虫、毒害艾美耳球虫4个种,临床上往往为混合感染,因此研制抵抗这4种鸡球虫混合感染的多价疫苗显得十分迫切,本实验室已经构建了抵抗4种球虫的混合多价DNA疫苗和多价多表位DNA疫苗,初步显示了良好的免疫保护效果,为了比较球虫DNA疫苗和弱毒苗及抗球虫化学药物的保护效果以及进一步提高多价DNA疫苗的免疫保护效果,本研究比较了DNA疫苗、弱毒苗COCVAC和抗球虫化学药物地克珠利对单种球虫感染和多种球虫混合感染保护效果,对混合DNA疫苗的免疫程序和稳定性进行了研究。本研究第一部分用本实验室之前构建的5种重组质粒（pVAX1.0-TA4-IL-2、 pVAX1.0-NA4-IL-2、pVAX1.0-EM8-IL-2、pVAX1.0-LDH-IL-2、pVAX1.0-TA4-1-NA4-1-LDH-2-EMCDPK-1-IL-2）、抗球虫化学药物地克珠利和弱毒苗COCVAC进行单种球虫感染和多种球虫混合感染的保护性比较试验。弱毒苗试验组按照使用说明在6日龄通过饮水进行免疫；DNA疫苗试验组在14日龄通过腿部肌肉注射分别接种相应的质粒,在21日龄加强免疫。在28日龄,除非免疫非攻虫组外,其余分别经口接种新鲜的E.tenella、E.necatrix、E.maxima、E.acervulina和混合孢子化卵囊5×104个/羽、5×104个/羽、10×104个/羽、10×104个/羽、5×104个／羽。在攻虫的同时,地克珠利实验组按使用说明在饮水中添加地克珠利（1mg/L,连续给药3天）。7天后,剖杀所有试验鸡,对增重、每克肠道内容物卵囊数、肠道病变计分和抗球虫指数（ACI）等指标进行统计,检测其保护效果。结果发现,对于柔嫩艾美耳球虫、毒害艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫以及混合攻虫（含柔嫩、毒害、巨型和堆型4个虫种）,DNA疫苗的保护力均高于弱毒苗COCVAC和化学药物地克珠利；对于堆型艾美耳球虫,DNA疫苗的保护力高于弱毒苗COCVAC,但略低于化学药物地克珠利。本研究第二部分是将本实验室构建的免疫调节型DNA疫苗pVAX1.0-TA4-IL-2、 pVAX1.0-NA4-IL-2、pVAX1.0-EM8-IL-2、pVAX1.0-LDH-IL-2按1：1：1：1混合后进行免疫程序筛选,在此基础上再进行稳定性实验。主要包括以下几个方面：1四种鸡艾美耳球虫免疫调节型DNA疫苗混合免疫剂量的筛选将免疫调节型DNA疫苗pVAX1.0-TA4-IL-2、pVAX1.0-NA4-IL-2、pVAX1.O-EM8-IL-2、pVAX1.0-LDH-IL-2按1：1：1：1混合后,分别以2μg、10μg、25μg、50μg、100μg.200μg免疫雏鸡,各剂量组分别以柔嫩艾美耳球虫、毒害艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫和堆型艾美耳球虫攻虫。每个虫种分别设立非免疫攻虫对照组和非免疫非攻虫对照组,共29组。结果发现,柔嫩艾美耳球虫组免疫保护效果最好的免疫剂量为10μg, ACI为191.63。毒害艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫、堆型艾美耳球虫免疫保护效果最好的免疫剂量均为ACI分别为177.31、168.84、165.49。2鸡四种艾美耳球虫免疫调节型DNA疫苗混合免疫途径的筛选将混合DNA疫苗分别经肌肉注射、静脉注射、皮下注射、口服、滴鼻滴眼五个途径免疫雏鸡,各途径分别以柔嫩艾美耳球虫、毒害艾美耳球、巨型艾美耳球虫和堆型艾美耳球虫攻虫,每个虫种设立非免疫攻虫对照组和非免疫非攻虫对照组,共25组。结果发现,各免疫攻虫组中腿部肌肉注射组ACI均最高。其中柔嫩艾美耳球虫攻虫组ACI为162.89；毒害艾美耳球虫攻虫组ACI为179.54；巨型艾美耳球虫攻虫组ACI为174.94；堆型艾美耳球虫攻虫组ACI为167.10。腿部肌肉注射组免疫效果优于其他免疫途经组。3鸡四种艾美耳球虫免疫调节型DNA疫苗混合免疫首免日龄及免疫次数的筛选本试验设计了一周龄首免不加强免疫组、一周龄首免二周龄加强免疫组、二周龄首免不加强免疫组和二周龄首免三周龄加强免疫组四个实验组,分别免疫混合DNA疫苗。各试验组分别以柔嫩艾美耳球虫、毒害艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫、堆型艾美耳球虫攻虫,同时设立了非免疫攻虫对照组和非免疫非攻虫对照组,共21组。结果发现,加强免疫组比非免疫组免疫保护效果好,除毒害艾美耳球虫攻虫组外,所有加强免疫组的ACI都大于160；二周龄首免组比一周龄首免组免疫保护效果好,二周龄首免三周龄加强免疫组效果最好。4鸡四种艾美耳球虫免疫调节型DNA疫苗混合免疫稳定性实验将混合DNA疫苗在不同的温度（-20℃、4℃和室温）下分别保存1个月、3个月、6个月,分别免疫雏鸡。各温度组分别以柔嫩艾美耳球虫、毒害艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫和堆型艾美耳球虫攻虫,同时设立非免疫攻虫对照组和非免疫非攻虫对照组,共41组。结果发现,绝大多数免疫组的ACI都大于160,说明各保存条件下混合DNA疫苗都具有免疫保护效果,且在三个不同温度和不同保存时间内能保持相对稳定性。
刘颖丽[7]（2012）在《RepairPSⅡ基因重组蛋白和DNA疫苗抗柔嫩艾美耳球虫保护效果》文中认为鸡球虫病是由艾美耳属（Eimeria）球虫引起的严重危害养鸡业发展的寄生虫病之一，其中柔嫩艾美耳球虫（E.tenella）致病力最强。目前，本病的防治主要依赖化学药物和活虫苗，但存在药物残留、耐药虫株、高成本及活虫苗散毒等弊端，难以大规模应用。鸡球虫基因工程疫苗仍是当前鸡球虫免疫预防研究的热点和趋势，但目前报道的该类疫苗保护效果尚不理想。因此，本研究克隆新的鸡球虫疫苗候选基因，然后利用该基因制备亚单位疫苗和核酸疫苗，最后探讨制备的疫苗刺激鸡体产生的免疫应答和抗鸡球虫保护效果，对鸡球虫基因工程疫苗开发和研制具有重要意义。柔嫩艾美耳球虫RepairPSII基因克隆及原核表达：利用cDNA文库测序技术从柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA文库中筛选获得一个新基因，含有一个816bp的开放阅读框，编码271个氨基酸，具有RepairPSII蛋白家族的保守结构域，是一个跨膜蛋白。用原核表达技术成功表达重组REPAIRPSII蛋白，以可溶形式表达，可被抗柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊多抗识别，IFA显示RepairPSII在柔嫩艾美耳球虫子孢子阶段表达。重组RepairPSII蛋白抗柔嫩艾美耳球虫保护效果：用重组RepairPSII蛋白经不同免疫途径免疫雏鸡，观察其诱导的免疫应答和抗柔嫩艾美耳球虫攻击的保护效果。结果表明皮下免疫组和口服工程菌组可刺激鸡体产生特异性抗体和细胞介导的免疫应答（IL-2和IFN-γ、CD4+与CD8+T淋巴细胞、T淋巴细胞刺激指数与对照组相比差异显着）。攻虫实验表明，皮下免疫组和口服工程菌组鸡卵囊数减少，盲肠病变减轻，体重增加。综合评价ACI值分别为173.2和165.6。pVAX1-RepairPSII真核表达质粒构建及抗柔嫩艾美耳球虫保护效果：将RepairPSII基因亚克隆到pVAX1中构建真核表达质粒并在Hela细胞表达。结果成功构建pVAX1-RepairPSII真核表达质粒，IFA、SDS-PAGE和Western blot确定RepairPSII蛋白得到表达。用pVAX1-RepairPSII重组质粒肌注免疫雏鸡，观察其诱导的免疫应答和抗柔嫩艾美耳球虫攻击的保护效果。结果表明RepairPSII核酸疫苗可刺激鸡体产生特异性抗体和细胞介导的免疫应答（IL-2和IFN-γ、CD4+与CD8+T淋巴细胞、T淋巴细胞刺激指数与对照组相比差异显着）。攻虫实验表明，免疫RepairPSII核酸疫苗可以减少卵囊数，减轻盲肠病变，增加体重。综合评价ACI值为178.7。本研究克隆了一个新的柔嫩艾美耳球虫疫苗候选基因RepairPSII，RepairPSII重组蛋白和RepairPSII核酸疫苗均显示了良好的抗柔嫩艾美耳球虫效果，对鸡球虫病免疫预防具有重要理论意义和应用前景。
刘义伟[8]（2012）在《堆型艾美耳球虫ADF基因和3-1E基因融合表达及其免疫保护性试验》文中研究指明鸡球虫病（Coccidiosis）是由艾美耳属（Eimeria）的多种球虫寄生于鸡消化道引起感染的一种严重危害养鸡业发展的原虫病,目前该病的防治主要依靠化学药物,长期应用药物易使球虫产生耐药性,以及在肉蛋中药物残留危害人体健康,因此研究人员期望用更好的手段来控制鸡球虫病。近年来随着分子生物学和基因工程学的发展,亚单位疫苗作为一种安全、稳定、高效和易于制备的疫苗而得到广泛研究。本试验对鸡堆型艾美耳球虫（Eimeria acervulina）相关抗原基因ADF和3-1E进行了重组克隆共表达,并用重组蛋白进行了免疫保护试验,为研制高效、安全的抗球虫多价疫苗奠定基础。参考GenBank中收录的E.acervulina肌动蛋白解聚因子（actin-depolymerizing factor,ADF）基因序列,设计特异性引物,以保定株堆型艾美耳球虫卵囊子孢子DNA为模板,用聚合酶链式反应（PCR）法扩增ADF基因,经检测扩增产物为729bp。将扩增的ADF基因克隆至pMD-18T载体,转化于感受态细胞DH5α,蓝白斑法筛选出阳性重组子,提取阳性质粒DNA并测序。序列分析结果表明,该株的ADF基因序列与参考序列同源性达99.6%。将扩增产物与原核表达载体pET32a（+）连接,构建重组质粒pET32a-ADF,转化入大肠杆菌BL21（DE3）中诱导表达,表达产物经SDS-PAGE鉴定。结果表明表达出的ADF基因重组蛋白分子量大小约为46kDa。应用重叠PCR技术（SOE-PCR）将ADF基因和3-1E基因融合得到ADF-3-1E重组基因,并将融合基因插入到pET-32a（+）载体中,构建成了pET-32a-ADF-3-1E共表达载体,转化BL21宿主菌中进行诱导表达及表达产物的鉴定。SDS-PAGE检测结果表明,表达的融合蛋白分子量约为68 kDa,与预测的蛋白大小相符。经Western blot鉴定表明,表达的融合蛋白具有很好的反应原性。将100只雏鸡随机分为5组,分别设ADF重组蛋白免疫组、3-1E重组蛋白免疫组、ADF-3-1E重组蛋白免疫组、非免疫感染组和健康对照组。在7日龄时首免,14日龄加强免疫,二免一周后用4×106个E.acervulina BD株球虫孢子化卵囊进行攻毒试验,观察重组ADF-3-1E蛋白对鸡堆型艾美耳球虫的免疫保护效果。结果表明, ADF-3-1E重组蛋白免组可产生较强的抗虫效果,卵囊产量下降67.88%,肠道病变记分降低67.21%,鸡的相对增重率达88.36%,ACI值为166.76。
赵蕾,于新友,王金良,李坤林[9]（2011）在《鸡球虫疫苗研究现状》文中研究指明鸡球虫病是危害养禽业的一类重要的寄生虫病,鸡球虫疫苗包括活疫苗、亚单位疫苗、基因工程亚单位疫苗、核酸疫苗及活载体疫苗等,论文对目前鸡球虫疫苗的研究与应用现状进行了综述。
黄金贵,李运娜,张西臣[10]（2011）在《鸡球虫病疫苗的研究进展》文中提出鸡球虫病是一种主要由艾美耳属球虫引起的细胞内寄生原虫病,给养禽业带来巨大的经济损失。鸡球虫病一直以药物防治为主,但耐药虫株以及药物残留等问题使药物防治受到很大限制,因此,研制安全有效的疫苗成为防治鸡球虫病的主要策略之一。鸡球虫病疫苗包括活疫苗、核酸疫苗、亚单位疫苗、重组卡介苗和佐剂疫苗,本文就鸡球虫病疫苗的研究现状作一综述。
二、柔嫩艾美耳球虫GZ株λMzp5-7重组抗原的免疫保护性实验（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、柔嫩艾美耳球虫GZ株λMzp5-7重组抗原的免疫保护性实验（论文提纲范文）
（1）鸡球虫抗原及疫苗的研究进展（论文提纲范文）
| 1 鸡球虫抗原的研究 |
| 1.1 无性生殖阶段抗原 |
| 1.1.1 微线蛋白 |
| 1.1.2 折光体蛋白 |
| 1.1.3 热休克蛋白 |
| 1.1.4 表面抗原 |
| 1.2 有性生殖阶段抗原 |
| 1.3 新发现抗原 |
| 1.3.1 乳酸脱氢酶 |
| 1.3.2 Em TFP250 |
| 2 球虫疫苗及其免疫效果 |
| 2.1 球虫活疫苗 |
| 2.1.1 球虫活疫苗的分类 |
| 2.1.2 球虫活疫苗的免疫效果 |
| 2.1.2. 1 强毒苗的免疫效果。 |
| 2.1.2. 2 弱毒苗的免疫效果。 |
| 2.2 基因工程苗及其免疫效果 |
| 3 展望 |
（2）鸡球虫病的免疫预防研究进展（论文提纲范文）
| 1 强毒苗 |
| 2 弱毒苗 |
| 2.1 鸡胚传代致弱 |
| 2.2 早熟选育 |
| 2.3 理化处理 |
| 2.4 细胞培养 |
| 3 基因工程苗 |
| 3.1 重组蛋白疫苗 |
| 3.2 核酸疫苗 |
| 3.3 活载体疫苗 |
| 4 单克隆抗体 |
（3）鸡柔嫩艾美耳球虫RC株表面抗原SAG17、SAG18和未知蛋白HP基因的克隆与原核表达（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 鸡球虫病概述 |
| 1.2 鸡球虫生活史 |
| 1.3 球虫防治的研究概况 |
| 1.4 艾美耳球虫抗原研究进展 |
| 1.5 展望 |
| 第二章 前言 |
| 第三章 材料与方法 |
| 3.1 材料 |
| 3.1.1 试验动物 |
| 3.1.2 质粒载体和受体菌种 |
| 3.1.3 主要试剂 |
| 3.1.4 主要试剂的配制 |
| 3.1.5 主要实验仪器 |
| 3.2 方法 |
| 3.2.1 原、真核双表达载体pELI3.3的构建 |
| 3.2.2 SAG17、SAG18和HP的克隆 |
| 3.2.3 基因序列分析 |
| 3.2.4 SAG17、SAG18和HP的原核表达 |
| 第四章 结果与分析 |
| 4.1 表达载体pELI3.3构建 |
| 4.1.1 pELI3.1的构建 |
| 4.1.2 pELI3.2构建 |
| 4.1.3 pELI3.3构建 |
| 4.2 SAG17、SAG18和HP基因克隆和序列分析 |
| 4.2.1 SAG17、SAG18、HP的RT-PCR扩增 |
| 4.2.2 TA克隆 |
| 4.2.3 SAG17基因序列分析 |
| 4.2.4 SAG18基因序列分析 |
| 4.2.5 HP基因序列分析 |
| 4.3 SAG17、SAG18和HP基因的原核表达 |
| 4.3.1 SAG17、SAG18和HP基因的亚克隆 |
| 4.3.2 诱导表达时间的优化 |
| 4.3.3 诱导表达浓度优化 |
| 4.3.4 重组表达蛋白可溶性鉴定 |
| 第五章 讨论 |
| 5.1 表达载体pELI3.3构建 |
| 5.2 SAG17、SAG18、HP基因克隆与序列分析 |
| 5.3 SAG17、SAG18和HP的原核表达 |
| 第六章 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 发表论文及参加课题 |
（5）鸡四种艾美耳球虫重组蛋白免疫保护性研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 上篇 文献综述 |
| 第一章 鸡球虫疫苗研究进展 |
| 1 活疫苗 |
| 1.1 强毒活苗 |
| 1.2 弱毒活苗 |
| 1.3 耐药活苗 |
| 2 亚单位疫苗 |
| 3 基因工程亚单位疫苗 |
| 4 核酸疫苗 |
| 5 展望 |
| 参考文献 |
| 第二章 鸡球虫疫苗交叉免疫保护研究进展 |
| 1 鸡球虫疫苗交叉免疫保护 |
| 1.1 传统鸡球虫疫苗的交叉免疫保护研究 |
| 1.2 鸡球虫重组亚单位疫苗的交叉免疫保护研究 |
| 1.3 鸡球虫核酸疫苗的交叉免疫保护研究 |
| 2 其他寄生虫疫苗的交叉免疫作用 |
| 参考文献 |
| 下篇 实验研究 |
| 第三章 鸡巨型艾美耳球虫Em6和Em8基因的原核表达与纯化 |
| 摘要 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 pcDNA4.0-Em6和pMD18-T-Em8质粒的酶切 |
| 2.2 重组质粒的构建 |
| 2.3 重组质粒在E.coli BL21中的表达 |
| 2.4 重组蛋白在E.coli中的分布 |
| 2.5 重组蛋白的纯化 |
| 2.6 Western blot分析 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| ABSTRACT |
| 第四章 鸡艾美耳球虫的不同重组蛋白免疫效果比较 |
| 摘要 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 重组蛋白的纯化 |
| 2.2 增重影响 |
| 2.3 重组蛋白免疫对鸡球虫感染的卵囊计数和肠道病变影响 |
| 2.4 重组蛋白免疫对鸡球虫感染的抗球虫指数 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| ABSTRACT |
| 第五章 4种鸡艾美耳球虫重组蛋白交叉免疫保护性研究 |
| 摘要 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 柔嫩艾美耳球虫pET28b(+)-TA4蛋白的交叉免疫保护作用 |
| 2.2 毒害艾美耳球虫pET28a(+)-NA4蛋白的交叉免疫保护作用 |
| 2.3 堆型艾美耳球虫pET28a(+)-LDH蛋白的交叉免疫保护作用 |
| 2.4 巨型艾美耳球虫pET32a(+)-Em8蛋白的交叉免疫保护作用 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| ABSTRACT |
| 第六章 4种艾美耳球虫重组蛋白混合免疫的免疫保护性研究 |
| 摘要 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 增重影响 |
| 2.2 混合蛋白免疫对鸡球虫感染的卵囊计数和肠道病变影响 |
| 2.3 混合蛋白免疫对鸡球虫感染的抗球虫指数 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| ABSTRACT |
| 全文总结 |
| 致谢 |
（6）鸡四种艾美耳球虫免疫调节型DNA疫苗混合免疫程序及其稳定性试验（论文提纲范文）
| 目录 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一章 鸡球虫病的免疫研究进展 |
| 1 鸡球虫的生活史 |
| 2 鸡抗球虫感染免疫特点 |
| 2.1 球虫的免疫原性 |
| 2.2 非特异性免疫 |
| 2.3 特异性免疫 |
| 3 鸡四种常见艾美尔球虫重要保护性抗原的研究进展 |
| 3.1 柔嫩艾美耳球虫 |
| 3.2 毒害艾美耳球虫 |
| 3.3 堆型艾美耳球虫 |
| 3.4 巨型艾美耳球虫 |
| 4 展望 |
| 参考文献 |
| 第二章 鸡球虫DNA疫苗研究进展 |
| 1 DNA疫苗的研究史 |
| 2 DNA疫苗的免疫机理 |
| 3 DNA疫苗的特点 |
| 4 鸡球虫DNA疫苗研究进展 |
| 5 影响鸡球虫DNA疫苗免疫效果的主要因素 |
| 5.1 免疫途径 |
| 5.2 免疫剂量 |
| 5.3 免疫次数 |
| 6 细胞因子佐剂在鸡球虫DNA疫苗中的应用 |
| 7 展望 |
| 参考文献 |
| 第三章 鸡球虫DNA疫苗和弱毒苗COCVAC及化学药物地克珠利保护效果的比较 |
| 摘要 |
| 1 试验材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 试验方法 |
| 2 试验结果 |
| 2.1 增重影响 |
| 2.2 DNA疫苗免疫鸡对球虫感染的肠道病变的影响 |
| 2.3 DNA疫苗免疫对鸡球虫感染的卵囊计数的影响 |
| 2.4 抗球虫指数统计结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| Abstract |
| 第四章 鸡四种艾美耳球虫免疫调节型DNA疫苗混合免疫剂量筛选 |
| 摘要 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 增重影响 |
| 2.2 DNA疫苗免疫鸡对球虫感染的卵囊计数的影响 |
| 2.3 DNA疫苗免疫鸡对球虫感染的肠道病变的影响 |
| 2.4 DNA疫苗免疫鸡对球虫感染的抗球虫指数 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| Abstract |
| 第五章 鸡四种艾美耳球虫免疫调节型DNA疫苗混合免疫途径筛选 |
| 摘要 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 增重影响 |
| 2.2 DNA疫苗免疫鸡对球虫感染的卵囊计数的影响 |
| 2.3 免疫鸡对球虫感染的肠道病变的影响 |
| 2.4 DNA疫苗免疫鸡对球虫感染的抗球虫指数 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| Abstract |
| 第六章 鸡四种艾美耳球虫免疫调节型DNA疫苗混合免疫首免日龄及免疫次数筛选 |
| 摘要 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 增重影响 |
| 2.2 DNA疫苗免疫鸡对球虫感染的卵囊计数的影响 |
| 2.3 DNA疫苗免疫鸡对球虫感染的肠道病变的影响 |
| 2.4 DNA疫苗免疫鸡对球虫感染的抗球虫指数 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| Abstract |
| 第七章 鸡四种艾美耳球虫免疫调节型DNA疫苗混合免疫稳定性试验 |
| 摘要 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 对增重的影响 |
| 2.2 DNA疫苗免疫鸡对球虫感染的卵囊计数的影响 |
| 2.3 DNA疫苗免疫鸡对球虫感染的肠道病变的影响 |
| 2.4 DNA疫苗免疫鸡对球虫感染的抗球虫指数 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| Abstract |
| 全文总结 |
| 致谢 |
（7）RepairPSⅡ基因重组蛋白和DNA疫苗抗柔嫩艾美耳球虫保护效果（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩写词表 |
| 前言 |
| 第一篇 文献综述 |
| 第一章 鸡球虫病免疫机制的研究 |
| 1 鸡球虫保护性免疫机制 |
| 2 鸡肠道免疫系统的防御机制 |
| 3 艾美耳球虫的先天性免疫和获得性免疫应答 |
| 第二章 鸡球虫疫苗研究 |
| 1 鸡球虫疫苗 |
| 2 提高鸡抗球虫免疫水平的策略 |
| 3 展望 |
| 第二篇 研究内容 |
| 第一章 柔嫩艾美耳球虫 Repair_PSII 基因克隆及原核表达 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第二章 重组 Repair_PSII 蛋白抗柔嫩艾美耳球虫保护效果 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三章 pVAX1-Repair_PSII 真核表达质粒构建及抗柔嫩艾美耳球虫保护效果 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 导师及作者简介 |
| 致谢 |
（8）堆型艾美耳球虫ADF基因和3-1E基因融合表达及其免疫保护性试验（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 综述 |
| 1 鸡球虫的种类及所引起的鸡球虫病 |
| 1.1 子孢子表面抗原 |
| 1.2 裂殖子表面抗原 |
| 1.3 子孢子和裂殖子阶段共有的抗原 |
| 1.4 配子体抗原 |
| 2 球虫抗原刺激机体产生的抗球虫免疫保护作用 |
| 2.1 体液免疫在鸡球虫感染中的作用 |
| 2.2 细胞免疫在鸡球虫感染中的作用 |
| 2.3 细胞因子在抗球虫感染中的作用 |
| 2.4 局部免疫反应在抗球虫感染中的作用 |
| 3 鸡球虫疫苗研究进展 |
| 3.1 鸡球虫活苗的研究 |
| 3.2 球虫核酸疫苗的研究 |
| 3.3 亚单位疫苗的研究 |
| 3.4 展望 |
| 4 本研究的目的和意义 |
| 第二章 堆型艾美耳球虫 ADF 基因的克隆与表达 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第三章 堆型艾美耳球虫 ADF 和3-1E 基因的融合表达 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.2 方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 ADF/3-1E 基因 PCR 扩增结果 |
| 3.2 ADF-3-1E 融合基因 PCR 扩增结果 |
| 3.3 质粒的酶切鉴定 |
| 3.4 重组质粒pET-32a-ADF-3-1E 的 PCR 鉴定和酶切鉴定的结果 |
| 3.5 融合基因 ADF-3-1E 特性预测 |
| 3.6 pET-32a-ADF-3-1E 的诱导表达结果 |
| 3.7 抗原蛋白的 Wersten blot 检测 |
| 4 讨论 |
| 第四章 重组 ADF-3-1E 蛋白对鸡堆型艾美耳球虫的免疫保护效 果 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.2 方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 增重影响 |
| 3.2 卵囊计数 |
| 3.3 肠道病变计分情况 |
| 3.4 抗球虫指数综合效果评定 |
| 4 讨论 |
| 第五章 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 在读期间发表的学术论文 |
| 作者简历 |
| 致谢 |
（10）鸡球虫病疫苗的研究进展（论文提纲范文）
| 1. 活疫苗 |
| 1.1 强毒疫苗 |
| 1.2 弱毒疫苗 |
| 1.2.1 鸡胚传代: |
| 1.2.2 早熟选育: |
| 1.2.3 理化处理: |
| 2. 核酸疫苗 |
| 2.1 折光体蛋白核酸疫苗: |
| 2.2 Hsp核酸疫苗: |
| 2.3 TA4蛋白核酸疫苗: |
| 2.4 λMzp5-7基因核酸疫苗: |
| 2.5 微线蛋白核酸疫苗及其他核酸疫苗: |
| 3. 亚单位疫苗 |
| 4. 重组卡介苗 |
| 5. 佐剂疫苗 |
| 6. 结语 |
四、柔嫩艾美耳球虫GZ株λMzp5-7重组抗原的免疫保护性实验（论文参考文献）
- [1]鸡球虫抗原及疫苗的研究进展[J]. 樊明明,吕玉金,吴玉臣. 江西畜牧兽医杂志, 2020(01)
- [2]鸡球虫病的免疫预防研究进展[J]. 康桂英. 中国畜牧兽医文摘, 2015(11)
- [3]鸡柔嫩艾美耳球虫RC株表面抗原SAG17、SAG18和未知蛋白HP基因的克隆与原核表达[D]. 许李丽. 西南大学, 2013(12)
- [4]鸡球虫病免疫预防研究现状[J]. 王秋悦,郑梅竹,杨鹏,任铁燕,倪静,师清博. 河北科技师范学院学报, 2013(01)
- [5]鸡四种艾美耳球虫重组蛋白免疫保护性研究[D]. 高云路. 南京农业大学, 2012(04)
- [6]鸡四种艾美耳球虫免疫调节型DNA疫苗混合免疫程序及其稳定性试验[D]. 赵胜杰. 南京农业大学, 2012(01)
- [7]RepairPSⅡ基因重组蛋白和DNA疫苗抗柔嫩艾美耳球虫保护效果[D]. 刘颖丽. 吉林大学, 2012(09)
- [8]堆型艾美耳球虫ADF基因和3-1E基因融合表达及其免疫保护性试验[D]. 刘义伟. 河北农业大学, 2012(08)
- [9]鸡球虫疫苗研究现状[J]. 赵蕾,于新友,王金良,李坤林. 动物医学进展, 2011(08)
- [10]鸡球虫病疫苗的研究进展[J]. 黄金贵,李运娜,张西臣. 中国生物制品学杂志, 2011(08)