一、重症肌无力患者胸腺提取液电泳及其活性分析（论文文献综述）
王泳心[1]（2012）在《乙酰胆碱受体亚基在重症肌无力合并胸腺瘤患者中表达的研究》文中研究指明背景及目的：重症肌无力（myasthenia gravis, MG）是一种获得性自身免疫疾病。经过多年大量的研究发现90%以上MG患者血清内可以检测到乙酰胆碱受体抗体（Acetylcholine receptor antibodies，AChR-Ab），因此已公认MG是一种内分泌疾病，是抗体作用于神经肌肉接头突触后膜乙酰胆碱受体（Acetylcholine receptor，AChR），导致神经肌肉交接处信号传递障碍。MG的发病机制及胸腺在MG发病中的作用尚未被阐明。多年来国内外学者在基因层面上研究胸腺与MG发病的关系，基本上都是针对胸腺的AChR亚单位基因的表达开展研究，但于胸腺AChR亚单位基因表达的观察结果并不一致。尽管有许多关于MG患者胸腺中AChR亚基基因表达的报道，并无明确说明是否有某种亚基的特殊表达。本研究欲通过对MG合并胸腺瘤患者的胸腺瘤组织内AChR内5个亚单位的检测，来探讨胸腺是否是MG患者自身致敏的起始部位及AChR5个亚单位是否为重症肌无力免疫学诊断方法，并同时对不同临床分期及胸腺瘤不同病理分型的MG患者AChR亚单位表达进行比较分析，研究其对各类MG患者的临床价值。方法：12例临床确诊为MG并接受胸腺完整切除，术后病理诊断为胸腺瘤的患者；12例行开胸手术切除部分正常胸腺并排除自身免疫性疾病及神经系统疾病的患者。分别于术中取以上24位患者的胸腺组织及肋间肌肉组织。通过RT-PCR方法分别检测每份胸腺组织及肌肉组织AchR的5个亚基，并测量其灰度值。根据MG患者切除胸腺瘤的病理类型和Osserman分型的不同进行各自分组比较，探讨AChR亚单位的表达。结果：胸腺瘤及胸腺中可以检测到AChR的5个亚单位，且胸腺瘤与正常胸腺中AChR各亚单位阳性率无明显差异性（P>0.05）；胸腺瘤中各AChR亚单位灰度值/内参灰度值均低于肌肉组织（P＜0.05）；MG肌肉AChR亚单位中除γ亚单位外，均高于正常肌肉亚单位（P＜0.05）；AChR-ε亚单位在A型与AB型胸腺瘤中完全表达，而在B型胸腺瘤中完全不表达；不同Osserman分型的胸腺瘤组织中AChR各亚单位表达无明显差异（P>0.05）。结论：胸腺中含有成人型AChR及胎儿型AChR，胸腺可能是MG自身免疫反应致敏的起始部位；胸腺瘤中成人型AChR样蛋白及胎儿型AChR样蛋白均较MG肋间肌及正常肋间肌低；MG患者肋间肌中成人型AChR为自身免疫的主要靶抗原；AChR-ε亚单位可能在A型与AB型胸腺瘤中特异表达；胸腺瘤组织中AChR各亚单位与MG病情严重程度的关系，需加大样本量行进一步研究确定。
高峰,路浩,崔新征,郭亮,杜英,张清勇[2]（2007）在《人增生型胸腺组织中重症肌无力相关蛋白鉴定》文中研究说明目的:筛选出增生型胸腺组织中的重症肌无力（MG）相关蛋白,并对其作出鉴定。方法:利用已经建立的胸腺组织蛋白质组双向电泳技术获得分离良好的SDS-PAGE凝胶,将凝胶中的蛋白点电泳转移到硝酸纤维素膜上,分别以异体MG患者血清、正常人血清和自身免疫病患者血清为第一抗体,进行免疫印迹试验;然后,在参考凝胶上挖取MG组特异显色点所对应的蛋白质点,经胶内胰蛋白酶消化,对所得多肽混合物进行基质辅助激光解析电离飞行时间质谱分析,得到肽质量指纹图谱（PMF）数据,登录网站http://www.matrixscience.com,用Mascot程序检索NCBInr数据库,鉴定蛋白质。结果:免疫印迹试验共获得5个MG特异显色点,编号为2、4、6、7、9;经质谱分析得到5个蛋白质PMF图谱,经数据库检索鉴定,这些蛋白分别为:异肽酶T、核因子p97、亚铁血红素结合蛋白2、肿瘤翻译受控蛋白1和角蛋白10。结论:利用免疫印迹试验筛选和质谱分析,成功鉴定出增生型胸腺组织中的5个MG相关蛋白,为进一步探讨这些蛋白在MG发生发展中的作用奠定了基础。
王桂叶,高峰,李静孟,方华,张清勇,王玉玲,张建立,赵明理[3]（2007）在《3种方法提取胸腺组织蛋白双向电泳纯化结果比较》文中研究说明目的:选择合适的胸腺组织蛋白质提取和纯化方法。方法:分别采用组织裂解液法、丙酮沉淀法和蛋白纯化试剂3种方法提取7例重症肌无力患者胸腺组织蛋白质,上样量为1mg蛋白,以17cmpI3～10固相pH梯度胶条做第一向等电聚焦,SDS-PAGE垂直电泳为第二向进行双向电泳（2-DE）,考马斯亮蓝染色,图像分析软件分析电泳图谱。结果:利用蛋白纯化试剂法提取的胸腺组织蛋白2-DE凝胶图像纵条纹、横条纹以及背景都明显减少,获得蛋白点数量较其他2种方法增加（P均<0.05）。结论:采用蛋白纯化试剂法提取胸腺组织蛋白,能够获得较好2-DE凝胶图像,为胸腺组织蛋白质组学的研究打下基础。
桂林艳[4]（2007）在《重症肌无力淋巴细胞亚群Fas表达及IFN-γ、TNF-α与AchRAb水平相关性研究》文中研究指明研究背景与目的：重症肌无力（myasthenia gravis，MG）是一种乙酰胆碱受体抗体（acetylcholine receptor antibody，AchRAb）作用于神经肌肉接头处（neuromuscular junction，NMJ）突触后膜乙酰胆碱受体（acetylcholine receptor，AchR）而引起的自身免疫性疾病。其发病多见于儿童，其致病机制目前尚未澄清。多数儿童MG患者存在体液免疫和细胞免疫功能异常，且有胸腺增生或胸腺瘤。Fas分子是细胞膜表面重要的凋亡相关分子之一，尤其与T细胞的细胞毒作用、诱导活化细胞死亡以及胸腺细胞阴性选择有关。近年来研究资料表明，通过实验MG动物模型和对儿童重症肌无力患者研究发现，外周血和胸腺淋巴细胞存在Fas基因突变引起Fas分子表达紊乱。为更进一步揭示Fas分子与胸腺细胞发育成熟以及与淋巴细胞亚群功能的关系，本研究用流式细胞仪对儿童重症肌无力患者胸腺细胞和外周血淋巴细胞亚群的Fas分子、CD4、CD8分子表达情况及产生的细胞因子IFN-γ、TNF-α进行分析，以揭示儿童MG的发病机制，为临床治疗提供一定的实验理论依据。方法：对10例MG患儿和10例同年龄非自身免疫病正常对照组胸腺采用机械分离法获取胸腺细胞，采用淋巴细胞分离液离心分离外周血淋巴细胞，用非抗凝血自然凝固后分离出血清。用荧光标记单克隆抗体（Fas-FITC、CD4-PE、CD8-Cy），经流式细胞仪测定细胞表面Fas、CD4、CD8的表达情况，用双抗体夹心法测定血清细胞因子的水平。统计学分析采用SPSS10.0软件对数据进行处理，以α=0.05作为检验标准。结果：1．儿童重症肌无力患者胸腺CD4+CD8+双阳性细胞百分率（42.12±9.70）明显低于对照组（85.25±4.53），CD8+细胞百分率（22.50±8.65）明显高于对照组（5.50±3.13）。儿童MG患者CD4+Fas+和CD8+Fas+胸腺细胞百分率与对照组有显着性差异，中P＜0.01。2．儿童重症肌无力患者外周血淋巴细胞膜表面Fas表达率（36.31±5.68）明显高于对照组，CD4+CD8-百分率（65.27±7.25）也高于对照组。CD4-CD8+百分率（20.71±8.06）低于对照组，与对照组有显着性差异，P＜0.05。3．儿童重症肌无力患者血清sFas水平高于对照组，P＜0.01，且与血清AchRAb水平呈正相关。4．儿童重症肌无力患者血清中细胞因子IFN-γ、TNF-α水平增高且与血清AchRAb水平呈正相关。结论：1．儿童重症肌无力患者胸腺细胞Fas表达降低，外周血淋巴细胞Fas表达增高说明重症肌无力患者存在胸腺细胞凋亡障碍和外周血淋巴细胞活化增强，这可能是MG发病的重要因素。2．IFN-γ、TNF-α与AchRAb水平正相关表明其可能参与自身AchRAb的形成，与自身反应性疾病的发生有关。
高峰,杨继要,崔新征,郭亮,杜英,张清勇[5]（2007）在《重症肌无力胸腺组织蛋白质组双向电泳方法的建立》文中研究表明目的:建立和优化重症肌无力（MG）胸腺组织蛋白质组双向电泳技术方法。方法:提取MG患者（n=3）增生型胸腺组织蛋白,以固相pH梯度胶条做第一向等电聚焦电泳,SDS聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳为第二向。在以上过程中分别对蛋白提取、等电聚焦程序（A、B、C、D）和凝胶染色方法等各个实验环节进行控制和优化,利用PDQuest7.1.1软件分析获得的二维凝胶图像。结果:①采用一步法提取胸腺组织蛋白质,第一向等电聚焦采用7cmIPG胶条,聚焦程序选择B,硝酸银染色。3例标本重复4次,共获12幅二维凝胶图像。随机选取1例标本的2幅图像,利用软件对2幅中的蛋白点进行匹配,匹配率为82.1%;3份样品共12幅凝胶图像的对比,获得3个共同存在的标志蛋白点,相对分子质量和等电点分别为:A点（82700,7.0）、B点（50700,5.76）和C点（33300,5.02）。②进一步优化上述实验条件,选择1例标本,采用两步法提取胸腺组织蛋白质,选用17cmIPG胶条,聚焦采用程序D,考马斯亮蓝染色,获得的二维凝胶图像与一步法（其他条件相同）比较。一步法可检测到蛋白质点326个,两步法可检测到562个蛋白点。结论:①建立了MG胸腺组织蛋白质组提取的方法。采用两步法可以更有效地提取胸腺组织蛋白质组。②利用优化后的实验方法,获得了MG胸腺组织蛋白二维凝胶图像,为开展MG胸腺组织蛋白质组学研究打下了基础。
高峰,程豪为,崔新征,郭亮,杜英,张清勇[6]（2006）在《增生型胸腺组织重症肌无力相关蛋白的鉴定研究》文中进行了进一步梳理目的筛选出增生型胸腺组织重症肌无力（myasthenia gravis,MG）相关蛋白,并对其作出鉴定。方法分别利用异体MG患者血清、正常人血清和自身免疫病患者血清为第一抗体,与电泳转移到硝酸纤维素膜上的蛋白点孵育,做Western Blot-ting试验;然后在利用双向电泳技术获得的参考凝胶上挖取MG组特异显色点所对应的蛋白质点,经胰蛋白酶胶内酶切,对所得多肽混合物进行基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（matrix assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS）分析,得到肽质量指纹图谱（peptide mass fingerprinting,PMF）数据,登陆http://prospector.ucsf.edu/ucs fhtml4.0/msfit.htm网站,用MS Fit程序在NCBInr.10.13.2004数据库检索,鉴定蛋白质。结果Western Blotting试验共获得5个MG特异显色点,编号为2、4、6、7、9;经质谱分析得到5个蛋白质PMF图谱,数据库检索这些蛋白分别为:2号蛋白点isopeptidaseT、4号蛋白点importin beta subunit和6号蛋白点SOUL protein。7号和9号蛋白点未能得到确认,需要更换检索条件或进行蛋白质测序才能进一步认定。结论运用蛋白质组学和Western Blotting研究方法,共获得5个MG相关蛋白,得到鉴定的三个蛋白分别为2号蛋白点isopeptidaseT、4号蛋白点importin beta subunit和6号蛋白点SOUL protein。
高峰[7]（2005）在《重症肌无力胸腺组织相关蛋白鉴定研究》文中研究指明目的 初步建立MG胸腺组织蛋白质组学研究方法，获得双向电泳凝胶图谱，筛选出胸腺组织重症肌无力相关蛋白，并对其作出鉴定。从而寻找MG发病新线索，帮助临床诊断和治疗。 方法 （1）提取3例MG患者增生型胸腺组织蛋白，以7cm pH3-10 IPG胶条做第一向IEF，12％SDS-PAGE垂直电泳为第二向，分析二维电泳系统的重复性；以17cm pH3-10IPG胶条做第一向IEF，评价分别由样品裂解液Ⅰ和Ⅱ组成的两种不同胸腺组织蛋白提取方法。通过对这些实验条件的优化，获得MG增生型胸腺组织蛋白双向电泳凝胶图谱。 （2）分别利用异体MG患者血清、正常人血清和自身免疫病患者血清为第一抗体，与电泳转移到硝酸纤维素膜上的蛋白点孵育，做Western Blotting试验，在2-DE参考凝胶上挖取MG组特异显色点所对应的蛋白质点，经胰蛋白酶胶内酶切，对所得多肽混合物进行MALDI-TOF-MS分析，得到PMF数据，登陆http://prospector.ucsf.edu/ucs fhtm14.0/msfit.htm网站，用MS Fit程序在NCBInr．10．13．2004数据库检索，鉴定蛋白质。
高峰,张清勇,杜英[8]（2005）在《胸腺与重症肌无力》文中进行了进一步梳理
阮丽荣,杜英,张清勇,李富广,王东升[9]（2000）在《重症肌无力患者胸腺提取液电泳及其活性分析》文中指出目的 :深入探讨胸腺在重症肌无力 （MG）发病中的作用。方法 :采用SDS PAGE电泳对MG患者胸腺提取液进行分析 ,并用MTT法研究了胸腺提取液对外周血单个核细胞和胸腺细胞增殖的影响。结果 :30 %MG患者胸腺提取液中存在异常蛋白 ,其相对分子质量小于 144 0 0 ,而在先天性心脏病患者胸腺细胞培养上清中未见这种蛋白。异常蛋白组MG患者的胸腺提取液对正常人外周血单个核细胞 （PBMC）增殖有显着的抑制作用 ,与非自身免疫病患者相比 ,差异有显着性 （P <0 .0 1） ,与其他非异常蛋白组MG患者相比差异有显着性 （P <0 .0 5 ） ,但对胸腺细胞的增殖未见显着差异。结论 :MG患者免疫功能的异常与胸腺提取液中小分子异常蛋白的存在有关 ,与MG的发病有关。
二、重症肌无力患者胸腺提取液电泳及其活性分析（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、重症肌无力患者胸腺提取液电泳及其活性分析（论文提纲范文）
（1）乙酰胆碱受体亚基在重症肌无力合并胸腺瘤患者中表达的研究（论文提纲范文）
| 前言 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第1章 绪论 |
| 第2章 综述 |
| 2.1 概述 |
| 2.1.1 重症肌无力概述 |
| 2.1.2 重症肌无力与胸腺的关系 |
| 2.2 乙酰胆碱受体的结构和功能 |
| 2.2.1 重症肌无力患者肌肉中乙酰胆碱受 |
| 2.2.2 胸腺中乙酰胆碱受体 |
| 2.3 胸腺切除术 |
| 2.3.1 胸腺的解剖 |
| 2.3.2 胸腺切除手术方法 |
| 第3章 材料与方法 |
| 3.1 标本与分组 |
| 3.1.1 MG 组 |
| 3.1.2 正常对照（NC）组 |
| 3.2 器材及试剂 |
| 3.2.1 试剂 |
| 3.2.2 器材 |
| 3.2.3 主要仪器 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 胸腺及肌肉标本的收集及处理 |
| 3.3.2 AChR 各亚基基因的检测 |
| 3.4 统计处理 |
| 第4章 结果 |
| 4.1 MG 组与正常对照组胸腺中 ACHR 各亚单位基因比较分析 |
| 4.1.1 AChR-a 亚单位测定结果 |
| 4.1.2 AChR-β亚单位测定结果 |
| 4.1.3 AChR-γ亚单位测定结果 |
| 4.1.4 AChR-δ亚单位测定结果 |
| 4.1.5 AChR-ε亚单位测定结果 |
| 4.2 MG 组胸腺瘤、MG 组肋间肌及对照组肋间肌中 ACHR 各亚单表达量比较 |
| 4.2.1 AChR-a 亚单位灰度值比较结果 |
| 4.2.2 AChR-β亚单位灰度值比较结果 |
| 4.2.3 AChR-γ亚单位灰度值比较结果 |
| 4.2.4 AChR-δ亚单位灰度值比较结果 |
| 4.2.5 AChR-ε亚单位灰度值比较结果 |
| 4.3 胸腺瘤 ACHR 各亚基阳性率在不同病理类型比较分析 |
| 4.4 胸腺瘤 ACHR 各亚基阳性率在不同 OSSERMAN 分型中比较分析 |
| 第5章 讨论 |
| 第6章 结论 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（4）重症肌无力淋巴细胞亚群Fas表达及IFN-γ、TNF-α与AchRAb水平相关性研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 论文 重症肌无力淋巴细胞亚群Fas表达及IFN-γ、TNF-α与AchRAb水平相关性研究 |
| 前言 |
| 实验材料 |
| 实验方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 重症肌无力发病机制研究进展 |
| 参考文献 |
| 主要缩略词一览表 |
| 致谢 |
（7）重症肌无力胸腺组织相关蛋白鉴定研究（论文提纲范文）
| 一、引言 |
| 二、正文 |
| 实验技术流程图 |
| 第一部分 重症肌无力胸腺组织蛋白质组双向电泳方法的建立 |
| 实验材料和方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 第二部分 重症肌无力增生型胸腺组织相关蛋白的鉴定研究 |
| 实验材料和方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 全文小结 |
| 参考文献 |
| 三、综述 胸腺与重症肌无力 |
| 四、英文缩略语表 |
| 五、后记 |
四、重症肌无力患者胸腺提取液电泳及其活性分析（论文参考文献）
- [1]乙酰胆碱受体亚基在重症肌无力合并胸腺瘤患者中表达的研究[D]. 王泳心. 吉林大学, 2012(10)
- [2]人增生型胸腺组织中重症肌无力相关蛋白鉴定[J]. 高峰,路浩,崔新征,郭亮,杜英,张清勇. 郑州大学学报(医学版), 2007(06)
- [3]3种方法提取胸腺组织蛋白双向电泳纯化结果比较[J]. 王桂叶,高峰,李静孟,方华,张清勇,王玉玲,张建立,赵明理. 郑州大学学报(医学版), 2007(04)
- [4]重症肌无力淋巴细胞亚群Fas表达及IFN-γ、TNF-α与AchRAb水平相关性研究[D]. 桂林艳. 郑州大学, 2007(04)
- [5]重症肌无力胸腺组织蛋白质组双向电泳方法的建立[J]. 高峰,杨继要,崔新征,郭亮,杜英,张清勇. 郑州大学学报(医学版), 2007(01)
- [6]增生型胸腺组织重症肌无力相关蛋白的鉴定研究[J]. 高峰,程豪为,崔新征,郭亮,杜英,张清勇. 中国实用神经疾病杂志, 2006(06)
- [7]重症肌无力胸腺组织相关蛋白鉴定研究[D]. 高峰. 郑州大学, 2005(11)
- [8]胸腺与重症肌无力[J]. 高峰,张清勇,杜英. 郑州大学学报(医学版), 2005(01)
- [9]重症肌无力患者胸腺提取液电泳及其活性分析[J]. 阮丽荣,杜英,张清勇,李富广,王东升. 河南医科大学学报, 2000(01)